三仙壮骨胶囊提取工艺研究

三仙壮骨胶囊提取工艺研究 ====================================================================== 作者:邓小慧，李淑贤，王霆，张丹，梁生旺 【摘要】 目的 优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳提取工艺。方法 采用高效 液相色谱法测定川续断皂苷VI的含量，并以川续断皂苷VI的含量作为指标， 采用正交试验考察三仙壮骨胶囊的最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为: 。结论 该提取方法合理、可行，为生产提加10倍量的水煎煮2次，每次1 h 供了实验依据。 【关键词】 三仙壮骨胶囊;提取工艺;高效液相色谱法;川续断皂苷VI Abstract:Objective To optimize the extraction procedure of ponents in Sanxianzhuanggu capsules. Methods Orthogonal design was used in the experiment and the content of asperosaponin VI was determined by HPLC. Results The ideal extraction process was: 2 times of extraction, 10 times of water, 1 hour of reflux. Conclusion The optimized extraction procedure is rational and feasible for the industry manufacture of the capsules. Key words:Sanxianzhuangu capsules; extraction procedure; HPLC; asperosaponin VI 三仙壮骨胶囊是由续断、淫羊藿、独一味、当归等几味中药组成，本品为 研制者常年行医的经验方，临床用于治疗跌打损伤、筋骨扭伤、瘀积肿痛。方 中续断、淫羊藿、独一味主要含有皂苷类成分及黄酮苷类成分，在水中溶解性 较好，故此三味药材采用水煎煮方式提取。本研究采用正交设计法，以川续断 皂苷VI为指标，用高效液相色谱法测定其含量,1-4,，以优选三仙壮骨胶囊 水提部位的最佳工艺。 1 材料与试剂 Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2996 PDA检测器, Empowers色谱 工作站， Diamonsil C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm，迪马公司)。 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司); BSZZ4S型电子分析天平(北京赛 多利斯仪器系统有限公司)。 川续断皂苷VI对照品(中国药品生物制品检定所，批号: );乙腈为色谱纯;水为屈臣氏蒸馏水;其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 正交试验设计 按处方称取续断、淫羊藿、独一味药材，加水进行煎煮，在煎煮过程中，采用L9( 34 )表安排正交试验，以续断中川续断皂苷?的含量为指标，对提取效果影响较大的加水量、煎煮次数及煎煮时间3个因素进行考察，各因素水平见表1。表1 因素水平表 2.2 川续断皂苷VI含量测定 2.2.1 色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm);流动相为乙腈水(体积比30?70);检测波长为210 nm;柱温为25 ?;流速为1 mL/min;进样量为10 μL。 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取川续断皂苷VI对照品3.09 mg，置2 mL容量瓶中，用甲醇溶解配制成质量浓度为1.545 mg/mL的对照品溶液。 2.2.3 供试品液的制备 取水提取液适量(相当于续断药材0.75 g)，置圆底烧瓶中，减压浓缩至干，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声提取30 min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2.2.4 曲线的制备 精密吸取对照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，依次注入高效液相色谱仪，各重复3次，峰面积。以川续断皂苷VI峰面积均值(A)对进样质量浓度(ρ)进行线性回归，得回归方程为A=191595.75ρ，r=0.999 8(n=6)。表明川续断皂苷VI在3.09,30.9 μg/mL之间与峰面积具有良好线性关系。 2.2.5 样品含量测定 精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下条件进行测定，测得的川续断皂苷?对照品和样品色谱图见图1。 2.2.6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，连续测定6次，结果RSD值为0.66%(n=6)，表明本法精密度良好。 2.2.7 重复性试验 分别取同一批号样品6份，按“2.2.3”项方法制备溶液，依法测定川续断皂苷?的含量，结果测得含量的RSD值为0.92%(n=6),表明本法重复性良好。 2.2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件，间隔不同时间进行测定，结果RSD值为0.50%(n=5)，表明供试品溶液在4 h内测定基本稳定。 2.2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品，分别加入一定量的对照品，置圆底烧瓶中，按“2.2.3”项方法制备供试品溶液并在上述条件下测定，其平均回收率为100.30%，RSD为2.84%(n=6)。 2. 3 正交实验结果 结果见表2、表3。表2 正交试验结果表3 方差分析表从表2、表3中可见，因素A、因素C对实验结果有显著影响，因素B对实验结果影响较小。综合正交实验结果及节约生产成本的角度考虑，确定最佳工艺为A3B2C2，即加10倍量水煎煮2次，每次1 h。按最佳工艺对3批样品进行验证实验，结果3批样品的平均含量分别为11.57、12.19和12.02 mg/粒，可见该工艺稳定可行。 3 讨 论 3.1 有关续断等药材成分提取的研究报道很多，综合文献研究和预试验， 采用水煎煮方式进行提取，并以川续断皂苷VI含量作为考察工艺的指标，采用L9(34)正交实验表进行试验，得出三仙壮骨胶囊的水提部位最佳工艺条件。该工艺简便可行，有良好的可操作性。 3.2 鉴于川续断皂苷?有防止骨质疏松、增强骨密度的作用,与续断的传统功效吻合,5,,本文对提取液中川续断皂苷?的含量进行了测定,其总量转移率为90.03%。 【参考文献】 ,1, 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005版一部,M,.北京:化学工业出版社，2005: 231. ,2, 谭洪根，林 生，张启伟，等.高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷?的含量,J,.中国中药杂志，2006，31(9):726-727. ,3, 马新飞，陆兔林，毛春芹,等.HPLC法测定不同续断炮制品中川续断皂苷?,J,.中草药，2007，38(5):707-708. ,4, 王初.发汗与不发汗续断中水溶性浸出物和川续断皂苷VI 的比较,J,.中草药，2007，38(6):865-866. ,5, 王岩,周莉玲,李锐.川续断的研究进展,J,.时珍国医国药，2004，4(13):233-234.