肺鳞癌、腺癌中Survivin表达及其与VEGF和P53表达的相关性研究

肺鳞癌、腺癌中Survivin表达及其与VEGF和P53表达的相关性研究 肺鳞癌、腺癌中Survivin表达及其与VEGF和P53表达 的相关性研究 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 肺鳞癌、腺癌中 Survivin 表达及其与 VEGF 和 P53 表达的 相关性研究 EXPRESSION AND CORRELATIONS OF SURVIVIN 、VEGF AND P53 IN LUNG SQUAMOUS CELL CARCINOMAS AND ADENOCARCINOMAS 作者姓名:王 磊 学生学号:1087229257 指导教师:钟 f 主任医师 学科专业:外科学(胸心外) 培养单位:上海交通大学医学院附属新华医院 答辩日期:2010年 5月 13日 1 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 肺鳞癌、腺癌中 Survivin 表达及其与 VEGF 和 P53 表达的 相关性研究 EXPRESSION AND CORRELATIONS OF SURVIVIN 、VEGF AND P53 IN LUNG SQUAMOUS CELL CARCINOMAS AND ADENOCARCINOMAS 作者姓名: 王 磊 申请学位: 硕 士 导 师: 钟 f 主任医师 研究方向: 干细胞与胸部疾病 学科专业: 外科学(胸心外) 培养单位: 上海交通大学医学院附属新华医院 答辩日期: 2010 年 5 月 13 日 关 键 词: 肺鳞癌; 肺腺癌; Survivin ; VEGF ; P53 ; 2 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外， 本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成 果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明 确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 日期: 年 月 日 3 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规 定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和 电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密?，在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密?。 (请在以上方框内打“?”) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 4 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 肺鳞癌、腺癌中 Survivin 表达 及其与 VEGF 和 P53 表达的相关性研究 5 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 摘 要 非小细胞肺癌 non-small-cell lung cancer, NSCLC 是支气管肺癌的 主要类型, 约占肺癌总病例数的 80%,85% 。NSCLC 的发生可能与于 细胞凋亡抑制、肿瘤 血管形成、抑癌基因失活等密切相关。Survivin 属凋亡抑制蛋白 inhibitor of apoptosis protein，IAP 家族，是迄今为止发现的最具特异性的肿瘤标志蛋白，在 几乎所有肿瘤发生中起正性调节作用。生物学上具有抗凋亡、促进细胞增殖、血 管生成等功能，被认为是抗肿瘤药物的新型靶点。血管内皮生长因子、P53 蛋白 是研究较为深入的与肿瘤发生发展密切相关的蛋白，对肿瘤血管形成、肿瘤细胞 凋亡等起重要作用。 新近研究表明，凋亡抑制因子――Survivin 可能是内源性肿瘤抑制网络的通 用靶位，VEGF 、P53 分别作用于 Survivin 后调节细胞凋亡与存活。目前国内关 于 Survivin 在肺鳞癌、腺癌表达情况及与 VEGF 、P53 相关性研究相对较少，本 研究采用免疫组织化学 Envision 二步法 检测 Survivin、VEGF 和 P53 在肺鳞癌、 腺癌组织及肺良性病变组织中的表达情况，探讨 Survivin 在肺鳞癌、腺癌中的表 达和临床意义及其与 VEGF 、P53 表达的相关性。 6 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 第一部分 肺鳞癌、腺癌组织标本收集与筛选 目的 研究肺鳞癌、腺癌组织标本搜集处理流程并进行预实验。 方法 按入组、排除标准搜集组织标本，采用免疫组织化学(Envision 二步法)检 测 Survivin 在肺鳞癌、腺癌组织的表达情况。 结果 Survivin 在肺鳞癌、腺癌中的表达可位于癌细胞的细胞核与细胞浆,阳性细胞 内见棕褐色颗粒。VEGF 在肺鳞癌、腺癌中的表达主要位于癌细胞的细胞浆，阳 性细胞内见棕黄色颗粒。P53 在肺鳞癌、腺癌中的表达主要位于癌细胞的细胞核， 同时可见细胞浆的弱表达。 结论 Survivin、VEGF 、p53 在肺鳞癌、腺癌组织标本表达明显，三者协同表达可 能是促进肺癌的恶性进展的重要因素。 关键词 Survivin; VEGF; P53; 标本搜集; 预实验 7 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 第二部分 Survivin 在肺鳞癌、腺癌组织中的表达及其在内 源性肿瘤抑制网络中的通用靶位作用 目的 探讨 Survivin 在肺鳞癌、腺癌组织中的表达、临床病理相关性并阐述其在内 源性肿瘤抑制网络中的通用靶位作用。 