卵黄囊抗体制备及其应用研究进展

卵黄囊抗体制备及其应用研究进展 卵黄囊抗体制备及其应用研究进展 卵黄囊抗体制备及其应用研究进展 卵黄囊抗体制备及其应用研究进展-医学论文 【关键词】 卵黄囊抗体 卵黄囊抗体即卵黄免疫球蛋白是抗原免疫禽类后由卵黄中分离得到的特异性抗体。与哺乳动物来源的IgG比较，卵黄囊抗体具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高，同时具有特异性高、稳定性较好等优点，在疾病诊断、防治等诸多方面得到了广泛的应用，一直是生命科学相关科研领域的研究热点。本文就卵黄囊抗体的分离纯化方法及其应用研究进展作一综述。 1 卵黄囊抗体的基本结构及其性质 与哺乳动物血清免疫球蛋白相似，卵黄囊抗体的基本结构包括2条轻链和2条重链，分子量约为180kD。卵黄囊抗体的疏水性大于IgG。Lee和Kim等〔1,2〕研究表明，卵黄囊抗体具有良好的稳定性，对pH及酶等作用引起的失活效应有较强的抵抗力。 2 卵黄囊抗体的制备 21 实验动物的免疫 Schwarzkopf等〔3〕研究结果表明:经皮下注射的方法比肌肉注射能产生更高滴度的抗体，免疫间隔时间对抗体的产生影响较大。通常，初次免疫与第一次加强免疫之间的时间间隔至少4周。另有研究分别于第0d，10周及15周免疫产蛋鸡，获得了高达1?160000的抗体滴度。 22 卵黄囊抗体的分离 从卵黄液中分离卵黄囊抗体的关键是除去卵黄中高含量的脂肪及脂蛋白，以获得水溶性组分。根据纯度要求、技术工艺以及对环境的影响等因素，可以选择不同的分离方法。常见分离方法包括以下几种。 221 水稀释法 先将卵黄液用蒸馏水稀释10倍，调整pH值至50,52，4?静置6h以上，上清液即为水溶性组分。水稀释法工艺简单，若采用适当的方法进行纯化，可获得较高的回收率和纯度。 222 有机物沉淀法 聚乙二醇法是较常用的方法。Bizanov和Normantiene〔4〕用仙台病毒免疫产蛋母鸡，收获高免鸡蛋。以TBS作为缓冲液，将卵黄液稀释4倍后，加入35%的聚乙二醇6000，沉淀脂类，卵黄囊抗体保留在上清液中。应用这种方法从每毫升卵黄液中获得约45mg的特异性卵黄囊抗体，纯度达95%。 223 有机溶剂抽提法 脂类易溶于有机溶剂，可采用氯仿、丙酮等有机溶剂进行分离。 用经TBS冲洗过的鸡蛋黄制成15ml蛋黄液，加入40ml TBS充分混匀后加入40ml氯仿，冷冻离心，分三相。弃去氯仿层，保留水层，中间的半固体相用40ml TBS萃取，取水层，与前一步水层合并即为水溶性组分。 224 天然胶法 一些天然胶如卡拉胶和黄原胶等可用于卵黄抗体分离。将9倍体积的01%卡拉胶溶液与卵黄混合，离心得到水溶性组分。也可将卵黄先用双蒸水稀释1倍后再与4倍体积的黄原胶混匀，离心即得水溶性组分。使用天然胶法去除脂类效果较好，获得的水溶液中脂类含量少于04%。 225 中链脂肪酸法 辛酸是用于卵黄囊抗体分离最常用的中链脂肪酸。蛋黄用去离子水稀释75倍，混匀，离心，上清液再用醋酸盐缓冲液稀释2倍，调pH值至50，加辛酸至终浓度为1%，静置分层，卵黄囊抗体在水层中。