脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层修复猪创伤性皮肤缺损的比较研究

中国修复重建外科杂志2006年第2o卷第 2期 脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层修复猪创伤性 皮肤缺损的比较研究 范伟杰 杨志明 罗静聪 黄云 李秀群 王珍 ·155· 【摘 要】 目的 比较脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层作为创伤性皮肤缺损覆盖物，对创面修复的效果。 方法 7只四川长白小猪，每只猪背部两侧各做 3个 4 cm×4 cm大小的皮肤缺损，深达深筋膜。每侧缺损随机分为 3组， 用 不同敷料 覆盖。A组 ：双层脱细胞羊膜 ；B组 ：双层脱 细胞小肠 黏膜下层 ；C组 ：空 白，生理盐水纱 布覆 盖。术后 观察创 面 局部情况、创面愈合率，10 d(2只，各组 4个皮肤缺损)、20 d(2只，各组 4个皮肤缺损)、30 d(3只，各组 6个皮肤缺损)处 死动物取材。行组织学观查，炎性细胞、血管内皮细胞及增殖细胞计数，羟脯氨酸含量测定。 结果 A、B组覆盖的敷料 与创面黏附紧密，与纱布无粘连 ，更换敷料时创面无渗血。c组纱布与创面黏附紧密，术后 22 d前更换纱布时创面出血。 组织学观察 ：术后 各时 间点 A、B组皮下组织 内炎性 细胞数较 c组少 ；C组皮下组织 内胶原 分布较 A、B组紊乱 。术后各时 间点 A、B组创面愈合率较 c组高，差异有统计学意义(P<0．05)；C组术后各时间点炎性细胞计数、皮下组织及肉芽组 织 内增殖细胞数 明显高于 A、B组 ，术后 2O、30 d，羟脯 氨酸含量 高于 A、B组 ，差异有统计学 意义(P<0、05)；3组 内皮细 胞计数 ，差 异无统计学 意义 (P>O．05)。A、B组创 面局 部情况 、创 面愈合率 、病理组织学检查 、炎性 细胞数计数、血管 内皮 细胞计数 、增 殖细胞计 数和羟脯氨酸含量 ，差 异均无统计学 意义(P>O、05)。 结论 采用脱 细胞羊膜 、脱细胞小肠黏 膜 覆盖创伤性皮肤缺损，有提高创面愈合率、减少炎性反应，控制皮下组织及肉芽组织中细胞增殖，使胶原纤维有序排列的 作用，能减少创面组织的出血和渗出。脱细胞小肠黏膜覆盖创面具有与脱细胞羊膜覆盖创面相近的修复效果。 【关键词】 脱细胞小肠黏膜下层 脱 细胞羊 膜 创面愈合 猪 中图分 类号 ：R318．O8 R62 文献标识码 ：A A C0M PARA’rIVE S’rUDY o ACELLULAR SM ALL l ’I’ESTINAL SUBM UC0SA A D ACELLULAR AM NION AS DRESSINGS FOR TRAUMATIC SKIN DEFECTS~FAN Weijie，YANG Zhiming，LUO Jingcong，et a1．Division of Stem Cell and Tissue Engineering，State Key Laboratory of Biotherapy，West China Hospital，Sichuan University， Chengdu Sichuan，61004I，P．R．China Corresponding author：YANG Zhiming，E—mail：orthop@public．cd．5c．cn [Abstract] Objective To compare the reparative effects between the acellular small intestinal submucosa and the acellular amnion as dressings for traumatic skin defects．M ethods Three full—thickness skin defects，which were close to the vertebral column of the pig，were created on both sides of the dorsum．The skin defects were randomlv divided into three groups．In each group，the following different materials were used to cover the skin defects：the acellular amnion in Group A，the acellular small intestinal submucosa (SIS)in Group B，and the physiological saline gauze in Group C (the control group)．The specimens from the skin defects were harvested for a histological evaluation and for determination of the hydroxypronne content at 10(2 pigs)，20(2 pigs)，and 30 days(3 pigs)．W e observed the healing process of the wound and its healing rate，counted the inflammatory cells，vascular endothelial cells，and proliferating cells，and determined the hydroxyproline content． Results The acellular amnion in Group A and the acellular SIS in Group B adhered to the wound tightly，but they did not adhere to the dressing；when the dressing was changed ，the wound did not bleed．