女贞子不同炮制品升高白细胞耐缺氧作用及毒性比较

�药理� 女贞子不同炮制品升高白细胞耐缺氧作用及毒性比较 范秦鹤1 ,侯雅玲2 ,朱爱华3 ,吕兰熏4 ,冯敬群4 ( 1.深圳市自来水集团有限公司,广东 深圳 518031; 2. 国药集团陕西医药有 限公司, 陕西 西安 710003; 3. 陕西中药研究所, 陕西 咸阳 712000; 4. 陕西中医学院,陕西 咸阳 712083) 摘要:目的　比较女贞子不同炮制品对升白、耐缺氧作用的影响及毒性的大小。　应用常压耐缺氧试验、环 磷酰胺白细胞低下模型、LD50值测定的方法,对女贞子酒蒸品、清蒸品、生品的耐缺氧能力、升高白细胞作用及 毒性的大小进行实验比较。结果　酒蒸品的抗缺氧、升白作用优于清蒸品和生品;灌胃 LD50值,酒蒸品介于清 蒸品和生品之间。结论　提示传统的酒蒸工艺有助于增效。 关键词:女贞子;不同炮制品;耐缺氧作用; 升高白细胞;毒性 中图分类号: R965　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-2407( 2004) 01-0020-03 Comparising the ef fects of dif ferent preparations of Fructus Ligustri Lucidi on enhancing white blood cel l and anti-hypoxia ability Fan Qinhe1 , Hou Yaling2 , Zhu Aihua3, Lu Lanxun4 , Feng Jingqun4 ( 1Shen Zhen Tap W ater Limited Company , Shenzhen 518031, China; 2T raditional Chinese M ed icine Group Shaanx i limited Company , X i' an 710003, China; 3Shaanx i Institute of Chinese T raditional Medicine, X ianYang 712083, China; 4Shaanx i College of T raditional Chinese M edicine, X ianYang 712083, China) Abstract:Objective To compare the effects of dif ferent preparat ions of Fructus L igustri Lucidi on enhancing white blood cell and anti-hypoxia ability . Methods The mouse model of hypoxia tolerance under ordinary pressure and the mouse model of lowed white blood cell by cyclophospham ide. Results T he effects of preparation of Fructus L igustri Lucidi with yellow w ine on enhancing anti-hypoxia and white blood cell w ere better than that of preparations w ith water or crude drug ; M ouse LD50 of preparation w ith yellow wine w as low er than that of preparations with w ater, but was higher than that of crude drug. Conclusion The preparat ions of Fructus Ligust ri Lucidi w ith yellow w ine is bet ter than others. Key words: Fructus L igustri Lucidi; anti-hypoxia ability ; w hite blood cell; acute toxicity 　　女贞子系中医常用扶正固本中药,临床应用十分 广泛, 并有生品、清蒸品、酒蒸品之分。