细胞角蛋白片断19 CYFRA 21-1作业指导书

细胞角蛋白片断19 CYFRA 21-1作业指导书 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 1第 页，共 页 4糖 检验科免疫室 细胞角蛋白片断19 版本:A/0 项目作业指导书 (CYFRA 21-1) 生效日期:2008-02-01 1. 分析原理 采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 ? 第1步:20µl标本、生物素化的抗CyK 19特异性的单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗CyK 19特异性的单克隆抗体混匀，形 成夹心复合物。 ? 第2步:加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 ? 第3步:反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光， 通过光电倍增管进行测定。仪器通过2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。 2. 标本要求 血清:按常规采集。 o血浆:肝素锂、钠,柠檬酸钠和EDTA-K抗凝。使用柠檬酸钠抗凝结果要增加10,。标本在2,8度可稳定4周，-20C可稳 3 定6个月。只能冻融一次。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。 标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。 3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料 采用罗氏原装配套试剂。 试剂: M: 链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖)，1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml。含防腐剂。 R1:生物素化的抗CyK 19单克隆抗体(灰盖)，1瓶，10ml，1.5mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，Ph 7.2;含防腐剂。 2+R2:Ru(bpy)标记的抗CyK 19单克隆抗体(黑盖)，1瓶，10ml。浓度2mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，pH 7.2,含防腐剂。 3 校准品: Cal 1 阴性定标液(白盖)，2瓶，1ml/瓶 Cal 2 阳性定标液(黑盖)，2瓶，1ml/瓶 两个定标品的细胞角蛋白片断的浓度范围约为0ng/ml和50ng/ml，以人血清为基质。 质控品: Elecsys 肿瘤标志物质控品1和2 (PreciControl Tumor Marker)货号11776452 其他所需材料: Elecsys E170/E411分析仪 Elecsys 通用稀释液货号11732277 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号11298500 Elecsys E411分析仪 Elecsys 系统缓冲液(ProCell)货号11662988 Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)货号11662970 Elecsys 添加剂液(SysWash)货号11930346 Elecsys 适配器 (Adapter for SysClean)，货号11933159, Elecsys 反应杯(CUP)，货号11706829 Elecsys 加样头(TIP)，货号11706802 Elecsys E170分析仪 Elecsys 系统缓冲液(ProCell)货号04880340 Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)货号04880293 Elecsys 试剂针清洗液(ProbeWash)货号03005712 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 2第 页，共 页 4检验科免疫室 细胞角蛋白片断19 版本:A/0 分析项目作业指导书 (CYFRA 21-1) 生效日期:2008-02-01 Elecsys PC/CC杯,货号03023141 Elecsys 反应杯/加针头/废物袋(CUP/TIP)，货号12102137 Elecsys 系统清洗适配器(SysClean Adapter M)，货号03027651 4. 仪器和校准 使用仪器:瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准:每批 CYFRA 21-1试剂盒必须用新鲜试剂和CYFRA 21-1 Cal 1, Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标: Elecsys E170分析仪: ? 一个月(同一批号试剂) ? 7天(放置仪器上的同一试剂盒) 各种分析仪均适用的情况:根据要求进行定标:如质控结果超出范围时。 5. 操作步骤(以E 170为例) 5.1 校准操作步骤: 在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标(BLANK键)或两点定标(TWO POINT键)、全点定标(FULL键)，再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。 5.2 样本程序: 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。 批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。 进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。 6. 质量控制 用Elecsys肿瘤标志物质控品1和2 (PreciControl Tumor Marker)。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 7. 计算方法 仪器会自动计算标本的浓度(ng/ml或者ug/l)。 8. 参考范围 Cutoff值3.3ng/ml 9. 分析性能 9.1精密度 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 3第 页，共 页 4检验科免疫室 细胞角蛋白片断19 版本:A/0 分析项目作业指导书 (CYFRA 21-1) 生效日期:2008-02-01 10. 