促红细胞生成素受体在肝细胞癌组织中表达及对肿瘤血管生成的影响

山东医药2008年第48卷第 8期 促红细胞生成素受体在肝细胞癌组织中 达及对肿瘤血管生成的影响 张文方。史文高，赵龙栓 (郑州大学第一附属医院，河南郑州450052) [摘要] 采用免疫组化法检测 60例肝细胞癌(HCC)组织、10例正常肝组织 中促红细胞生成素受体(EPOR) 的表达水平，并计数微血管密度(MVD)。结果HCC组织中EPOR表达明显高于正常肝组织(P<0．01)，且与HCC 组织学分级具有相关性(r=0．483，P<0．05)；HCC组织中EPOR阳性者 MVD明显高于阴性者。提示 EPOR与 HCC的血管生成有关 ，可促进 HCC的发生、发展。 [关键词] 肝细胞癌 ；促红细胞生成素受体 ；微血管密度；免疫组化 [中图分类号] R735．7 [文献标识码] B [文章编号] 1002-266X(2008)08-0077-02 研究发现，促红细胞生成素受体(EPOR)可表 达于某些肿瘤组织中，可能参与了肿瘤的发生、发 展。近期我们采用免疫组化法检测了6O例肝细胞 癌(HCC)患者癌组织中 EPOR的表达情况及其对 肿瘤问质微血管密度 (MVD)的影响，旨在探讨 EPOR在 HCC发生、发展中的作用。 1 材料 2005年 1月 ～2006年 3月手术切除的 6O例 HCC患者的癌组织标本(HCC组)，患者中男45例， 女 l5例；年龄 24—72岁，平均 45岁。病理检查证 实诊断，其中肿瘤高分化 16例，中分化 27例，低分 化 l7例。同时取正常肝组织 1O例作为对照(对照 组)。 2 方法 2．1 EPOR检测 采用免疫组化 PV-9000二步法 检测。兔抗人 EPOR多克隆抗体 (Santa Cruz公 司)、PV-9000二步法免疫组化试剂盒、DAB显色剂 (均购自北京中杉金桥生物技术公司)。标本均用 石蜡包埋，5 p,m厚切片，脱蜡至水，加3％H：O：灭活 内源性过氧化物酶；将切片浸入 0．01 moVL枸橼酸 盐缓冲液中进行抗原热修复，滴加兔抗人 EPOR工 作液孵育，依次滴加试剂 1(Polymer Helper)和试剂 2(Polyperoxidase-mouse／rabbit IgG)工 作液孵 育， DAB显色，脱水，透明，中性树胶封片。PBS代替一 抗作阴性对照。 2．2 MVD测定 参照Weidner等 的方法，染成 棕色的血管内皮细胞或血管内皮细胞簇均作为一个 血管计数。首先在低倍镜下选择 MVD最高 的区 域，再在高倍光镜下随机计数 5个视野内微血管数， 求其平均值。采用光学显微镜(×400)下随机观察 1O个视野，以胞质及胞膜清晰出现 EPOR棕黄色颗 粒表达的阳性细胞数占总细胞数的比例作为判断标 准。低倍镜下表达不明显视为阴性(一)；阳性细胞 数 <10％为阳性(+)，10％ 一50％为中度阳性 (+ +)，>50％为强阳性(+++)。 2．3 统计学方法 采用 SPSS11．0软件。所有计量 资料采用 检验和秩和检验，计数资料采用t检验， 相关性使用 Spearman检验。检验水准 = 0．05。 3 结果 3．1 EPOR表达 HCC组 EPOR蛋白阳性率为 83．3％(50／60)，对照组为 0，两者比较，P<0．O1。 HCC不同组织分级中 EPOR蛋白表达差异具有统 计学意义(P<0．05)，其 EPOR表达与 HCC组织学 分级具有相关性(r=0．45，P<0．05)，见表 1。 表 1 EPOR表达与 HCC组织学分级的关系 注 ：与中、低分化 者相 比，。P<0．05 3．2 Et，OR表达与MVD的关系 HCC组 EPOR阳 性者 MVD为 3O．78±3．36，而阴性者为 22．40± 3．84，两者问差异有统计学意义 (t=7．029，P< o．05)。相关性分析显示，MVD与 EPOR表达具有 相关性(r=0．707，P<0．05)。 4 讨论 EPOR为促红细胞生成素(EPO)的特异性膜受 体，属 I型细胞因子受体超家族，可表达于多种组织 (乳腺癌 、肾癌、胃癌组织)来源的内皮细胞中 ，推 77 维普资讯 http://www.cqvip.com 测可能与这些肿瘤血管生成关系密切。EPO的基 本作用是促进红细胞生成，多数学者认为，EPO以 自分泌或(和)旁分泌方式作用于表达 EPOR细胞， 与EPOR结合后通过引发信号传导，在新生血管形 成的早期阶段(细胞增殖迁移)及晚期阶段(内皮细 胞排列管化)发挥重要作用。近年发现 EPO及 EPOR在多种人类恶性肿瘤中表达 ，EPO—EPOR 具有抑制肿瘤细胞及血管内皮细胞凋亡，促进肿瘤 细胞增殖分化，加速肿瘤细胞生长，促进新生血管生 成等作用 J。Hardee等 研究发现，在鼠的乳腺癌 模型中注射 EPO或使肿瘤细胞表达 EPOR可明显 刺激肿瘤新生血管形成和肿瘤生长，注射抗 EPO抗 体或使肿瘤细胞稳定表达 EPO抗体可以抑制肿瘤 新生血管形成和肿瘤生长。Yasuda等 发现，使用 抗 EPO抗体或可溶性 EPOR(EPOR的胞外结构域， 可与 EPO结合拮抗其生物作用)阻断卵巢癌、子宫 内膜癌及宫颈癌组织中及裸 鼠皮下移植瘤模型中 EPO—EPOR信号传导，肿瘤细胞凋亡显著增加、毛细 血管数量减少。这些研究均表明阻断 EPO—EPOR 传导不仅能抑制肿瘤细胞生长，而且在抑制肿瘤浸 润、转移、血管形成中起到一定作用。Rabitti等 研 究发现，EPO、EPOR在 HCC中高表达，且与肿瘤的 组织学分级相关。