四逆散、归脾汤与温胆汤对慢性应激肝郁模型大鼠行为学的影响

四逆散、归脾汤与温胆汤对慢性应激肝郁模型大鼠行为学的影响 四逆散、归脾汤与温胆汤对慢性应激肝郁模型大鼠行为学的影响 【摘要】 【目的】观察疏肝方四逆散、养血健脾方归脾汤和理 气化痰方温胆汤对慢性应激肝郁模型大鼠行为学的影响，以进一步探 讨该模型的中医证候性质。【】选用SD大鼠40只，按10g/L蔗 糖水摄取率分层随机分为5组，即正常对照组、模型组、四逆散组(剂 量为5 6g?kg-1?d-1)、归脾汤组(剂量为19 6g?kg-1?d-1)、 温胆汤组(剂量为8 05g?kg-1?d-1);采用慢性应激刺激方法复 制肝郁证模型，观察各组大鼠体质量、血清皮质酮含量、10g/L蔗糖 水摄取率和强迫游泳中静止时间。【结果】模型组大鼠血清皮质酮含 量升高、蔗糖水摄取率降低、强迫游泳中静止时间延长,与正常对照 组比较差异均有显着性意义(P,0 05或P,0 01);四逆散组可 降低血清皮质酮含量、升高蔗糖水摄取率，缩短强迫游泳中静止时间， 与模型组比较差异均有显着性意义(P,0 05或P,0 01);归脾 汤组、温胆汤组各检测指标均无显着性改变(P,0 05)，各组大鼠 体质量增加量比较均无显着性差异(P,0 05)。【结论】本研究的 慢性应激大鼠模型属肝郁证模型，与心脾两虚及痰热内扰证无关。 【关键词】 慢性应激/中药疗法;肝郁证/中药疗法;四逆散/治疗应 用;归脾汤/治疗应用;温胆汤/治疗应用;疾病模型，动物;大鼠 Abstract: ObjectiveTo observe the effects of Sini Powder (SP)， Guipi Decoction (GD) and Wendan Decoction (WD)，which have the actions of soothing liver，nourishing blood and strengthening spleen，and regulating Qi and resolving phlegm respectively， on the behavior of rat models with liver Qi stagnation induced by chronic stress，and to explore the essence of traditional Chinese medical syndrome of this model.MethodsForty male Sprague Dawley rats were exposed to an unpredictable sequence of mild stressors for 21 days while being treated by SP (5 6 g?kg-1?d-1)，GD (19 6 g?kg-1?d-1) or WD (8 05 g?kg-1?d-1).According to the intake rate of 10g/L sucrose solution，the rats were divided into normal control group， model group，SP group，GD group and WD group by stratified randomization.Body weight，standing time during forced swimming test and intake rate of 10g/L sucrose solution were investigated during the whole procedure.Serum corticosterone content was detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Results In the model group，serum corticosterone content was increased，intake rate of sucrose solution was reduced，and standing time during forced swimming test was prolonged (P,0 05 or P,0 01 compared with those in the normal control group).SP counteracted the above changes in the mode group (P0 05 or P0 01)，but GD and WD had no effect on the above indexes (P0 05).The difference of body weight increase was insignificant between the 5 groups (P,0 05).Conclusion The rat model of liver Qi stagnation can be induced by chronic stress，which is different from the syndromes of deficiency of both heart and spleen and the interior disturbance of phlegm heat. Key words: CHRONIC STRESS/TCD therapy;STAGNATION OF LIVER QI/TCD therapy;SINI POWDER /therapeutic use;GUIPI DECOCTION/therapeutic use;WENDAN DECOCTION/therapeutic use;DISEASE MODELS，ANIMAL;RATS 证 候是中医学现代研究的关键科学问题之一。