方法 采用免疫组织化学(Envision 二步法)检测 Survivin 在 116 例肺鳞癌、腺癌 组织及 15 例肺良性病变组织中的表达情况。 结果 Survivin 阳性率为 62.1% (72/116 )，显著高于肺良性病变组织的 0 0/15 ; Survivin 表达与肺鳞癌、腺癌的低分化(P 0. 05 、淋巴结转移呈正相关(P 0. 05 ，与患者预后负相关 P 0.05 。 结论 Survivin 的表达与肺鳞癌、腺癌的低分化、淋巴结转移正相关;过度 表达提 示预后不良;Survivin 有望成为肺癌诊断和基因治疗的新靶点。 关键词 Survivin ; 肺癌; 内源性肿瘤抑制网络;通用靶位; 8 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 第三部分 Survivin 在肺鳞癌、腺癌组织中的表达、临床意 义及其与 P53 表达的相关性 目的 探讨 Survivin 在肺鳞癌、腺癌组织中的表达、临床意义及其与 P53 表达的临 床病理相关性。 方法 采用免疫组织化学(Envision 二步法)检测 Survivin 和 P53 在 65 例肺鳞癌、 腺癌组织及 15 例肺良性病变组织中的表达情况。 结果 Survivin、P53 的阳性率分别为 58.5% (38/65 )、53.8% (35/65 )，显著高于 肺良性病变组织的 0 0/15 、0 % 0/ 15 ;Survivin 表达与肺鳞癌、腺癌的低分 化(P 0. 05 、淋巴结转移呈正相关(P 0. 05 ，与患者预后负相关 P 0.O5 ; P53 的表达与肺癌组织的分化程度、TNM 分期及淋巴结转移均有关 P 0 (05 ; 并且 Survivin 表达与 P53 表达呈正相关 P 0. 05 。 结论 Survivin 的表达与肺鳞癌、腺癌的低分化、淋巴结转移正相关;过度表达提 示预后不良;Survivin 有望成为肺癌诊断和基因治疗的新靶点;survivin 和 p53 的协同表达可能是促进肺癌的恶性进展的重要因素。 关键词 Survivin ; P53 ; 肺癌; 免疫组织化学; 9 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 第四部分 肺鳞癌、腺癌中 Survivin 表达及其与 VEGF 和 P53 表达的相关性研究 目的 探讨肺鳞癌、腺癌组织中 Survivin 表达、临床意义及其与 VEGF 、P53 表达 的相关性。 方法 采用免疫组织化学(Envision 二步法)检测 Survivin、VEGF 和 P53 在 116 例肺鳞癌、腺癌组织及 15 例肺良性病变组织中的表达情况。 结果 Survivin、VEGF 、P53 的阳性率分别为 62.1% (72/116 ) 、72.4 % (84/116 )、 55.2%(64/116 )，显著高于肺良性病变组织的 0 0/15 、13.3%(2/15 )、0 % 0/ 15 ; Survivin 表达与肺鳞癌、腺癌的低分化(P 0. 05 、淋巴结转移呈正相关(P 0. 05 ，与患者预后负相关 P 0.O5 ;VEGF 和 P53 的表达与肺癌组织的分化程度、 TNM 分期及淋巴结转移均有关 P 0 (05 ;并且 Survivin 表达与 VEGF 、P53 表 达呈正相关 P 0. 05 。 结论 Survivin 的表达与肺鳞癌、腺癌的低分化、淋巴结转移正相关;过度表达提 示预后不良;Survivin 有望成为肺癌诊断和基因治疗的新靶点;Survivin、VEGF 和 P53 三者的协同表达可能是促进肺癌的恶性进展的重要因素。 关键词 Survivin ; VEGF ; P53 ; 肺癌; 免疫组织化学; 10 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 EXPRESSION AND CORRELATIONS OF SURVIVIN 、 VEGF AND P53 IN LUNG SQUAMOUS CELL CARCINOMAS AND ADENOCARCINOMAS 11 上海交通大学医学院 2008 级硕士学 位论文 ABSTRACT Non-small-cell lung cancer, the primitive type of primary bronchogenic carcinoma, accounts for 80%,85% of lung carcinoma and is closely related to inhibition of cell apoptosis, tumor angiogenesis and inactivation of tumor suppressor genes. Survivin is the smallest member of the Inhibitor of Apoptosis IAP gene family. Originally described as cell survival factors that target caspases, we now know that IAPs have a much broader portfolio of functions, encompassing signaling pathways, cell division, metabolism and adaptation to unfavorable environments as well as a new target of antineoplastic drugs. VEGF and P53 are being studied deeply because they all play great important roles on tumor angiogenesis and cell apoptosis. Preclinical studies suggest that IAP factor survivin