其所含有效成 分柳得洛苷具有恢复疲劳、耐缺氧的生理活性〔1〕,齐 墩果酸具有升高白细胞的作用〔2〕;女贞子醇提物对放 疗及化疗所致的白细胞减少有升高作用〔1〕。笔者就女 贞子不同炮制品对升高白细胞作用、耐缺氧能力及毒 性进行了实验比较。 1　实验材料 1. 1　炮制品制备　生品:采自陕西中药研究所药圃, 经鉴定为木樨科植物女贞 L igustrum I ucidum Ait的 干燥果实。酒蒸品:取生品, 按1995年版中国药典附录 项下酒炖法炮制, 黄酒用量30%。清蒸品:以自来水代 替黄酒,操作同上。 1. 2　药液制备　水提物:将以上3种样品分别碾成粗 粒,水煮提取、醇沉, 回收乙醇, 浓缩至1�5稠膏(每 g 稠膏相当于5 g 药材)。放置冰箱, 用时稀释。 1. 3　醇提物　以上3种样品的水提物残渣,经80℃烘 干,加5倍量的体积分数95%乙醇回流提取,醇提液回 收乙醇, 浓缩至浸膏状, 置冰箱备用, 临用时加1 0 g�L - 1吐温-80制成混悬液。 环磷酰胺( cy) ,白色粉针剂结晶, 上海第十二制 药厂生产;黄酒,市售绍兴黄酒, 含醇量13%。 1. 4　动物　NIH 种系小鼠,由陕西省中医药研究院 实验动物中心提供。 2　方法与结果 2. 1　不同炮制品水提物对小鼠常压耐缺氧作用的影 响　选取体质量18～22 g NIH 种系小鼠, 雌雄兼有, 随机分为7组。各组分别按表1所示剂量灌胃给药,对 照组灌胃等体积蒸馏水。给药后1 h, 按常压耐缺氧试 验方法〔3〕,将小鼠放入250 mL 磨口广口瓶中(内放10 g 钠石灰,上垫滤纸, 以吸收 CO2、H2O及尿液) ,将瓶 盖盖紧, 存活时间。结果见表1。 表1　女贞子不同炮制品水提物对小鼠常压耐缺氧作用的影 响( x±s, n= 12) 　组　别 剂量/ ( g�kg - 1) 存活期间/ m in对照组 - 34. 00±5. 98� - * 生品 A 12. 5 36. 58±5. 85- � *生品 B 25　 44. 01±7. 24* + *清蒸品 A 12. 5 43. 17±5. 86* + *清蒸品 B 25　 45. 00±7. 99* * +酒蒸品 A 12. 5 44. 62±7. 01* * +酒蒸品 B 25　 53. 25±8. 54* * � 注: 组间进行 t检验, 以�表示对比组, 以* 表示 P < 0. 01, 以+ 表示 P < 0. 05, 以- 表示 P > 0. 05。 由表1可见,女贞子酒蒸品及清蒸品水提物大、小 剂量组及生品大剂量组小鼠存活时间与对照组相比 较, 其差异有非常显著性意义 P < 0. 01;生品小剂量 组与对照组相比较,其差异无显著性意义 P > 0. 05。 酒蒸品大剂量组与其余各组相比较,其差异均有显著 性意义, P < 0. 01或 P < 0. 05。上述结果说明,女贞 20 西北药学杂志　2004 年 2 月　第 19卷　第 1期 子酒蒸品、清蒸品大小剂量及生品大剂量均可显著提 高小鼠常压耐缺氧能力,在相同剂量下,以酒蒸品作 用最强。 2. 2　不同炮制品水提物对 cy 所致小鼠白细胞降低 的影响　选取体质量18～22 g 的 NIH 种系小鼠,雌 雄随机分为4组。各组按表2所示剂量灌胃给药, 对照 组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,连续7天。从第4天开 始,按白细胞低下模型造模方法〔4〕,除对照组注射等 体积生理盐水外 , 其余各组每天腹腔注射 cy 70 mg�kg- 1 ,连续4天。