【doc】HPLC法测定红花七厘散中血竭素高氯酸盐

【doc】HPLC法测定红花七厘散中血竭素高氯酸盐 HPLC法测定红花七厘散中血竭素高氯酸 盐 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月?859? 儿糖浆原料浓缩药液约1.5kg,加醋酸乙酯萃取6 次,每次2000mL,合并醋酸乙酯萃取液,蒸干,拌 样40g,上硅胶柱,氯仿一甲醇梯度洗脱,收集馏份. 采用高效液相制备的,从上述馏份中得到了6,_ 羟基一爵床定B对照品,并对其结构进行了解析.通 过物理,化学,色谱及光谱数据,确定6,_羟基一爵床 定B为一新木脂素化合物.采用《中国药典))2005年 版一部附录?E(4)不加校正因子的主成分自身对 照法,测得其质量分数为98以上,符合. 3.2测定波长的选择:将6一羟基一爵床定B对照品 溶液注入液相色谱仪,采用WatersTM996二极管阵 列紫外器对6,_羟基一爵床定B色谱峰进行紫外 扫描,结果分别在256.0ilm及305.7nm波长处有 最大吸收,但256.0nm波长处的响应值比305.7 nm波长处的响应值大,故选择检测波长为256nm, 结果灵敏准确. 3.3流动相的选择:采用乙腈一水为流动相,当其比 例达31:69时,6一羟基一爵床定B对照品的保留时 间约为19min左右,且在此条件下样品中6一羟基一 爵床定B与其他相关峰均能达到基线分离,阴性对 照无干扰. 3.4提取萃取次数的选择:根据制剂以及6一羟基一 爵床定B对照品的提取方法,对制剂醋酸乙酯提取 的萃取次数进行了考察,结果萃取次数为2,3,4,5 时,6’-羟基一爵床定B的质量浓度分别为10.41, 10.58,10.54,10.55t~g/mL.表明醋酸乙酯萃取提 取3次,基本将6一羟基一爵床定B提取完全.为了节 省溶剂和时间,故将萃取次数定为3次. References: [1]JiangsuNewMedicalCollege.DictionaryoyChineseMateria , ~ledica(中药大辞典)EM].Shanghai:ShanghaiPeopleS PublishingHouse,1977. Ez]ChP(中国药典)Es3.Vol1.1977. E3]WarashinaT,NoroT.Steroidalglycosidesfromtherootsof Metaplexisjaponica[J].Philo—chemistry,1998.49(7): 21O3—21O8. E43AsanoJ,ChibaK,TadaM,eta1.Antiviralactivityoflignans andtheirglycosidefromJusticiaprocumbensEJ3.Phyto— chemistry,1996,42(3):713—717. HPLC法测定红花七厘散中血竭素高氯酸盐 王杰,吴贵华,吕曙华 (天津市药品检验所,天津300070) 红花七厘散为天津中新药业集团股份有限公司 天津宏仁堂制药厂生产的中药成方制剂,其处方以 乳香,血竭,当归,三七等11味中药材组成,具有散 瘀,活血,消肿,止痛作用,用于跌打损伤,血瘀疼痛, 外伤出血.质量已收入《国家食品药品监督管理 局国家中成药标准汇编骨伤科分册》.处方中血竭具 有祛瘀定痛,止血生肌作用,与成品的功效相吻合. 因此,在原标准和相关文献报道q基础上,本实验 采用高效液相色谱法以血竭素高氯酸盐为定量指标 进行了测定,为该制剂的质量控制提供了保证. I仪器与试药 日本岛津LC一2O10A高效液相色谱仪.血竭 素高氯酸盐对照品购自中国药品生物制品检定所 (批号0811-9302).红花七厘散由中新药业集团股 份有限公司天津宏仁堂制药厂提供.乙腈为色谱纯, 甲醇,磷酸二氢钠,磷酸为分析纯,水为纯化水. 2方法与结果 收稿日期:2005—12-05 2.1色谱条件:色谱柱:PhenomenexC18柱(250 mmx4.6mm,5m);流动相:乙腈一0.05mol/L磷 酸二氢钠(35:65);柱温:40C;体积流量:1mL/ min;检测波长:440nm.理论板数按血竭素高氯酸 盐峰计不低于5000.色谱图见图1. 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备:取血竭素高氯酸盐对照 品适量,精密称定,加7磷酸甲醇制成18t~g/mL 的溶液,摇匀,即得. 2.2.2供试品溶液的制备:取装量差异项下的本 品,研细,取0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密 加入7磷酸甲醇25mL,称定质量,超声处理(功 率250W,频率33kHz)20min,放冷,再称定质量, 用7磷酸甲醇补足减失的质量,摇匀,用微孔滤膜 (0.45m)滤过,取续滤液,即得. 2.2.3阴性样品溶液的制备:按处方配比取除血竭 的各药,制成阴性对照,按供试品溶液制备方法处理. ? 