may be a global target of intrinsic tumor suppression networks,which is related to cell apoptosis and cellular survival of VEGF and P53. While recent researches on expression of survivin in lung squamous cell cacinomas and adenocarcinomas is few in China. So we explore the expressions and correlations of survivin、VEGF and p53 in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas as well as in benign pulmonary disease tissue using immunohistochemica1 staining Envision Two Step Method . 12 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 Part 1 Collection and selection of tissue specimen about lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas Objective To study the process of collecting and tackling the tissue specimen about lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas and to perform prepare experiment. Methods The tissue specimen were examined by immunohistochemica1 staining Envision Two Step Method after being gathered by the enterer and elimination standard. Results Survivin was both located in the cytoplasma.and cell nuclei; VEGF was predominantely visualized in cytoplasm while P53 was maimly present in cell nuclei. Condusion The expression of Survivin、VEGF 、P53 is significant in the tissue specimen of lung squamous cell cacinomas and adenocarcinomas. Co-operative Expression of Survivin、VEGF 、P53 probably play important roles during malignant progression of human lung cancer. Key words Survivin;VEGF; P53; Tssue specimen collectiion ; Prepare experiment 13 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论 文 Part 2 Expression of Survivin in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas and its role of global target in the Intrinsic Tumor Suppression Network Objective To explore the expression and clinical significance of survivin in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas and its role of global target in the Intrinsic Tumor Suppression Network. Methods The expression of survivin was examined in 15 benign pulmonary disease BPD patients and 1 16 cases of lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas using immunohistochemica1 staining Envision Two Step Method . Results The positive expression rate of survivin was 62.1% (72/116 ) in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas, which was obviously higher than that of BPD. The expression of survivin was positive1y associated with the poor differentiation (P 0. 05 and lymph node metastasis (P 0. 