末次给药后24 h 眶静脉采血,进 行白细胞计数。结果见表2。 表2　女贞子不同炮制品水提液对 cy 所致小鼠白细胞降低的 影响( x±s, n= 12) 组　别 剂量/ ( g�kg - 1) 白细胞计数×109 / L 对照组 - 10. 02±3. 20* 模型组 - 2. 66±0. 44　 酒蒸品 40 2. 63±0. 32　 清蒸品 40 2. 82±0. 46　 注: 组间进行 t检验,与模型组比较 , * P < 0. 01。 由表2可见,对照组与模型组相比较, P < 0. 01, 其差异有非常显著性意义, 说明造模成功。酒蒸品、清 蒸品与模型组相比较,均 P > 0. 05,其差异无显著性 意义。实验结果表明,女贞子酒蒸品、清蒸品水提物均 无升白作用。 2. 3　女贞子不同炮制品醇提物对 cy 所致小鼠白细 胞降低的影响　选取体质量18～22 g 雄性 NIH 种系 小鼠,随机分为7组。各组按表3所示剂量灌胃,女贞子 生品、清蒸品、酒蒸品醇提物混悬液, 模型组给予等体 积10 g�L - 1吐温-80水溶液,连续7 d, 每天1次。给药第 4天,按白细胞低下模型造模方法〔4〕,各组腹腔注射 cy 100 mg�kg- 1 ,末次给药后24 h 眶静脉采血,进行白 细胞计数。结果见表3。 表3　女贞子不同炮制品醇提物对 cy 所致小鼠白细胞降低的 影响( x±s, n= 12) 组　别 剂量/ ( g�kg - 1) 白细胞计数109/ L 模型组 - 3. 64±0. 77� - 生品 A 20 3. 72±0. 51- � 生品 B 40 4. 43±0. 76+ + 清蒸品 A 20 4. 18±0. 90- - 清蒸品 B 40 4. 20±0. 98- -酒蒸品 A 20 4. 66±0. 59* *酒蒸品 B 40 4. 74±0. 59* * 注: 组间进行 t检验,以�表示对比组, 以* 表示 P < 0. 01, 以+ 表示 P < 0. 05,以- 表示 P > 0. 05。 由表3可见,酒蒸品大小剂量组与模型组相比较, 其差异有非常显著性意义 P < 0. 01, 生品大剂量组 与模型组相比较, 其差异有显著性意义 P < 0. 05;而 酒蒸品2个剂量组与生品小剂量组相比较,其差异有 非常显著性意义 P < 0. 01; 清蒸品与模型组及生品 小剂量组相比较, 其差异无显著性意义 P > 0. 05。结 果表明,酒蒸品2个剂量组均对 cy 引起的白细胞下降 有升高作用, 说明酒蒸后可增强其醇溶物的升白作 用,且小剂量即可达到生品大剂量的作用强度, 清蒸 品无此作用。清蒸品醇提物及生品小剂量均无升高 cy 所致小鼠白细胞降低的作用。 2. 4　女贞子不同炮制品水提物的急性毒性　选取体 质量18～22 g NIH 种系小鼠,雌雄各半, 随机分组。 给药前空腹8 h, 各剂量组分2次分别灌胃给药,给予 生品、清蒸品、酒蒸品水提物0. 4 mL/ 10 g, 2次间隔2 h, 观察1周内小鼠死亡数, 并按寇氏法计算 LD50。 表4　女贞子不同炮制品水提物灌胃给药 LD50 样　品 LD 50/ ( g�kg - 1) LD50的95%可信区间/ ( g�kg -1)生　品 127. 35 118. 16～137. 24 清蒸品 106. 50 98. 16～114. 90 酒蒸品 123. 30 112. 77～133. 20 注:公共参数 N= 5(组数) , n = 10(每组动物数) , k= 0. 85(相 邻两剂量之比) 由表4可见,女贞子经不同方法蒸制后, 药物毒性 似有增大趋势, 但酒蒸品与生品 LD50值相近, 而比清 蒸品 LD 50值有所降低。死亡小鼠均出现肠胀气、便 溏、眼角分泌白色黏稠物,最后死亡。 3　结果与讨论 文献记载,女贞子升白作用的有效成分是齐墩果 酸〔2〕,齐墩果酸属三萜类化合物,在水中溶解度小,在 醇溶液中溶解度大, 故醇溶物是升白的有效部位。