[word doc]氧氟沙星眼膏微生物限度检查方法验证

[word doc]氧氟沙星眼膏微生物限度检查验证 氧氟沙星眼膏微生物限度检查方法验证 ? 1500?HeraldofMedicineVo1.29No.11November2010 氧氟沙星眼膏微生物限度检查方法验证 张崇生,丁玲,陶建亮,许秀娟 (浙江省温州市药品检验所,325028) [摘要]目的建立氧氟沙星眼膏的微生物限度检查方法.方法细菌数,真菌及酵母菌数和控制菌均采用薄 膜过滤法进行微生物限度检查.结果细菌,真菌及酵母菌计数,5株代菌株的回收率均>7O%.控制茵检查,试验组 检出,阴性菌对照组未检出.结论氧氟沙星眼膏可用薄膜过滤法进行微生物限度检查. [关键词]氧氟沙星眼膏;微生物限度检查法;验证 [中图分类号]R978.1;R927.1[文献标识码] 氧氟沙星眼膏用于治疗细菌性结膜炎,角膜炎,泪 囊炎等外眼感染,通过抑制细菌DNA复制而发挥作 用,对革兰阴性菌,革兰阳性菌均有较强的抗菌作用, 具有抗菌谱广,抗菌活性强的特点.为了保证制剂质 量,需要对其微生物污染情况进行控制.笔者根据 《中华人民共和国药典}2005年版的要求,对氧氟沙星 眼膏的微生物限度检查方法进行验证. 1 1.1培养基营养肉汤培养基,真菌琼脂培养基,胆 盐乳糖培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,营养琼脂培养 基,蛋白胨,甘露醇氯化钠琼脂,溴化十六烷基王甲铵 琼脂均由中国药品生物制品检定所提供.氯化钠,氯 化钙为化学纯,配制的试剂均经过灭菌处理. 1.2菌种枯草芽孢杆菌fCMCC(B)63501],金黄色 葡萄球菌[CMCC(B)26003],大肠埃希菌[CMCC(B) 44102],白念珠菌[CMCC(F)98001],黑曲霉菌 [CMCC(B)98003],铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10104]. 1.3样品氧氟沙星眼膏(沈阳市兴齐制药有限责 任公司,批号:080407,090512,091001). 1.4仪器HTY-2000A集菌仪,全封闭集菌器,孔径 0.45txm过滤膜(杭州泰林). 2方法与结果 2.1菌液的制备?取经37培养18,24h金黄 色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,大肠埃希菌,枯草杆菌的 肉汤培养物1mL+灭菌0.9%氯化钠溶液9mL,10倍 稀释至10,10,菌数为50,100cfu?mL一,做活菌 计数备用;?经25qC培养l8—24h的白念珠菌霉菌 液体培养物1mL+灭菌0.9%氯化钠溶液9mL,10倍 稀释至l0,l0,菌数为50,100cfu?mL一,做活菌 [收稿日期]2010一ol一10[收稿日期]2010,02—25 [作者简介]张崇生(1974一),男,浙江温州人,副主任药 师,学士,主要从事药品,医疗器械,保健食品检验.电话:0577 — 88536561,E—mail:wzdazcs@163.COII1. A[文章编号]1004—0781(2010)11—1500—02 计数备用;?取经25?培养1周的黑曲霉菌斜面培 养物,加0.9%氯化钠溶液3,5mL洗下真菌孢子,取 1mL+灭菌0.9%氯化钠溶液9mL,10倍稀释为10,, 菌数为50,100cfu?m,活菌计数备用. 2.2供试液的制备称取样品10g,加pH为7.0氯 化钠一蛋白胨稀释液至100mI,充分振摇,使供试品溶 解,加入灭菌氯化钙2g,振摇5min,静置待明显分层, 取其上清液为1:10的供试液. 2.3细菌,真菌及酵母菌计数方法的验证 2.3.1实验方法实验组:取1:10供试液1mL进 行薄膜过滤,用pfI为7.0氯化钠.蛋白胨稀释液冲洗 滤膜,每次每张膜冲洗100mL,冲洗总量500mI,在最 后一次冲洗液中加入50—100个?mL实验菌株,取 下滤膜放置凝固好的琼脂培养基或改良马丁琼脂培养 基上,细菌置于30,35?培养48h观察结果,真菌置 于23,28培养72h观察结果.活菌组:测定每一 菌株的实验菌数.供试液对照组:测定供试品本底菌 数.稀释剂埘照组:取pI{为7.0氯化钠一蛋白胨稀释 液替代供试品,加入实验菌,按实验组的供试液制备方 法和菌落计数方法测定其菌数. 2.3.2回收率结果回收率(%):(实验组一供试液 对照组)/活菌组×100%.结果见表1. 表1实验组和稀释剂对照组回收率% 从表1结果可知,采用薄膜过滤法,用pH7.0氯 化钠一蛋白胨稀释液冲洗滤膜,每次每张膜冲洗 100m【,冲洗总量500mL,人工污染5株代表菌株,试 验组和稀释剂对照组回收率均>70%,可采用薄膜过 滤法检验. 2.4控制菌检查方法的验证 医药导报2010年11月第29卷第11期?1501? 