05 respective1y, however, it was negative correlated with the prognosis. Condusion The expression of survivin is positively associated with the poor differentiation and lymph node metastasis respectively;The over-expression of survivin suggests bad prognosis; Survivin gene may be identified as a defining diagnostic marker and a 14 上海交通大学医学院 2008 级硕士学 位论文 potential therapeutic target; Key words Survivin ; Lung cancer ; Intrinsic Tumor Suppression Network; Global target 15 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论 文 Part 3 Expression and clinical significance of Survivin and its correlation with P53 in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas Objective To explore the expression and clinical significance of survivin and its correlation with P53 in Lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas. Methods The expression of survivin and P53 were examined in 15 benign pulmonary disease BPD patients and 65 cases of lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas using immunohistochemica1 staining Envision two Step Method . Results The positive expression rate of survivin and P53 was 58.5% (38/65 ) and 53.8 % (35/65 )respectively in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas, which was obviously higher than that of BPD. The expression of survivin was positive1y associated with the poor differentiation (P 0. 05 and lymph node metastasis (P 0. 05 respective1y. However, it was negative correlated with the prognosis; The expression of P53 was associated with the poor differentiation、TNM state and lymph node metastasis of lung cancer respective1y (P 0. 05 ).Besides, The expression of survivin and P53 were corre1ated with each other P 0. 05 . Condusion The expression of survivin is positively associated with the poor differentiation 16 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位 论文 and lymph node metastasis respectively; The over-expression of survivin suggests the bad prognosis; Survivin gene may be identified as a defining diagnostic marker and a potential therapeutic target; The concurrent expression of survivin and p53 may be an important factor promoting the deve1opment of lung cancer ( Key words Survivin ; P53 ; Lung cancer ; Immunohistochemistry 17 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论 文 Part 4 Expression and correlation of survivin、VEGF and P53 in lung squamous cell cacinomas and adenocarcinomas Objective To explore the expressions and correlations of survivin 、VEGF and p53 in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas ( Methods The expressions of survivin ，VEGF and p53 were examined in 15 benign pulmonary disease BPD patients and 116 cases of lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas using immunohistochemica1 staining Envision Two Step Method ( Results The positive expression rate of survivin、VEGF or P53 was 62.1% (72/116 ) 、 72.4 % (84/116 )、55.2% (64/116 )respectively in lung squamous cell carcinomas and adenocarcinomas, which was obviously higher than that of BPD. The expression of survivin was positive1y associated with the poor differentiation (P 0. 