实 验结果表明,酒蒸品及清蒸品水提物不具升白作用, 但酒蒸品的醇提物具有升白作用,其作用较生品强。 该现象提示,酒蒸品虽不能提高某些醇溶性成分在水 中的溶出度,但可提高醇溶性成分在有机溶媒中的溶 出度,这可能与长时间在酒的存在下蒸制, 可以减弱 植物组织内含物与细胞壁间的吸附力,使其在有机溶 媒作用下, 有效成分易于溶出有关; 也可能在炮制过 程中,使醇溶性的成分有所提高, 而清蒸品则不具此 作用。 临床上虚证病人表现为动则气喘, 易于疲劳,这 主要是由于耗氧量增大、机体代偿机能低下所致,补 益药物大多可调节机体代偿机能,降低机体耗氧量, 使机体机能恢复正常。女贞子酒蒸后,可增强其对小 白鼠的抗缺氧作用, 且随剂量增大而增强, 清蒸品虽 可使常压抗缺氧作用增强, 但作用较弱,与酒蒸品差 异显著。 毒性的大小直接影响临床用药安全,炮制的目的 主要是为了增强疗效与降低毒性,以保证用药安全、 有效。从女贞子生品及蒸制品的 LD50值来看, 酒蒸品 及生品毒性大小接近,而清蒸品毒性略有所增大,总 之说来, 毒性很小, 酒蒸后虽不能降低毒性, 但也并未 使毒性增大,因而不会影响临床用药安全。 本文证实了酒蒸女贞子的意义,说明中医临床应 用酒蒸女贞子滋补肝肾有一定的科学依据。 参考文献: 〔1〕　王浴生. 中药药理与应用 [ M ] . 北京 :人民卫生出版社, 1985. 130. 〔2〕　戴培兴, 陈玲,蓝树彬. 女贞子中的升白细胞有效成分的 实验研究[ J] .中成药研究, 1982, ( 1) : 42. 〔3〕　徐叔云. 药理实验方法学 [ M ] . 北京 :人民卫生出版社, 1982. 973. 21西北药学杂志　2004 年 2 月　第 19 卷　第 1 期 〔4〕　周重楚,高洪波, 王晶,等 .五加参归芪蜂王浆的药理作 用[ J] .中药通报, 1986, 41( 9) : 55. (收稿日期: 2003-07-17) 忍冬感冒胶囊抗腺病毒体外实验 郑建武1, 方　 2, 楚雍烈1 ( 1. 西安交通大学医学院微生 物学教研室, 陕西 西安 710061; 2. 西安军工医院, 陕西 西安 710077) 摘要:目的　对忍冬感冒胶囊抗腺病毒感染进行体外 试验。方法　采用细胞培养观察药物对细胞病变作用 的影响。结果　忍冬感冒胶囊浸液两种接种方法对腺 病毒Ⅲ型 ( Ad3 ) 感染的IC50分别为5 0 0和9 3 . 0 2 g�L - 1, IC90为952. 38和134. 95 g�L - 1, MIC 为288. 18 和67. 98 g�L- 1。结论　忍冬感冒胶囊浸液浓度500～ 125 g�L- 1 ,对腺病毒Ⅲ型( Ad3 )有较强直接灭活作用 ( P < 0. 01) ; 浓度1000～500 g�L - 1, 可抑制和/或延 缓腺病毒Ⅲ型( Ad3 )在细胞内的增殖。 关键词:忍冬感冒胶囊;腺病毒; 细胞培养 中图分类号: R965　　　文献标识码: A　　　 文章编号: 1004-2407( 2004) 01-0022-01 　　忍冬感冒胶囊系由银花藤为主药的组方,临床用 于治疗急性呼吸道感染有一定疗效。在诸多的呼吸道 病原体中,腺病毒的感染在我国比较普遍,婴幼儿腺 病毒肺炎又是我国发病率最高的一种病毒性肺炎〔1〕, 为此,我们在对忍冬感冒胶囊抗流感病毒药效作用研 究的基础上, 对忍冬感冒胶囊抗腺病毒Ⅲ型( Ad3 )的 药效作用进行了体外试验。 1　材料 1. 1　忍冬感冒胶囊　由山西亚宝药业集团股份有限 公司提供,批号020807。 1. 2　病毒　腺病毒Ⅲ型( Ad3) , 本室保存。 1. 3　细胞　Hep-2传代细胞株,本室保存。 1. 4　病毒唑　华北制药秦皇岛有限公司生产, 批号 020617。 1 . 5　DMEM培养液、二氧化碳培养箱均系国外进口。 2　方法〔2〕与结果 2. 1　试药　称取忍冬感冒胶囊颗粒10 g(含生药10 g�g - 1) , 加入无离子水中,配制成10% (含生药1 000 g�L - 1 )药液,隔水煮沸除菌后备用。 