本研究证实，HCC组织中 EPOR 表达升高，且与 HCC组织学分级、MVD具有相关 性，表明EPOR可能在HCC的发生发展中具有重要 作用，其机制可能为EPOR介导的信号传导可促进 HCC新生血管形成。EPO—EPOR的促血管生成作 山东医药 2008年第 48卷第 8期 用可能通过调控多潜能干细胞的一系列细胞信号转 导通路而实现。目前认为，EPO—EPOR可以强有力 地调控内皮细胞增殖、迁移，同时刺激红细胞生成和 增强血管抵抗力；另外，EPO—EPOR可对细胞信号转 导的级联反应的更下游发挥作用。 [参考文献] [1]Weidner N，Fdkman j，Pozza F，et a1．Tumor angiogenesis：a new significant and independent prognostic indicator in early stage breast carcinoma[J]．Natl Cancer lnst，1992，84(24)：1875-1887． [2]Lewis LD．Preclinical and clinical studies：a preview of potential fu— ture applications of erythrepoietic agents[J]．Semin Hematol， 2004，41(4)：17-25． [3]Yasuda Y，Fujita Y，Matsuo T，et a1．Erythropoietin regulates tumour growth of human malignancies[J]．Carcinogenesis，2003。 24(6)：1021—1029． [4]Pollio F，Staibano S，Mansueto G，et a1．Erythrepoietin and eryth— repoietin receptor system in a large uterine myoma of a patient with myomatous erythrecytosis syndrome：possible relationship with the pathogenesis of unusual tumor size[J]．Hum Pathol，2005，36 (1)：120—127， [5]Hardee ME，Cao Y，Fu P，et a1．Erytbropoietin blockade inhibits theinductionoftumorangiogenesisand progression[J]．PlosONE， 2007，2(6)：549． [6]Yasuda Y，Fujim Y，Masuda S，et a1．Erythropoietin is involved in growth and angiogenesis in malignant tumours of female reproductive organs[J]．Carcinogenesis，2002，23(11)：1797-1805． [7]Ribatti D，Marzullo A，Gentile A，et a1．Erythropoietin／erythropoi— etin··receptor system is involved in angiogenesis in human hepatocel·· lular carcinoma[J]．Histupathology，2007，50(5)：591-596． (收稿 日期：2007-12-26) · 告读者 · 阿拉伯数字的书写规则(一) ①阿拉伯数字不能与除万、亿及 SI词头中文符号外的汉字数词连用：万、亿是我国习惯用的数词，5位 以上的数字，可改写为以“万”、“亿”为单位的数。一般情况下不得以“十”、“百”、“千”、“十万”、“百万”、 “千万”、“十亿”、“百亿”、“千亿”作单位，法定计量单位的词头除外。例如，“1 163 000 000人”可改写为 “11．63亿人”或“116 30o万人”，但不能改写为“11亿6千3百万人”。数值巨大的精确数字，为了便于定 位读数或移行，作为特例可以同时使用“亿、万”作单位。例如，“我国1982年人 口普查人数为 10亿 817万 5 288人；1990年人口普查人数为11亿3 368万2 501人。”当百、千、兆等为法定单位词头时，可以与阿拉伯 数字连用。例如：“5 000米”可以写作“5千米”，因为“千”是词头“k”的中文符号，“5 000天”不能写作“5千 天”，因为“天”是不允许加词头的，“5千天”中的“千”是数词，它不能与阿拉伯数字连用。同样，“6千千瓦” 的写法是错误的，应写作“6 000千瓦”或“6兆瓦”。还需要指出的是：“三千每秒”不应写作“3千(秒) ”， 这里的“千”不是词头，而是数词，应写成“3 000秒 ”。同理，“二千立方米”不应写作“2千(米)¨ ’，应写作 “2 000米”’。而“三每千秒”和“二立方千米”可以写成“3千秒 ”和“2千米"’，这里的“千”都是词头，也不 必写作“3(千秒) ”和“2(千米) ’，因为这里的指数“一l”和“3”是属于包括词头在内的整个单位的。②纯 小数小数点前“0”的书写：无论在文字叙述还是图表中，书写纯小数时，必须写出小数点前定位的“0”．小数 点用齐底线的黑圆点“．”表示。例如，“本研究中，眼一脑一肾综合征的发生率为0．17／55-0” 78 维普资讯 http://www.cqvip.com