2.4.1实验方法实验组:取1:10供试液10mI, 进行薄膜过滤,用pH7.0氯化钠一蛋白胨稀释液冲洗滤 膜,每次每张膜冲洗100mI,冲洗总量500mI,在最后 一 次冲洗液中加入50,100个?rnL..金黄色葡萄球 菌,再加入1O0mL营养肉汤培养基中,置于35,37? 培养24h,取培养物划甘露醇氯化钠琼脂平板,培养 72h,挑选菌落,再接于营养琼脂斜面,培养24h,进行 革兰染色,观察;并取斜面培养物接于营养肉汤培养基 中,培养24h,作血浆凝固酶试验.另取1:10供试液 10mL,进行薄膜过滤,用pH7.0氯化钠一蛋白胨稀释 液冲洗滤膜,每次每张膜冲洗100mL,冲洗总量 500mL,在最后一次冲洗液中加入50,100个?mL.. 铜绿假单胞菌,再加入100mL胆盐乳糖发酵培养基 中,培养24h,取培养物划溴化十六烷基三甲铵琼脂平 板,挑选菌落,接于营养琼脂斜面,培养24h,取培养物 进行革兰染色,镜检,氧化酶实验.阴性菌对照组:采 用大肠埃希菌代替金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌, 同实验组方法进行检查. 2.4.2结果批号为080407,090512,091001的3批 样品,实验组均为阳性,阴性菌对照组均为阴性.即采 用薄膜过滤法检验氧氟沙星眼膏的金黄色葡萄球菌和 铜绿假单胞菌,实验组检出实验菌,阴性菌对照组未检 出,该实验方法成立. 3讨论 氧氟沙星抗菌谱广,对葡萄球菌,链球菌,大肠埃 希菌,铜绿假单胞菌等菌种都有抗菌作用,因此其微生 物限度检查不能采用直接接种法.根据《中华人民共 和国药典)2oo5年版的要求,采用薄膜过滤法对氧氟 沙星眼膏微生物限度的检查方法进行验证实验.此眼 膏中含有辅料卡波姆,加入氯化钙可形成复合物沉淀, 取上清液为供试液使薄膜过滤顺利进行J. [DOI]10.3870/yydb.2010.11.041 [参考文献] [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[z].北 京:化学工业出版社,2005:附录?J. [2]王彦,王子娟.卡波姆在药剂学中的应用[J].中国药 事,2005,19(6):361—365. 高效液相色谱法测定裸花紫珠分散片木犀草素含量 李志梅,谢秉湘 (浙江省温州市药品检验所,325028) [摘要]目的测定裸花紫珠分散片中木犀草素的含量.方法采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为安捷 伦EclipseXDBCl8柱(250mmx4.6tllm,5m),甲醇一0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相,流速1mL?min一;检测波长 348nm,柱温30?.结果木犀草素在0.00296,0.02960g范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率99.47%, RSD=0.92%.结论该方法简便可行,重复性好,可用于裸花紫珠分散片的质量控制. [关键词]裸花紫珠分散片;木犀草素;色谱法,高效液相 [中图分类号]R286;R927.1[文献标识码]A[文章编号]1004—0781(2010)11—1501—02 裸花紫珠分散片为裸花紫珠经加工制成的分散 片,具有抗炎,解毒,收敛,止血的功效.用于细菌感染 引起的炎症,急性传染性肝炎,呼吸道和消化道出血. 目前执行的标准为国家食品药品监督管理局标准 YBZ02482006,标准含量测定项为测定总黄酮的含量, 该方法为显色后采用紫外分光光度法测定(标准曲线 法)?,操作繁琐,重复性差,于扰因素多,灵敏度低, 专属性不强.笔者在本实验中参照有关文献],选择 木犀草素作为指标成分,并采用高效液相色谱 [收稿日期]2o10—04—02[修回日期]2OlO一05一l5 [作者简介]李志梅(1975一),女,黑龙江大兴安岭人,主管 药师,学士,从事药品工作.电话:0577—88508611E—mail: lzm53l@yahoo.corn.cn. (HPLC)法测定裸花紫珠分散片中木犀草素的含量. 1仪器与试药 Agi】ent1200高效液相色谱仪,二极管阵列检测 器;MettlerTOLEDOXS205DU百万分之一天平;木犀 草素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111520. 200504);甲醇为色谱纯;水为超纯水,其他试剂均为 分析纯.裸花紫珠分散片(成都华宇制药有限公司生 产,规格:每片0.50g,含干浸膏0.25g,批号为: 081205,090507,091204). 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:EclipseXDBC,柱 (250mmx4.6mlil,5m),甲醇-0.4%磷酸溶液(50: 50)为流动相,流速1mL?rain,;检测波长348nm,柱