860?中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006 年6月 一L *一血竭素高氯酸盐 *一dracohodinperchlorate 图1血竭素高氯酸盐对照品(A),红花七厘散(B)和阴性对照(C)的HPLC色谱图 Fig.1HPLCChromatogramsofdracohodinperchloratereferencesubstance( A), HonghuaQiliPowder(B),andnegativesample(C) 2.3线性关系考察:精密称取血竭素高氯酸盐对照表I红花七厘散中血竭素高氯酸盐的测定结果(一一2) 品l1.7mg置5OmL量瓶中,加7磷酸甲醇溶解 并稀释至刻度,摇匀.精密量取1,2,3,4,5mL置25 mL量瓶中,加7磷酸甲醇稀释至刻度,摇匀,吸取 1OL注入液相色谱仪,测定峰面积值.以进样量为 横坐标,峰面积为纵坐标,得回归方程:Y一 746124.46X一3539.65,r一0.9999,线性范围为 0.0936,0.4680tzg. 2.4精密度试验:精密吸取供试品溶液(批号 000201)10L,连续进样5次,结果其峰面积的 RSD为0.94. 2.5稳定性试验:取本品(批号000201)供试品溶 液在0,2,4,6,8h进样,测定各自血竭素高氯酸盐 峰面积值,计算得其RSD为0.13,表明供试品溶 液在8h内基本稳定. 2.6重现性试验:取同一批样品(批号000201)5 份,制备供试品溶液,进样测定,结果血竭素高氯酸 盐平均质量分数为1.581mg/g,RSD为0.96. 2.7加样回收试验:取血竭素高氯酸盐对照品加 7磷酸甲醇分别制成0.234mg/mL的溶液,备用. 精密称取样品0.21g(批号000201,含血竭素高氯 酸盐为1.581mg/g)5份,精密加入上述对照品溶 液各1mL,制备供试品溶液,进样,测定,结果平均 回收率为101.1,RSD为1.4. 2.8样品测定:取样品4批,制备供试品溶液,进 样,测定,结果见表1. 3讨论 3.1磷酸甲醇质量浓度的考察:取本品(批号 0002O1),分别精密称取4/9,每份0.3g,精密加入 Table1DracohodinperchlorateinHonghua QiliPowder(n一2) 批号血竭素高氯酸盐/(mg?g一) 1.58 1.28 1.64 1.32 3,5,7,8磷酸甲醇25mL,超生处理2O min,其他按照供试品处理方法制备供试品溶液,进 样1OL,测定,结果血竭素高氯酸盐的质量分数分 别为1.14,1.46,1.58,1.57mg/g.实验结果表明, 磷酸甲醇质量浓度定为7较为适合. 3.2提取时间的考察:取本品(批号000201),分别 精密称取3份,精密加入7磷酸甲醇25mL,超声 提取时间分别为1O,2O,30min,其他按照供试品处 理方法制备供试品溶液,进样1OL,结果血竭素高 氯酸盐的质量分数分别为1.45,1.58,1.46mg/g. 实验结果表明7磷酸甲醇提取时间定为20min 较为合适.《中国药典~2000年版一部血竭的测定 中,使用3磷酸甲醇进行溶解,而本实验中发现磷 酸的质量浓度对其溶解性有影响,试验结果表明 7的磷酸甲醇溶解最好. References: [1]WangTS,ChengDY,LiY.Determinationofdracohodinin GutaiCapsulesbyHPLCEJ-I.ChinJExpTraditFormu(中 国实验方剂学杂志)2005.11(4):16-17. [2]ZhangLM,YangL,ChangL.Determiantionofdracohodin inWeiyinguleCapsulesbyHPLCEJ-I.LishizhenMedMater MedRes(时珍国医国药),2002,13(6):331—332. [3]ZhuHD,YangYR,LiJY.Determinationofdracohodinin KezhiSuppositorybyHPLC口].ChinaPharm(中国药师), 863. 2004,7(11):862— ?? ?? ????