05 and lymph node metastasis (P 0. 05 respective1y,however, it was negative correlated with the prognosis; The expression of VEGF or p53 was associated with the poor differentiation、TNM state and lymph node metastasis of lung cancer respective1y (P 0. 05 ).Besides, The expressions of survivin，VEGF and p53 were corre1ated with each other P 0. 05 . Condusion 18 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位 论文 The expression of survivin is positively associated with the poor differentiation and lymph node metastasis respectively;The over-exp ression of survivin suggests the bad prognosis; Survivin gene may be identified as a defining diagnostic marker and a potential therapeutic target;The concurrent expression of survivin，VEGF and p5 3 may be an important factor promoting the deve1opment of lung cancer ( Key words Survivin ; VEGF ; P53 ; Lung cancer ; Immunohistochemistry 19 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位 论文 目 录 英文缩略语表 前言 第一部分 肺鳞癌、腺癌组织标本收集与筛选 引言 材料与方法 结果 讨论 参考文献 第二部分 Survivin 在肺鳞癌、腺癌组织中的表达及在内源性肿瘤抑制网 络中其 通用靶位作用 引言 材料与方法 结果 讨论 参考文献 第三部分 Survivin 在肺鳞癌、腺癌组织中的表达、临床意义及其与 P53 表达的 相关性 引言 材料与方法 结果 讨论 1 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位 论文 参考文献 第四部分 肺鳞癌、腺癌中 Survivin 表达及其与 VEGF 和 P53 表达的相关 性研 究 引言 材料与方法 结果 讨论 参考文献 课题总结 附录:文献综述及攻读学位期间发表的部分文章 致谢 已发表文章目录 2 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 英文缩略词 缩略语 英文全称 中文全称 NSCLC non - small cell lung cancer 非小细胞肺癌 SCLC small cell lung cancer 小细胞肺癌 EPR21 effector cell protease receptor 21 效应细胞蛋白酶受体21 IAP inhibitorof apoptsis protein 凋亡抑制蛋白 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 PDGF plateletderived growth factor 血小板源生长因子 TSG Tumorsuppressorgen 肿瘤抑制基因 Ang - 1 angiopoietin 1 血管生成素- 1 PA plasminogen activator 纤溶酶原激活物 PAI-1 plasminogen activator inhibitor-1 纤溶酶原激活物抑制剂-1 Rb the retinoblastoma protein 视网膜母细 胞瘤蛋白 APC Adenomatous Polyposis Coli 腺瘤性结肠息肉病 wt - P53 wild-type P53 野生型P53 PTEN phosphatase and tensin homolog 人第10号染色体缺失的磷 酸酶及张力蛋白同源的基 deleted on chromosome ten 因 BPH benign pulmonary disease 肺良性病变 1 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 前 言 肺癌的发病率占全部癌症发病率的 12. 8 % , 占整个癌症死亡率的 17. 8 %[1 ] 。肺癌已成为当今世界上最常见肿瘤及致死性疾病,1996 年美国死于肺癌者 达 158 700 人，我国预计 2025 年死于本病者将达到 90 万[2 ] 。