增效荧光光谱法测定片剂药物中的甲睾酮

增效荧光光谱法测定片剂药物中的甲睾酮 增效荧光光谱法测定片剂药物中的甲睾酮 第17卷第4期井学 V01.17No.4JOURNALOFANALYTlCALSC?ENCE 2001牛8月 Aug.2001 文章编号1006—6144(2001)04—0300—03 增效荧光光谱法测定片剂药物中的甲睾酮 颜承农.刘义庆姚礼峰张珍明潘祖亭 (1.武汉大学化学系,武汉,430072; 2.荆州师范学院化学系,湖北荆州,434100) 摘要:研究了甲幸酮与浓硫酸反应产物的荧光光谱性质,提出了利用面活性荆增 初步探讨了表面活性剂十:烷基硫酸钠 敏荧光光谱洲量甲幸酮含量的新, (SDS)的增教作用机理,井证实溶液中溶解氧对本实验体系有明显的荧光猝灭作甩 该法操作简便,检出限低,用于成品药物分析,结果令人满意. 美键词:甲幸酮;十:兢基硫酸钠;荧光光谱法;药特分析 中国分类号:O557.39;R917文献标识码:A 甲睾酮(化学名:17a一甲基一l7羟基雄甾一4一烯一3一酮,MethyItesoterone,简称MT,以下同)是一种 重要的甾体雄性激素类药物,在机体发育,生殖及体内平衡等方面起着重要作用.已报道的有关甲睾 酮测定方法有:紫外分光光度法,HPLC法和荧光光谱法等. 本文利用表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)的增敏和增稳作用,提出了一种灵敏度高,稳定性好的 荧光分析新方法,并初步探讨了有关作用机理此法用于测定片荆药物中MT的含量,分析结果满意 1仪器与实验方法 1+1仪器与试剂 F一4000荧光光度计(日本,日立公司);HA一180M电子分析天平(日本,AND公司). MT对照品(中国药品生物制品检定所),片剂(市售),十二烷基硫酸钠(SDS)(进口分装).MT标 准溶液:准确称取30+0mgMT对照品溶于无水乙醇,定容成100mL,浓度为300mg/L(9.92X10 moI/L).SDS溶液浓度为5,00X10,moi/L其余试剂均为分析纯,实验用水为二次石英蒸馏水. 1.2实验方法 准确移取MT溶液2.0mI,搅拌下加入8.0mL浓硫酸,放置1O,15min,缓缓加水至2O mL,流水冷却,转移至5OmL容量瓶中用二次水定窖准确移取,定量该溶液至25mI容量瓶中,加入 3.0mLSDS溶液,用水稀至刻度,测量其相对荧光强度,仪器独缝宽度(/)均为5ilm,扫描速度 120rim/min. 2结果与讨论 2.1体系的荧光激发光谱和发射光谱 有关MT溶液的荧光发射光谱,如图1所示可以看出,耒加入SDS,MT的荧光强度相对较弱;加 入SDS后,其荧光强度明显增强.而且,发射光谱波长在加入SDS之后左移了4DE. 2.2酸度的影响 收稿日期:20001016通讯联系人:播祖亭 300 第4期赢承农等:增效荧光光谱法制定片荆葑轴中的甲睾酮第17喜 试验了酸度对荧光强度的影响结果表明,酸性由弱变强时,体系的荧光强度逐步增强,在强酸性条 件下,荧光强度较大且稳定;在碱性条件下,荧光强度迅速减弱且荧光峰产生位移. 本文采用2.0mL MT溶液中加入8+0mL浓硫酸. 2.3表面话性剂的影响 许多荧光物质在胶柬体系中的量子效率和摩尔吸光 系数明显高于通常的水溶液n].本文实验了CTMAB, CPB,PVA,ArabGum,TritionX—lOO,SDS等表面活性剂 及CD对体系荧光强度的影响,发现SDS有明显的增敏 作用,而CTMAB和CD则使体系荧光强度明显降低 当SDS(5.00×10mol/L)取2.O,7.0mL时,荧光强度 最大且稳定,本文选择加入3.0mL(25mL容量瓶中). 2.4溶剂的影响 加入甲醇,苯和丙酮等粘度小和极性小的有机溶剂, 观察它们对体系荧光强度的影响.实验结果表明,当加入 粘度较小的有机溶剂且其用量(体积比)小于5O时,荧光 强度有一定程度的增加;但是当有机溶剂的量大于8O 时,荧光强度迅速下降当以乙醇作溶剂时,若体积比大于 9O,荧光强度下降80 2.5体系稳定性探讨 在加入SDS之前,体系很不稳定.将敞开的MT溶液 放置2h,荧光强度下降15;放置10h,则下降9O.若 将MT溶液密封,以固定体系中分子氧的量,10h后荧光 强度仅下降15.若向密封12h的溶液中加适量固体 SDS,并令其溶解,其荧光强度相当于向新配制的MT溶 液中直接加入适量固体SDS的85}而向敞开且放置12 h后的溶液中加入适量固体SDS,并令其溶解,其荧光强度 只有向新配制的MT溶液中直接加入SDS的1O.这一 事实说明了分子氧有较强的荧光猝灭作用,而SDS溶液对 分子氧的荧光猝灭作用有一定的抑制效应.