干扰因素 该方法不受黄疸(胆红素<65mg/dl)、溶血(血红蛋白<1.5g/dl)、脂血(脂质<1500mg/dl)和生物素<50ng/ml干扰。接受高 剂量生物素(>5mg/天)治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰(1500U/ml)。28种常 用药物经试验对本测定无干扰。CYFRA 21-1浓度高达2000ng/ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现 假阳性反应。Elecsys CYFRA 21-1测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 11. 临床意义 细胞角蛋白是上皮细胞的结构蛋白质。目前为止已发现20种不同的细胞角蛋白。由于它们特殊的分布形式，细胞角蛋白现已成 为肿瘤病理学研究的划分指标。借助于二种特异的单克隆抗体(KS19.1和BM19.21)，CYFRA 21-1可检测细胞角蛋白19的一个片段。 CYFRA 21-1主要用于监测非小细胞肺癌(NSCLC)的病程。也可用于监测横纹肌浸润性膀胱癌的病程。CYFRA 21-1用于与良性肺部疾 病(肺炎,结核,慢性支气管炎,支气管哮喘,肺气肿)的鉴别，特异性比较好。在良性的肝病和肾功能衰竭病人中偶见CYFRA 21-1轻微 升高(约10ng/ml)。肺部有不明的阴影,CYFRA 21-1>30ng/ml提示存在原发性支气管癌的可能性.血中CYFRA 21-1水平显著升高提 示肿瘤已晚期或预后差。但CYFRA 21-1正常或轻微升高，不能排除肿瘤的存在。治疗效果好，CYFRA 21-1的水平会很快下降或恢复 正常水平，如果CYFRA 21-1值不变或轻度减低提示肿瘤没有完全去除，或有多发性肿块存在，及相应的疗效和预后。在疾病的发展 过程中，CYFRA21-1值的变化常常早于临床症状和影像检查。 12(参考文献 1. Bodenmueller H, Ofenloch-Hähnle B, Lane EB, Dessauer A. Lung Cancer associated Keratin 19 Fragments: Development and Biochemical Characterization of the new Serum Assay Enzymun-Test CYFRA 21-1. Int J Biol Markers 1994;9:75-81. 2. Bodenmueller H. The biochemistry of CYFRA 21-1 and other cytokeratin-tests. Scand J Clin Lab Invest 1995;55,Suppl 221:60-66. 3. Stieber P, Dienemann H, Hasholzner U, Mueller C, Poley S, Hofmann K, Fateh-Moghadam. Comparison of Cytokeratin Fragment 19 (CYFRA 21-1) Tissue Polypeptide Antigen (TPA) and Tissue Polypeptide Specific Antigen (TPS) as Tumor Markers in Lung Cancer. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:689-694. 4. Bodenmueller H, Donie F, Kaufmann M, Banauch D. The tumor markers TPA, TPS TPACYK and CYFRA 21-1 react differently with the keratins 8, 18 and 19. Int J Biol Markers 1994;9:70-74. 5. Stieber P, Hasholzner U, Bodenmueller H, Nagel D, Sunder-Plassmann L, Dienemann H, et al. CYFRA 21-1: A new marker in lung cancer. Cancer 1993;72:707-713. 6. Ebert W, Leichtweis B, Schapöhler B, Muley T. The new tumormarker CYFRA is superior to SCC Antigen and CEA 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 4第 页，共 页 4检验科免疫室 细胞角蛋白片断19 版本:A/0 分析项目作业指导书 (CYFRA 21-1) 生效日期:2008-02-01 in the primary diagnosis of lung cancer. Tumor Diagnostik und Therapie 1993;14:91-99. 7( Hasholzner U, Schambeck C, Fabricius PG, Stieber P, Hofmann K, Jansen HM, et al. Clinical Relevance of the New Tumor Marker CYFRA 21-1 in Urinary Bladder Cancer Compared with TPA and TPS. Laboratoriumsmedizin 1993;17:324-327. 8. Van Dalen A. Quality control and standardization of tumormarker-tests. Tumor Biol 1993;14:131-135. 9. Ebert W, Dienemann H, Fateh-Moghadam A, Scheulen M, Konietzko N, Schleich T, Bombardiere E. Cytokeratin 19 Fragment CYFRA 21-1 Compared with Carcinoembryonic Antigen, Squamous Cell Carcinoma Antigen and Neuron-Specific Enolase in Lung Cancer. Results of an International Multicentre Study. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1994;32(3):189-199. 10. 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