确保膜上无残留胶

确保膜上无残留胶 3. 信号弱或者无信号 原因: 解决 转膜不完全 1.转膜后，染胶以决定转膜效率 2.使用Memcode染膜以决定转膜效率 3.保证转膜时胶与膜充分结合 4.滤纸,膜,胶，电极方向正确装配 5.根据说明书，对膜进行处理如湿润 6.电转时防止过热 7.使用阳性对照或预染Marker 8.优化转移时间和电流 9.使用Pierce转膜缓冲液 10.保证样品处理时，样品不被破坏(抗原决定簇) 蛋白质与膜结合不充分 加20,甲醇于转膜缓冲液; 低分子蛋白质透过膜;使用小孔径膜 抗体 增加抗体浓度;抗体与抗原结合差;抗体丧失活性 抗原不足 增加上样量 抗原被封闭液遮蔽 试用不同的封闭液 优化封闭液中蛋白质浓度 缩短封闭时间 缓冲液里有叠氮钠 去掉叠氮钠 曝光时间太短 延长曝光时间 底物孵育时间太短 5分钟 膜的选择错误 Pico底物首先推荐使用NC，PVDF膜需要条件优化 Duro/Femto底物，推荐使用NC; PVDF;尼龙或电荷修饰的尼龙膜 底物丧失活性 Pico/ Duro底物室温稳定12个月 Femto底物室温稳定至少6个月 底物与二抗孵育发光 保证两种底物成分没有交叉污染 膜被剥离过 剥离会导致抗原丢失或变性 避免重复检测 膜上蛋白质被消化(gelatin) 封闭物质可能有蛋白质降解活性 蛋白质在储存过程中降解 重新制备样品 4. 非特异性条带