实验结果还表 明:振动溶液也可使体系荧光强度下降;在紫外光照射下, 荧光强度的下降速度较快.这说明如果不加SDS,溶液中 的溶解氧,紫外线和振动等因素对MT溶液有不同程度的 荧光猝灭作用.在加入SDS后,体系的稳定性明显增强,其 荧光强度恒定且稳定.这就充分说明SDS对该实验体系有 明显的增稳作用.图2表明在SDS存在和不存在下,振动 和紫外光照射等因素对荧光强度的影响. 300350400 Fig.1Excitationspectra(aJandemission speelra(b)ofmethyltesoterone cMT一1.65)(10mol/L,一5.O0×10 mol/Li1,l'with3mLSDS,2,2,without SDS) Fig.2Effeclofvibrationandill~minationon thefluorescenceintensity ,3mL;2:without L:c一5.OOx100mo[门 SDS:Rea11ine:Effectofillumination;Broken 】ine:E{feetofvihrationiMT一165×10 mo[/L 从以上实验结果可以得出,分子氧是有效的荧光熄灭 剂].本实验中分子氧对体系荧光强度的影响,可能是溶解在溶液中的分子氧,使溶液中MT的激发单 线态发生改变而导致荧光猝灭.而加入适量SDS之后,MT溶液变成了胶体溶液,胶柬既可以保护溶液 中的MT不受分子氧熄灭剂的影响,又防止了MT分子中键的断裂或扭转,因而增强并稳定了荧光强 度. 2.6工作曲线硬检出限 在上述实验条件下,本体系在0.01,0.12mg/L范围内,荧光强度与MT的浓度呈良 好的线性关 301 第4期分析科学第17卷 系,相关系数为0.9996.本法的检出限为1.0×10一g/L. 2.7样品分析 准确称取片剂1O粒,研细,称取4份(每份约古MT3mg),分别用无水乙醇配成 50.0mL溶渣,按 文献踟方法处理,每份按实验方法平行测定5次;同时另称取样品4份,每份加入适 量标准品,照上述方 法处理,测其回收率.测定结果见表1. TaMe1Analyslsofthesamplesandrecovery() 以上结果表明,本法稳定性好,灵敏度高,线性范围宽,用于实际样品的分析,结果令 人满意. 参考文献: FI]O'malleyBW.ScientificAmerican[J],1976,234(2):3Z. FZ]中华人民共和国药典(二部)EM].北京:化学工业出版社,1995:161. E33AlkalayDavid,Khemanl,Lakshimieta1.J.Pharm.Sci.[J],1972,61(11):1746. [4]安登魁主编.药物分析(第二版)EM].北京:人民卫生出版社,1980:186. [53戚文彬,浦炳寅.表面活性剂与分析亿学[M].北京:中国计量出版社.1987:94. E6]马广慈主编.药物分析方法与应用[M].北京:科学技术出版社,2000:283. [7]SchwarzRP.Ana1.Chem.[J].1970,48:5Z4. AFluorescentSynergisticMethod fortheDeterminationofMethyltestosterone YANCheng—nong.,LIUYi—qing,YAOLi—feng',ZHANC-Zhen—ming,PANZu— ting (1.DepartmentofChemistry,WuhanUniversity,Wuhan,430072,China; 2.DepartmentofChemistry,CollegeofJinzhouTeachers,Jinzhou,434100,China) Abstract:Asimpleandhighlysensitivefluorescentsynergisticmethodforthedetermination of methyltestosteroneisreportedinthepresenceofsodiumdodeeylsulfate(SDS).Thedetectionlimitis 3.31×10一 tool/L.ThismethodhasbeensuccesfullyappliedtOthedeterminationofmethyltes- tosteroneintabletwithsatisfactoryresults. Keywords:Methyltestosterone(MT);Sodiumdodecylsulfate(SDS)iSpectrofluorimetry} Pharmaceuticalanalysis 302