非小细胞肺癌 non - small cell lung cancer ,NSCLC 包括腺癌、鳞癌、大细胞癌、未分化癌[3],，占原 [4 ] 发性肺癌的 80 , ,是胸外科治疗的重要对象。但 65 , 的NSCLC 患者得到确诊 时已属于晚期，常已失去手术机会，即使部分有机会接受手术的I期和?期NSCLC 患者，也由于术后出现了局部复发和远处转移而导致术后总体效果不佳, 预后甚 差，其 5 年生存率仅 13 %，所以发现尤其是早期发现和诊治非小细胞肺癌就显 得尤为重要。 现在认为导致癌症高发病率的根本原因是原癌基因和抑癌基因平衡失调面 导致点突变、基因扩增、或过度表达[5] 。而术后生存率低的最主要原因是肿瘤 [6] 的浸润性生长及转移 ;近年来发现的Survivin 是迄今发现最强的凋亡抑制因 子[7] 。Survivin 选择性地在肿瘤中表达, 已发现在结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、 胰腺癌、神经纤维瘤和胃癌中Survivin 的高表达与转移 和浸润相关[8] ，而在正常 成熟组织中Survivin表达为阴性，Survivin 在肺癌中的表达规律国内报道相对较 少。Survivin可能与肿瘤的分期、病理类型、预后等有关。研究survivin在肺癌发 生发展中的作用，对非小细胞肺癌的早期诊断、病理分型分期、预后判断、靶向 治疗等可能具有重要的临床意义。 Survivin 基 因由Ambrosini 等 [9] 于 1997 年利用效应细胞蛋白酶受体 21 effector cell protease receptor 21，EPR21 cDNA在人类基因组库中筛选克隆出 2 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 来，并定位于人类染色体 17q25 上，全长l4.7 kb，由 3 个内含子和 4 个外显子组 成，编码 142 个氨基酸，分子量为 16 500。与其他IAP成员不同，survivin只有一 个含半胱氨酸、组氟酸的杆状病毒IAP重复区 BIR 结构域，而没有锌指环结构， 也无caspase募集区。人类Survivin基因通过剪接可产生 5 种不同基因亚型，即 Survivin基因野生型、Survivin基因 2B型、Survivin基因DEX3 型、Survivin基因 3B型、Survivin基因 2A型[10] 。 Survivin是分子量最小的凋亡抑制因子，起初被认为是以caspases为靶点的细 胞生存素。随着研究的深入，survivin更为广阔的功能不断被发现，包括 信号传 导通路作用、细胞分化功能、新陈代谢效应以及适应不良环境的能力等[11] 。 Survivin功能多样，近年来已证实了它还可作为有丝分裂调节因子、广谱细胞保 护因子、细胞应激反应效应因子发挥作用。这些作用依赖于多种蛋白调控与互动， 包括控制有丝分裂的染色体乘客蛋白与微管蛋白、对抗凋亡的其他凋亡抑制蛋 [12] 白、调节细胞应激的热休克蛋白等的相互作用 等 。 Survivin主要分布于胚胎及分化未成熟的组织中，在成人体内除胸腺、生殖 腺、血管内皮细胞等有微量表达外，所有分化成熟的组织，包括肺、肝、胰、脾、 肾、外周血白细胞、淋巴结、心脏组织、骨骼肌等均无表达。而大多数常见恶性 肿瘤组织，如肺癌、胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌和 50 , 以上 霍奇金淋巴瘤中表达水平异常升高[9] 。此外，近年来在食管癌、肝癌等组织中也 发现Survivin高表达[13] 。 国内刘树立[14]等用免疫组织化学SP法检测了survivin、Ki67 和p53 在 112 例 肺鳞癌、腺癌中的表达情况。结果survivin、Ki67 和p53 的阳性率分别为 59.8 % 67 ,112 、46.4% 52 ,112 和 51.8% 58 ,112 ，sunrivin 的表达与肺癌的低分化 3 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 P 0.009 和淋巴结转移正相关(P 0.014 )。Ki67 和p53 的表达分别与肺鳞癌、腺 癌的低分化程度负相关 P 0.05 。 韩丕华[15]等回顾性分析 87 例非小细胞肺癌 NSCLC 的临床病理资料, 采用 免疫组化SP法检测NSCLC 中survivin、p53 和Bcl22 的表达。用Spearman等级相关 系数检验其与NSCLC发生的相关性。结果显示:不同分期的NSCLC在survivin阳 性表达率方面存在显著差异，且survivin表达与病理学类型、有无淋巴结转移等 密切相关。P53 表达也与组织学类型、淋巴结转移相关。 王萌[16]等研究survivin、VEGF 基因 血管内皮生长因子 在非小细胞肺癌中 的表达及其之间的相关性。发现survivin 基因表达与肺癌患者的细胞分化程 度,TNM 分期和五年生存率密切相关 P 0. 05 。VEGF 基因的表达与肺癌患者 的细胞分化程度,TNM 分期,五年生存率和淋巴结转移状态密切相关 P 0. 05 ,survivin、VEGF 基因在非小细胞肺癌组织中表达具有相关性 P 0. 05 。 他们认为:survivin、VEGF 的表达与非小细胞肺癌的临床病理学特征密切相关， 二者的检测将助于肺癌的诊断、评估肺癌患者的恶性程度和预后。 近来吕喜英[17]等检测了 70 例NSCLC 中Survivin的表达并选取30 例癌旁组织 作为对照, 比较Survivin 的表达与NSCLC 患者生物学特征及预后的关系。发现 Survivin在NSCLC 中的阳性表达率为7413%,而癌旁组织无 1例表达, Survivin的表 达与肺癌患者年龄、性别、病理类型、分化程度无关 P 0.05 ,与临床分期有关 P 0.008 ; Survivin表达阳性者生存时间明显低于阴性表达者 P 0.000 , COX 回归显示Survivin与NSCLC 患者预后有关 P 0.001 。