由于影响证候的因素复 杂、范围广泛以及伦理学等方面因素的制约，使证候发生发展机理的 研究很难深入，建立证候动物模型是摆脱这一困境的重要途径。肝郁 证是临床常见的基础性证候，已有用CCl4注射、艾叶注射或夹尾急 性激怒法、模具限制法等多种制作肝郁证动物模型的报道,1,，但这 些造模方法均因有种种缺陷，近年已很少应用。为了更好地模拟临床 肝郁证，我们采用慢性应激的方法初步建立了肝郁证大鼠模型,2,， 并从临床发病学特点、核心症状和3种治法代表方剂的治疗效应等方 面，分析了该模型的合理性，初步认为其证候性质属肝郁且与脾虚无 关,3-4,。在上述工作的基础上，本研究拟比较疏肝方四逆散、养血 健脾方归脾汤和理气化痰方温胆汤对该模型大鼠的行为学效应，以进 一步探讨该模型的中医证候性质。现报道如下。 1材料与方法 1 1药物、试剂及仪器 按照《方剂学》,5,确定方剂的组成，其中四逆散(《伤寒论》):柴胡6g，枳实6g，生白芍6g，炙甘草6g;归脾汤(《济生方》):白术9g，茯苓9g，黄芪g，龙眼肉g，炒酸枣仁g，人参6g，木香6g，炙甘草3g，当归9g，远志6g;温胆汤(《三因极一病证方论》):半夏6g，竹茹6g，枳实6g，橘皮9g，炙甘草3g，茯苓4 5g。以上各方用饮用水将中药免煎颗粒(首创大地药业有限公司)按成人(以60kg计)1日用量的14倍配制成悬浊液，其中四逆散浓度为0 56g/mL，归脾汤浓度为1 96g/mL，温胆汤浓度为0 805g/mL。蔗糖(CH22O11，分子量为342 29)购自北京化学试剂公司;皮质酮酶联免疫吸附试验(ELISA)测定试剂盒(批号:24110603)购自美国R&D公司。HY 2调速多用振荡器购自江苏金坛金城国胜实验仪器厂。 1 2动物、分组及给药 雄性SD大鼠40只(SPF级)，体质量190~210g，由北京维通利华实验动物公司提供，许可证号:SCXK(京)2002 0003;正常光照条件，自由摄取食水，驯养1周并进行10g/L蔗糖水摄取训练。禁水24h后，于第2天清晨8~9时测定1h的10g/L蔗糖水摄取量，计算摄取率，随后采用区组随机的方法，按10g/L蔗糖水摄取率划分区组，再按随机数字表法随机分为5组，每组8只。正常对照组群养，每天灌胃饮用水10mL/kg;慢性应激模型组(简称模型组)孤养，每天灌胃饮用水10mL/kg，并按程序施加造模刺激;慢性应激加四逆散组(简称四逆散组)每天灌胃剂量为5 6g/kg的四逆散悬浊液，并按程序施加造模刺激;慢性应激加归脾汤组(简称归脾汤组):每天灌胃剂量为19 6g/kg的归脾汤悬浊液，并按程序施加造模刺激;慢性应激加温胆汤组(简称温胆汤组):每天灌胃剂量为8 05g/kg的温胆汤悬浊液，并按程序施加造模刺激。普通饲料与饮用水在允许时可自由摄取。各组处理时间均为21d，每3d测定1次大鼠体质量，以调整灌胃药量。 1 3造模方法 ,2,刺激方法包括:夹尾1min，水平振荡160次/min共30min，4?冰水游泳5min，禁水24h，禁食24h，昼夜颠倒24h，45?热环境5min。上述刺激每天1种，每种刺激各3次，随机安排，使动物不能预知次日的刺激。 1 4血清 皮质酮测定 于末次刺激后次日，断头取血，4?放置3h后，4?离心15min(4000g)，分离血清，-40?保存备测。检测方法按试剂盒说明书操作。 1 5蔗糖水摄取率测定 根据文献,6,的方法操作。在正式实验前，先对大鼠进行蔗糖水摄取训练，即先用10g/L蔗糖水和饮用水同时喂养48h，然后断水24h，于次日清晨8~9时再次同时给予大鼠自由饮用10g/L蔗糖水和饮用水共1h，分别记录摄取量，根据下列公式计算蔗糖水摄取率(p摄取)，并在实验的第7、14、21天各重复测量1次。 p摄取=V蔗糖水(V蔗糖水+V饮用水)×100% 1 6强迫游泳中静止时间测定 根据文献,7,的方法进行。于末次应激24h后，先进行适应性强迫游泳15min，即将大鼠放入内径20cm、高60cm的圆形透明玻璃缸中，缸中加温度(25?1)?的温水，深约25cm，使大鼠在水中不能以后爪支撑身体、前爪攀附于缸壁，取出后用毛巾擦干放回笼中。每缸水仅使用1只大鼠。24h后再同样将大鼠放入水中，累计记录5min内大鼠在水中停止挣扎、呈漂浮状态的时间。每只大鼠仅进行1次实验，由两人同时观察记录，取平均值作为各大鼠强迫游泳静止时间的数据。 1 7统计学方法 采用SPSS13 0统计软件包进行随机区组设计的方差分析，组间两两比较的SNK q检验。 2结果 2 1各组大鼠体质量及血清皮质酮的变化 表1结果显示，各组大鼠体质量均有增加，但增加量差异无显着性意义(P,0 05)。模型组大鼠血清皮质酮含量显着升高，与正常对照组比较差异有显着性意义(P,0 01)。四逆散组大鼠血清皮质酮含量显着低于模型组(P,0 05)，与正常对照组比较差异无显着性意义(P,0 05)。归脾汤组、温胆汤组与模型组比较差异均无显着性意义(P,0 05)。表1各组大鼠体质量增加量及血清皮质酮的变化比较(略)