中医分型治疗大鼠慢性心力衰竭的以方测证

探索性医学综合实验—教学改革与实践（第五期） 中医分型治疗大鼠慢性心力衰竭的以方测证 刘巍 徐欣毅 吴申 美克热阿依 韩超 指导老师: 龚其淼 何建成 （上海中医药大学05中西医& 05中医专业&05康复，上海201203） （一）研究方法 1、实验 1.1 实验动物 SD大鼠46只，雄性，体重200±20克（上海中医药大学动物房提供）。 1.2 主要仪器 AD-Instruments生理仪。由上海中医药大学病理实验室提供。 1.3 药品和试剂 盐酸多柔比星注射针剂（上海医药股份有限公司出品，10mg/瓶）。参麦饮，以人参：麦冬：五味子=3：2：2配伍,每毫升含生药1.08g；真武汤，以制附片：生姜：白芍：茯苓：白术=3：3：3：3：2配伍，每毫升含生药1.89g；四君子汤+丹参饮，以丹参：人参：白术：茯苓：炙甘草：檀香：砂仁=20：6：6：6：4：3：3配伍，每毫升含生药3.24g。（上海雷允上药业股份有限公司监制） 2、实验方法 2.1 造模与分组 大鼠饲养I周后，随机取6只大鼠作为正常组，将其余40只SD大鼠采用持续腹腔注射ADR，按3mg／kg剂量，每6天1次，共4周，累计量达15mg/kg。注射完毕后平行随机组分为模型组（10只）、心肾阳衰组（10只）、气阴两虚组（10只）、气虚血瘀组（10只）。模型组、中药治疗组根据大鼠折算系数，第5周起分别将四君子汤+丹参饮、参麦饮和真武汤煎剂滤液灌胃给气虚血瘀组、气阴两虚组和阳虚水泛组，每只2 mL，每日1次，共3周。正常、模型组第5周起以同体积0．9％氯化钠水溶液进行灌胃，每日1次，共3周。手术前1 d禁食，自由饮水。 2.2 手术方法 用3 %戊巴比妥钠溶液(1ml／kg，腹腔注射)将大鼠麻醉，仰卧固定，颈部切开，分离气管及右侧颈总动脉，右侧颈总动脉切开后插入直径1mm 已充满肝素的心导管，经压力转换器接八道生理记录仪，缓慢推进同时观察示波器，当导管进入左心室后停止推进，稳定2分钟后记录±dp／dtmax。实验完毕后取血及心肌标本备用。 2.4 统计学方法 运用SPSS 10.0软件进行分析。数据以均值±差(x±SD)表示，组间比较经过方差分析q检验，P<0．05表示差异有显著性。 3、主要指标 3.1 症状及体征　 观察呼吸、饮食、皮毛等动物活动情况，每周称重，观察是否有呼吸急促、弓背蜷缩、喜欢聚居、体毛枯疏、体重减轻、饮食减少、活动减少、反应迟钝、肝肿大、腹部水肿。 3.2 心功能变化　 心输出量(cardiac output，CO)与心脏舒缩期左室内压变化速率(±dp／dt max) 、左室舒张末容积(LVEDP)、左室压力变化最大速率等。 二、结果与分析 （一）结果 1、症状及体征 正常组大鼠均生长良好，10周末体重390~440g之间，大鼠毛色有光泽，双眼灵活有神，饮食、尿量正常，行动敏捷，对周围变化反应灵敏。模型组与中药组大鼠腹腔注射ADR时第二周个别出现症状，表现为活动减少、蜷缩、纳食减少、皮毛松软、体重减轻、呼吸痰鸣音等，此后症状逐渐加重．从第4次注射起出现程度不一的腹水，尿少便溏，唇周青紫，双耳苍白，呼吸减弱，毛色枯槁、散乱竖起，脱毛；严重者行走不稳，极度消瘦，口唇及双耳发绀，毛色灰黄、腹部肛门腹泻严重导致溃烂、个别开始死亡。 整个实验期间，造模总共用时四周，注射ADR大鼠死亡两只，灌药期间死亡16只，其中模型组死亡4只，中药组死亡12只，其中中药组死亡集中于灌药前一周，经尸体解剖发现腹部明显水肿，肠胃淤血、心脏明显扩大伴有大面积坏死、肺部肿大、肝脏器质性损伤萎缩。 