他们认为Survivin与 NSCLC 的发生发展有关,过度表达提示预后不良, Survivin有望成为肺癌诊断和基 因治疗的新靶点。 4 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 国外Ikehara 等[18]研究了非小细胞肺癌中survivin 的表达与肿瘤病理分期和 患者生存期的关系分析后显示: 血管侵袭的频率在survivin 阳性组显著性提高; 相反, survivin 阳性患者的生存期显著低于survivin 阴性表达的患者, 得出结论, 肿瘤细胞中survivin 的表达在非小细胞肺癌中是一个不利的预后 因素。 近来，J Nakano等[19]则对Real-time PCR测定了野生survivin、 survivin-2B 以及 survivin-deltaEx3 在非小细胞肺癌中的表达。研究发现野生survivin与 凋亡抑制、 肿瘤增殖明显相关;survivin-deltaEx3 与肿瘤增殖相关，尤其是与肿瘤分期密切 相关;而survivin-2B与肿瘤增殖与凋亡无明显相关性。 VEGF是 1989 年Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出 来的一种对血管生长有强力诱导并特异性作用于血管内皮细胞的生长因子。人 VEGF基因位于染色体 6P，全长 14kb。由 8 个外显子和 7 个内含子组成，编码 的VEGF蛋白具有高度的保守性，分子量为 34―45kd ，由亚基间二硫键形成同源 二聚体。它是血小板源生长因子 plateletderived growth factor，PDGF 家庭的一个 成员，可由正常细胞和肿瘤细胞产生和分泌。根据VEGF mRNA 的剪接不同， 可 分 5 种形式:VEGF23 、VEGF121 、VEGF165 、VEGFI~ 和VEGF206[20,21] ，其 中VEGF165 是最主要的分子类型。 VEGF是通过与其内皮细胞膜上的受体 VEGFR 结合而发挥作用的。VEGF 与其受体结合后，通过发挥以下作用而促进肺癌的发生发展[22] : 1 直接刺激肺 血管内皮细胞分化增殖和迁移，促进血管的构建及生长，加快基底膜降解，诱导 内皮细胞胞膜成窝，促进内皮细胞移动。这不仅有利于血管生成，还有利于癌细 胞脱落进入肺血管或向邻近纤维蛋白和结缔组织基质扩散，为肿瘤的浸润、转移 创造条件。 2 提高血管通透性。VEGF可增加微血管，特别是毛细血管后静 脉和 5 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 小静脉的通透性，是已知最强的血管渗透剂，比组织胺作用大 5 万倍。因此， VEGF可刺激血浆纤维蛋白等外渗并沉积在细胞外基质，作为肿瘤基质和毛细血 管网形成的基础[23] . 3 改变细胞外基质。VEGF可促进内皮细胞表达血浆蛋白溶 酶激活物 PA 及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1 PAI-1 ，以及诱导组织因子、间质 胶原酶和蛋白水解酶等在内皮细胞的表达，从而改变细胞外基质，诱导血管形成。 4 诱发恶性胸水。VEGF与受体结合后，通过一系列信号传导机制导致血管 内皮 细胞分裂增殖，同时增加了血管通透性，使血浆蛋白外渗，为胸腔积液形成提供 了合适的微环境[24,25] 。 5 肿瘤血管生成也有利于肿瘤细胞浸润淋巴管，促进肿 瘤向淋巴结转移[26] 。 P53 基因是目前人类所发现的与肿瘤发病相关性最大的肿瘤抑制基因 tumorsuppressorgene，TSG 。P53 基因定位于人类 17 P13.1 染色体上，由 11 外 显子和 10 个内含子组成。正常情况下，Rb途径和p53 途径的平衡使细胞处于G0 期或者G 。期。Rb蛋白调节细胞从G1 期释放，p53 则具有抑制细胞分裂、修复 损伤的DNA 以及诱导细胞凋亡等功能。p53 基因的编码产物至少激活 6 到 7 种控 制细胞周期的基因的转录。正常细胞中MDM-2 原癌基因MDM-2 的蛋白产物 结 合在p53 基因N端的转录活性区域，抑制其激活。在细胞发生DNA损伤、缺氧、 癌基因激活等情况下，p53 中的丝氨酸发生磷酸化，导致p53 一MDM-2 变得不稳 定，p53 与DNA结合的活性增加，使其它的基因开启或者关闭，从而执行DNA 修复、诱导凋亡等功能以保证细胞处于正常的增殖状态。所以当各种因素致p53 基因发生突变、缺失或者灭活时，上述监控功能的丧失将导致细胞持续增殖及恶 [27] 性肿瘤的发生 。 以往的研究表明，VEGF vascular endot helial growth factor 是作用于血管内 6 上海交通大学医学院 2008 级硕士学位论文 皮细胞,促进血管生成,特异性最高、功能最强的调控因子;P53 蛋白在细胞周期 的调控中起核心作用，p53 基因及蛋白的异常改变与人类大 多数肿瘤的发生密切 相关, P53 蛋白的过度表达可引起细胞失控性生长和肿瘤的发生。而 survivin 不 仅抑制细胞的凋亡而且参与血管的生成,肿瘤血管形成是肿瘤生长,转移的 基础， 并且对细胞凋亡、肿瘤发生具有重要作用。 根据上述相关理论依据，我们将 survivin 引入肺鳞癌、腺癌研究，从组织学 角度研究 survivin 在肺鳞癌、腺癌中表达情况及临床病理联系，进而探讨 survivin 在血管生成、凋亡抑制、肿瘤发生发展等重的作用。同时检测 VEGF 、P53 在肺 鳞癌、腺癌中的表达情况，并研究 survivin 与 VEGF 、p53 在非小细胞肺癌中的 表达情况的相关性。进一步明确 survivin 生物学功能及临床病理意义，为研究新 的肺癌靶向治疗手段开辟通路。 参考文献 1 Talvensaari - Mattila A , Paakko P , Hoyhtya M, et al . 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