2. 2　忍冬感冒胶囊对 Hep-2细胞的毒性测定　将忍 冬感冒胶囊浸出液,用培养液自1 000 g�L- 1开始连 续2倍稀释至3. 91 g�L - 1,分别加入细胞孔内,每稀释 度3孔, 每孔0. 1 mL; 同时设细胞对照, 置37℃ 5% CO2培养,每日观察细胞病变现象,连续观察5 d。结果 见表1。 2. 3　忍冬感冒胶囊浸出液对腺病毒Ⅲ型( Ad3)的直 接灭活作用　将病毒( 50TCID50 )分别与不同浓度药 液等量混合, 37℃作用2 h后接种至已成单层的细胞 孔内,同时设病毒、阳性药物和正常细胞对照组。37℃ 5% CO 2培养,逐日观察细胞病变,连续观察5～7 d。 结果见表2。 表1　忍冬感冒胶囊对 Hep-2细胞的毒性作用 试验 孔号 受试药液浓度/ ( g�L - 1) 1 000 500 250 125 62. 5 31. 25 15. 63 7. 81 3. 91 细胞 对照 1 + - - - - - - - - - 2 + - - - - - - - - - 3 + - - - - - - - - - 　　注: ( - )正常, ( + ～� ) 25%～50%肿胀, ( � ～� ) 75%～100%肿胀。 表2　忍冬感冒胶囊对腺病毒Ⅲ型(Ad3)直接灭活作用 　　组　　别 实验 孔数 细胞病变孔数 ( - ～±) ( + ～� ) ( � ～� ) P * 忍冬胶囊/ ( g�L- 1) 　　500 9 9 0 0 < 0. 05 　　250 9 9 0 0 < 0. 05 　　125 9 9 0 0 < 0. 05 　　62. 5 9 0 3 6 > 0. 05 　　31. 25 9 0 0 9 病毒唑对照 9 9 0 0 < 0. 05 腺病毒对照 9 0 0 9 细胞对照 9 9 0 0 　　* 与病毒对照组比较 2. 4　忍冬感冒胶囊浸出液对腺病毒Ⅲ型( Ad3 )致细 胞病变的抑制作用　先将病毒接种至单层细胞孔内, 吸附2 h后分别加入不同稀释度受试药物,同时设病 毒对照、阳性药物和正常细胞对照组。同上培养观察, 结果见表3。 表3　忍冬感冒胶囊对腺病毒Ⅲ型(Ad3)致细胞病变的 抑制作用 　　组　　别 实验孔数 细胞病变孔数 ( - ～±) ( + ～� ) ( � ～� ) 抑制率 ( % ) 忍冬胶囊/ ( g�L- 1) 　　1 000 9 9 0 0 100* 　　500 9 1 8 0 100* 　　250 9 0 0 9 　　125 9 0 0 9 　　62. 5 9 0 0 9 病毒唑对照 9 9 0 0 病毒对照 9 0 0 9 细胞对照 9 9 0 0 　　　* 与病毒对照组相比 3　讨论 表1显示:忍冬感冒胶囊对 Hep-2细胞毒性较小, 其最大无毒浓度为500 g�L - 1。表2显示: 忍冬感冒胶 囊500～125 g�L - 1可直接灭活病毒, 浓度越高对腺病 毒Ⅲ型( Ad3)灭活作用越强,其 M IC为67. 98 g�L - 1, IC50为93. 02 g�L - 1, IC90为134. 95 g�L - 1。表3显示:忍 冬感冒胶囊1 000 g�L - 1能完全抑制病毒致细胞病变 作用, 随稀释度增大抑制作用减弱, 忍冬胶囊500 g�L - 1有延缓腺病毒致细胞病变的作用, 细胞病变在 接种后72～96 h 才出现,而且病变细胞数较少,病变 程 度 较 轻 , 其 MIC 为 288. 18 g�L- 1 , IC50为500 g�L - 1, IC90为952. 38 g�L - 1。 参考文献: 〔1〕　金奇 . 医学分子病毒学 [ M ] . 北京: 科学出版社, 2001. 707. 〔2〕　中国医学科学院流行病防治所. 常见病毒实验技术 [ M ] . 北京:科学出版社, 1978, 34-37. (收稿日期: 2003-08-01) 22 西北药学杂志　2004 年 2 月　第 19卷　第 1期