2、心功能 2.1心电图 存活老鼠中，心电图提示未有明显改善。 参麦组（S-T段上抬，呈“鱼钩”样变化） 模型组（心率不齐、S-T上台） （二）分析 １、方解与药理分析 四君子汤合丹参饮方中丹参、檀香活血化淤止痛；人参大补元气、振奋心阳；白术、茯苓健脾补气；诸药共奏补气活血，化淤止痛之功效。参麦饮中人参“主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目开心益智”；麦冬养阴润肺、养胃生津、清心除烦的功能；五味子养阴收敛、安神复脉作用，合而有益气养阴、复脉。真武汤有助阳利水、温肾扶脾的功效，用于治疗心肾阳衰，脾失温煦，水饮内停，上凌心肺，方中的附子回阳救逆，补肾助阳；以干姜避免生姜的辛散，取其助附子加强温阳健脾的功效；茯苓、白术健脾利水，导水下行；白芍和营敛阴，使阳气归附于阴。 现代药理学认为人参具有增强心肌收缩力、降低周围血管阻力及心肌耗氧量的作用，并能清除氧自由基，抑制脂质过氧化反应而保护心肌。麦冬成分和心肌极化液较为相似，有一定的抗心律失常、改善心肌缺血、增强心肌收缩力和减慢心率的作用。丹参、檀香有改善微循环，增加冠脉血流量的作用。附子有强心，增加血管血流量，提高耐缺氧能力。茯苓具有利尿作用，与减轻前负荷有关。生姜能增强附子的强心效力，并使附子的毒副作用相对减低，故有“附子无姜不热之说”。 2、病证结合模型的以方测证 2.1中医“以方侧证”的实验意义 中医认为“证”是病的某一阶段的主要矛盾的概括，它受病的基本矛盾的干扰，两者之间存在不可分割的联系。因此，证候诊断离不开具体疾病的诊断，证候诊断的规范化研究应采用病证结合的研究思路，这样才能对疾病过程中各个发展阶段的证候作出正确的诊断，才能将中医的证候演变规律更清晰地凸现出来。由于相对于中医学病名而言，西医学病名往往诊断明确，机制比较清晰，所以应选择西医诊断明确，而中医治疗有优势，又严重威胁人类健康的临床常见病和多发病，采用西医辨病，中医辨证，以病为经，以证为纬，病证结合的研究思路。 “方”与“证”密切相关，方由证立，证随方名，方能测证，证能验方。很多有效的经方、名方是结合了中医理论精华和长期临床实践经验配伍而成，与其特定的证候有较明确的对应关系。而且，临床疗效是临床医学的核心和关键问，证候分类在一定程度上应建立在方剂疗效观察的基础上，通过以方测证还可以对“证”进行动态的研究。所以，我们课题组提出“以候为证，以象为素，病证结合，方证相应，是建立辨证方法新体系的依据”；也有学者提出“围绕证候病机及其与疾病和方剂的相关性这一中医证候研究的重要科学问题，突出中医学思维特征与现代科学融合的研究思路，以方剂干预治疗效果作为比较参照系统，基于中医以方测证的逆向思维的认‘证’方法，不断积累、完善，由此构建出具有坚实临床科学基础的证候标准，应该是病证结合研究的重要发展方向之一”。 2.2动物模型病证结合的必要性 目前，建立病证结合动物模型多是根据西医理论塑造疾病模型，根据中医理论塑造证候模型，再把二者结合起来，在西医疾病模型的基础上利用人为干预手段用中西药物，或采用物理、化学和机械性刺激方法使动物生活环境、条件改变)造成同时兼有证的模型，其是否能如实反映证型还有待进一步认证。中西医结合在临床上有广泛的应用，但在动物模型的建立上却忽略了病与证的结合。所以必须 建立病证结合动物模型，其意义在于为中西医结合基础理论的深化和新理论的形成提供可能和依据，同时为临床治疗作用原理的研究提供了依据，对于在深层次研究探讨中西医理论的内在联系有重要意义。同时病证结合动物模型有助于中药、方剂作用机制的研究并满足新药开发的需要。 （三）改良实验的探讨 1、动物个体差异的缩小 本次实验的造模阶段还是比较成功，模型的制造成功率达到98%,但成功造模型好动物对药物的耐受性不径相同。实验组认为药物的靶向性有待提高，可通过尾静脉注射；同时考虑到心力衰竭的症候复杂性，可运用超声心动图进行早期筛选。 2、选择药物造模问题的探讨 目前应用阿霉素诱导心力衰竭的动物模型制作方法较多，单次剂量从2．5 mg到20 mg，总量从10mg到25 mg。一般认为Adr诱导心衰主要原理在于它的累积作用，而不是药物浓度的高低。但骨髓抑制和腹膜炎等副作用则与药物浓度有关。Adr诱导心衰模型的建立过程中，造成动物意外死亡的主要原因是骨髓抑制、药物性腹膜炎、肠道副反应(如腹泻)、心力衰竭的意外死亡等。在很多文献中，低剂量 Adr用于肾病模型的制造。总之，Adr诱导心衰模型的方法尚不统一，有待进一步研究探讨。 三、总结 目前心血管疾病已成为人类第一大杀手，而心力衰竭是各类心脏疾病的最终归属。中医对于治疗慢性心力衰竭，尤其是以顽固性心力衰竭为主的心血管疾病具有良好的疗效，避免了西医药物副作用（洋地黄中毒等）以及手术带来的创伤。 《中药新药治疗完全性充血性心力衰竭的临床研究指导原则》是研究的主要标依据但在临床治疗过程中，病人往往病情危重、证型错综复杂。实验的宗旨在于研究心力衰竭的发病过程中病理变化，通过以“方”测“证”、以“方”测“病”的方法，了解慢性心力衰竭中演化规律、掌握某一病理时期的典型症状。但如何在实验过程中减少药物的毒副作用、减少个体差异、心衰模型制造的改良、判定心功能改善以及心衰如何分型将成为我们继续研究的课题。 参考文献： 1、朱奔奔　郭 维　黄 亮　杨 涓 贵阳中医学院 真武汤对慢性充血性心力衰竭模型大鼠ET、CGRP水平的影响 2、王 军　孙振涛 山东省东平县接山中心卫生院丹 参饮合四君子汤加减治疗冠心病心绞痛5O例 3、杨水娥　张萍，李海华．参麦注射液治疗慢性心力衰竭疗效的研究【J】．中华实用中西医杂志，2004，4(1 7)：1608—1609． 4、陈海燕　吴焕林．参麦注射液治疗慢性充血性心力衰竭的疗效观察【J】．现代中西医结合杂志，2004，1 3(1)：30—31． 5、张军 山东中医药大学 中医药治疗慢性心力衰竭的临床研究进展 6、李玉梅　姜水印　卫洪昌　病证结合的充血性心力衰竭的基本证型演变规律的研究进展 ７、陈金水　陈金雄　吴天敏　潘振彬　谢文艳　中医辨证治疗充血性心力衰竭的研究现状与思考 8、杨庆有 孙慧茹 李合国 生脉饮加昧对慢性心力衰竭患者血浆脑钠素水平的影响 The Effect of Modified Pulse-Activating Power on Brain Natriuretic Peptide in Blood Plasma of Chronic Heart Failure Patients 9、李珊珊 河南中医学院 真武汤临床及实验研究概况 10、刘 兵 龙新生 吕 萍 深圳市中医院护 加味真武汤治疗充血性心力衰竭的疗效与护理 11、魏华凤 季光 郑培永 上海中医药大学龙华医院疗效评价中心 证候诊断规范化研究的现状分析 12、李静 天津市东丽中医医院 浅谈中西医结合治疗充血性心力衰竭 13、富琦 陈信义 建立病证结合动物模型的新思路 北京中医药大学 14、李廷利 刘俊 裴广杰 黑龙江中医药大学 充血性心力衰竭的动物模型在中医药研究中的应用 15、郭豫涛 谭 毅 重庆医科大学 充血性心力衰竭的动物模型 16、单亮 孙聪 安徽中医学院 心衰康对阿霉素心衰大鼠治疗机理的实验研究 PAGE 184