食用大豆油中DNA的快速提取和转基因成分定性检测

食用大豆油中DNA的快速提取和转基因成分定性检测 江苏农业学报 ,.. . , , :? 食用大豆油中的快速提取和转基因成分定性 检测 王 澎, 金丽晨, 耿志明, 刘蔼民 江苏省农业科学院农业生物技术研究所,江苏 南京 摘要: 转基因生物 制品中转基因成分检测的难点在于深加工产品中的提取。本试验以食用大 豆油为研究对象。研究操作简单、费用低廉的大豆深加工产品提取的新方法。利用大豆内源基因 设计 引物,对所获得的进行检测,结果证实通过本方法提取的纯度足以进行反应。利用转基因大 豆转化载体序列设计引物,进一步对其转基因成分进行检测,结果表明,用本方法从转基因大豆油中提取的 含有转基因成分。 关键词:大豆深加工产品;大豆油;;检测 中图分类号:. 文献标识码: 文章编号: ?,? ,?, ?,,, :. , , , . ? . .. : ? ; ;; 随着转基因技术的发展,各种转基因产品逐步 前景。但转基因生物的广泛应用是否会对生态环境 走进人们的生活。 年起,中国开始耐除草剂转 和人类自身的健康造成不良影响,至今仍无定 论? 。各国均出台各种政策,对转基因生物及其产 基因大豆 转基因抗农达大豆 的进口,各种与耐除 草剂转基因大豆相关的产品全面进入市场。截止 品进行严格标识管理和控制。 年 月 日, 年 月底,中国同意转基因大豆进口 . 中国开始实行《农业转基因生物标识》,规 左右。转基因生物 因其抗逆性好,产量高, 定国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识 生产成本相对较低,具有较好的市场竞争性和应用 。 转基因产品的检测原理有二:一是检测遗传物 收稿日期:一 质中是否含有插入的外源基因 ;二是通过插入外 基金项目:江苏省农业生物学重点实验室开放课题源基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测 ,或 作者简介:王 澎 一 ,女,河南洛阳人,硕士,研究实习员,从事 是检测插入外源基因对载体基因表达的影响,主要 转基因安全研究。 通讯作者:刘蔼民,? ; . . 检测外源基因对插入位点附近基因影响及对其代谢王 澎等:食用大豆油中的快速提取和转基因成分定性检测 产物的影响。目前,基于技术的检测应 淀 次,除尽乙醇;用 溶解沉淀。所 用较广 。 得溶液直接用于反应 大豆深加工产品中含量较低,且受破坏较 . . 检测大豆油提取质量 利用 严重 ,提取难度较大,成为大豆深加工产品转基. 软件对大豆内源基因 序列 因检测的最大障碍。现有研究大多依赖各种试剂盒 设计引物,检测所得大豆油,引物序列见表 。 提取大豆深加工产品中的,花费较高 ;少数 反应体系如下: . , . , . ,. ,.研究通过其它手段提取,提取过程繁杂,较为 耗时 。本研究通过简易方法获得大豆深加工产 ,补加去离子水至 . 。扩增步骤为: 品??大豆油中的,且对其中的转基因成分进? ,循环 , , 【二 行定性检测,为大豆深加工产品的提取和转基次, ?延伸 。利用 %琼脂糖凝胶电泳 检测扩增产物。 因检测提供简便途径。 . . 检测大豆油中的转基因成分 目 材料与方法 前中国只发放了一种转基因大豆的安全证书,即加 . 材料 拿大孟山都公司开发的耐除草剂转基因大豆. . 试验材料 转基因大豆油为从超市购得的. . ,其转化表达盒示意见图 。 中粮集团生产的福临门一级大豆油 瓶身标注加工 原料为转基因大豆 。阴性对照为非转基因东北大 豆黑衣 号 由江苏省农业科学院食品质量与安 全检测所丁奎敏老师提供 ,阳性对照为进口转基 图 大豆基因表达盒示意图 因大豆 由连云港海关提供 。.. . 试剂缓冲液: /? .. ,无水乙醇, % 从数据库 ://.. ? 乙醇,反应试剂及电泳 购自大连宝生 . .中获得启动子、 ?终止子,及 物 公司 ;引物 自行设计,由上海生工序列,利用. 软件设计 公司合成 ;染色用溴化乙啶 购自南京生兴公司 。 引物 序列见表 ;采用双重巢式检测大豆油 . 方法 中的转基因成分。利用启动子序列设计 . . 食用大豆油中的提取 取大 上游引物,利用 ?终止子序列设计下游引物,命 豆油,与缓冲液混和,常温下置于磁力搅 名为 / .,对大豆油进行第 轮扩 拌器上搅拌混匀 ;将混合液转移至分液漏斗 增;以外源基因 序列设计引物,命名为 中静置,待分层后取下层水相,加入 . 东北大 ,对上一轮扩增产物进行第 轮扩增, 豆黑衣 号,以及 倍体积一 ?预冷的无 对扩增产物进行 %琼脂糖凝胶电泳。 水乙醇,上下颠倒混匀,一 ?静置 ; / 离心 ,弃上清, %乙醇洗涤沉 表 引物信息 江 农 业 学 报 年第 卷第 期 结 果 . 食用大豆油的提取及检测 .........?? 大豆油中含量极低,无法直接用琼脂糖凝 胶电泳检测所得的浓度。大豆特异内源基因 ??特异性较强,经分析,在现有基因数据库 ?? 中无其它高同源性的植物片段。因而,以 一 序列设计引物,对所得样品进行扩增, 若能够得到目的片段,则表明所得大豆油中含 有大豆基因组成分;若扩增后未得到目的片段,则有 两种可能,一是所得食用油浓度过低,质量较 差,不能用于反应;二是所得食用油破碎 :; :转基凶人豆; :尔北大豆黑衣 ; :大豆 油。 较严重,目的片段相对较大,无法通过扩增获 : ; : : : 得完整的目的片段。本试验采用成功获得大小为 : :.左右的目的片段 图 。证明本试验的 图 引物 / 对样品的第 轮扩增结果 提取方法能够从食用大豆油中提取,且所. / .得质量足以进行反应。 ?? ??。。。。。。。。。。。。。。。?? :; :大豆油; :东北大豆黑衣 ; :转基因大 豆 :; :大豆油; :东北大豆黑衣 ; :转基 大 : ; : ; :? 豆 。 ; : . :; : ; : ? 图 引物对样品的第 轮扩增结果 : : ..? 图 样品的扩增结果. 以启动子序列和 ? 终卜予序列设计引 . 大豆油中转基因成分的检测 物,对样品进行第 轮扩增,理想的扩增 利用转基因大豆 ? ? 的转化载体序列 产物基本为整个表达载体,而食用大豆油的中 启动子序列设计上游引物, 以 ? 终止 未必含有完整的载体序列,叮能只有外源序列的少 子序列设计下游引物,对食用大豆油进行 部分片段,因而第 轮扩增尤法获得长达儿 扩增。扩增结果显示,大豆油的电泳结果中并 的目的片段也在预料之中。继续利用转基冈大豆 无明显条带 图 。进一步利用外源基因 ?? ? 的外源基因 序列 ‘引物, 序列设计引物,对 述产物进行扩增,得 对第 轮扩增产物进行第 轮扩增,得到 剑大小约 的 的片段 图 。 的目的片段,初 证明大 汕中含有