RP-HPLC法测定熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸的含量

第20卷第5期2004年10月广东药学院学报ACADEMICJOURNAL0FGUANGDONGCOLLEGEOFPHARMACYVo】．20No．50ct．2004RPHPLC法测定熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸的含量张雪原林晓辉陈琏(潮洲市药品检验所广东潮洲521000)摘要目的建立测定熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸含量的反相高效液相色谱法。色谱柱KromasilC。柱，(0．025mol／L磷酸溶液：乙腈)=(55：45)为流动相(用20％氢氧化钠调节pH3．O)，流速1．0mL／rain，波长210nm。结果熊去氧胆酸在0．12542．007mg／mL之间与峰面积呈良好线性关系(r=0．9996)，平均收率为98．8％，RSD=1．8％。方法精密度的RSD为2．5％(n=6)。结论方法简便、准确，能有效地控制该制剂的质量。关键词熊去氧胆酸片；熊去氧胆酸；高效液相色谱法中图号R927．2文章编号：1006—8783(2004)050494—02文献标识码：A熊去氧胆酸为亲水性胆汁酸，具利胆、保护肝细胞和免疫调节等功效，在预防结肠癌和化疗引起的腹泻、治疗移植物抗宿主病、炎性肠病、反流性胃炎、高胆固醇血症、调节艾滋病患者免疫力等方面都初显成效。熊去氧胆酸片现行含量测定方法为酸碱滴定法，专属性不强。本文建立了熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸含量测定的反相高效液相色谱法，具有灵敏度高、专属性强等特点，可用于熊去氧胆酸片的质量控制。1仪器与试药LC—IOAT型高效液色谱仪(日本岛津)，SPD—IOA型紫外可见检测器(日本岛津)，天津ANASTR色谱工作站。色谱柱为KromasilC，。色谱柱(150mm×4．6mm，5Ixm)。AG285十万分之一电子天平(瑞士梅特勒)。‘熊去氧胆酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0755—9003)；熊去氧胆酸片(批号200306c05、200304c02，上海三维制药有限公司；批号0302001，常州制药厂。规格：50mg／片)；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为纯。2实验部分2．1样品液的制备2．1．1对照品溶液的制备精密称取熊去氧胆酸对照品0．04014g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液(浓度为4．014mg／mL)。吸取一定量的熊去氧胆酸对照品贮备液，加甲醇稀释成浓度为0．1254、0．2509、0．5018、1．0035、作者简介：张雪原，女，29岁，药师。研究方向：药品检验。4942．007mg／mL的对照品溶液。2．1．2供试品溶液的制备取本品20片，精密称定研细。精密称取细粉约0．5g，置50mL量瓶中，加甲醇20mL振摇，使熊去氧胆酸溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液0．45m滤膜过滤，作为供试品溶液。2．1．3阴性对照液的制备取处方中的片剂辅料按“2．1．2”项下的制备方法处理得阴性对照液。2．2色谱条件及系统适应性试验色谱柱：KromasilCl8色谱柱(150mm×4．6mm，5Ixm)；流动相：(0．025mol／L磷酸溶液：乙腈)=(55：45)，用20％氢氧化钠调节pH3．0；流速：1．0mlMmin；检测波长：210ilm；柱温：室温。分别取对照品溶液(1．0035mg／mL)、供试品溶液和阴性样品溶液20L注入色谱仪。理论板数以熊去氧胆酸计算应不低于4700；拖尾因子为1．04；熊去氧胆酸与其他组分成基线分离，保留时间约为9．5min，阴性样品不干扰样品的测定，见图1。2．3方法学考察2．3．1标准曲线制备吸取不同浓度的对照品溶液，依次进样20L，每个浓度测定3次以上。以峰面积(A)对对照品系列浓度(P)进行归，得熊去氧胆酸归方程为A=1．563×10’C一9．713×10，r=0．9996。表明熊去氧胆酸在0．12542．007mg／mL质量浓度之间与峰面积呈良好线性关系。2．3．2精密度试验取浓度为1．0035mg／mL的熊去氧胆酸对照品溶液20L，，连续测定5次，峰面积，并计算RSD为0．5％，表明仪器精密度良好。2．3．3稳定性试验取供试品溶液(批号200306维普资讯http:www.cqvip.com第5期张雪原，等．RP—HPLC法测定熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸的含量c05)于1、2、4、6、8、12、24h分别进样2OL，，记录峰面积，结果熊去氧胆酸峰面积的RSD：0．7％，表明供试品溶液在24h内稳定。2．3．4重复性试验取同一批号(200306c05)样0．0140．010《0．0o60．0020．0o2品6份，按“2．1．2”项下方法提取、测定，结果熊去氧胆酸的平均标示量为97．3％，RSD为2．5％，表明分析方法精密度良好。05100t／min5100t／min510t／min图1对照品(A)、阴性样品(B)及样品(C)HPLC图谱Fig．1HPLCchromatograms(A．Refercesubstance；B．blankcontrol；C．Sample)2．3．5加样收率试验精密称取已知含量(批号200306c05)熊去氧胆酸样品6份，约0．1g，置25mL量瓶中，精密加入对照品贮备液(熊去氧胆酸浓度为10．013mg／mL)1mL、2mL、3mL，按“2．1．2”项下方法制备并测定，计算收率，熊去氧胆酸的平均收率为98．8％，RSD=1．8％。结果表明本方法准确可靠。2．4样品测定取熊去氧胆酸片样品3批，按“2．1．2”项下方法制备并测定，记录峰面积，代入归方程计算样品中熊去氧胆酸的标示含量，同时用酸碱滴定法测定含量进行比较，结果见表1。表1样品测定结果(标示量／％)Tab．1Assayingresultofsamples(1abelledamount％)3讨论3．1熊去氧胆酸的含量测定方法文献报道有薄层色谱法引、气相色谱法、和高效液相色谱法。本文参照文献，采用离子抑制色谱法测定熊去氧胆酸片的含量，经多次实验，选择(O．025mol／L磷酸溶液：乙腈)=(55：45)为流动相(用20％氢氧化钠调节pH3．0)，取得满意结果。3．2对表1两种测定方法对相同批号样品测定结果进行双侧t检验，两者之间无显著性差异。但HPLC法具有灵敏度高、专属性强等优点，是一种值得推广的分析方法。参考文献[1]杨大明，孟宪镛．熊去氧胆酸治疗肝现研究进展[J]．国外医学内科学分册，1998，25(6)：251—254．[2]刘娓娓，沈锡中．熊去氧胆酸临床应用进展[J]．世界临床药物，：2003，24(4)：213—216．[3]中国药典(2000年版二部)[S]．2000．1077．[4]文永盛，徐智明，李钤．复方熊胆乙肝胶囊中熊去氧胆酸含量测定方法[J]．中成药，2001，23(3)：175—176．[5]张驰，CHENALice—K，彭会明，等．熊脱氧胆酸的毛细管气相色谱法测定[J]．中国医药工业杂志，2000，31(11)：504—506．[6]贡济宇，史立，于澎，等．RP—HPLC法测定不同产地熊胆中熊去氧胆酸的含量[J]．长春中医学院学报，2002，18(4)：46．(2004—06—07收稿)495维普资讯http:www.cqvip.com