The saline gauze in Group C adhered to the wound tightly，but when the dressing was changed，the wound bled until 22 days after operation．Under the microscope，the collagen in the tissue below the epithelium was arranged more regularly and there were fewer cells concerned with inflammation in Groups A and B than in Group C at 10，20，and 30 days after operation．At 10，20，and 30 days after operation，the wound healing rate was greater in Groups A and B than in Group C．The number of the inflammatory cells and the proliferating cells were greater in Group C than in Groups A and B．There was a statistically significant difference (P< 0．05)。At 20 and 30 days after operation，the content of hydroxyprohne was greater in Group C than in Group A and B．There was a statistically significant difference(P< 0．05)．However，there was no statistically significant difference between Group A 基金项目：国家高技术研究发展(863)资助项 目(2001AA216011) 作者单位：四川大学华西医院 生物治疗国家重点实验室 ·干细胞与组织工程研究室(成都，610041) 通讯作者：杨志明，教授，博士导师，研究方向：组织工程，E—mail：orthop@public．cd．sc．cn 维普资讯 http://www.cqvip.com and GrouD B in the wound healing rate，the numbers of the inflammatory cells， vascular endothelial cells and proliferating ce11s，and the content of hydroxyproline(P> O．05)．There was no statistically significant difference among the three groups in the number of the vascular endothelial cells．Conclusion Compared with Group C，the wound healing rate is improved， the collagen in the tissue below the epithelium is arranged more regularly， and the inflammatory ce11s，bleeding，and effusion are reduced in Groups A and B．The reparative effects of the acellular amnion and the acellular small intestinal submucosa as dressings on the skin defects are almost the same． [Key words] Acellular small intestinal submucosa Acellular amnion Wound healing Pig Foundation item：National High Technology Research and Development Program of China(2001AA21 6011) 皮肤缺损创面常发生水分、营养物质丢失 ，容易导 致感染。临床上常用皮肤替代物预防和治疗皮肤缺损 后出现的上述问题。常用的皮肤替代物有多种 j，各有 其优缺点及适应证，目前尚无一种敷料称得上完美。新 鲜或冷藏羊膜用于眼科治疗角膜缺损、结膜炎症及缺 损 ，效果良好l2 ]，羊膜作为烧伤创面覆盖物 ，具有诱导 上皮再生 ，减少渗出物，减轻疼痛的功能[4]。但新鲜或 冷藏羊膜有被细菌和病毒污染的可能，有传播 HIV、 乙型肝炎、丙型肝炎等疾病 的潜在危险，且储存和使用 不方便。近年来在生物敷料中，组织脱细胞材料的研究 进展 ，使其抗原性降低 ，组织相容性增加 ，现出广泛 的开发和应用前景l5]。由于脱细胞冻干保存羊膜除去 羊膜上的细胞 ，保留羊膜基质成分 ，从而降低的羊膜 的 抗原性。脱细胞羊膜 的处理过程中使用戊二醛等化学 物质以及使用前用环氧乙烷消毒等措施 ，大大降低 了 疾病传播的可能性 ，且储存和使用方便。猪脱细胞小肠 黏膜下层 (small intestinal submucosa，SIS)应用于血 管、泌尿道 、软骨、小肠 、硬脑膜 、肌腱等组织缺损 的修 复实验中，表现出良好的组织相容性，能促进相应的组 织再生及修复 ]。我们的研究将脱细胞羊膜 、脱细胞 SIS用于覆盖猪创伤性皮肤缺损 ，观察其对创 面的影 响，拟为临床选择一种廉价、方便、有效的生物敷料 。 1 材料与方法 1．1 材料 脱细胞冻干羊膜、脱细胞冻干 SIS由本实验室制 备 ，塑料包装 ，环氧乙烷消毒备用口 ]。封闭群 四川长白 小猪 ，2～3月龄，体重 23～26 kg，平均 24．4 kg，雌雄 不限(由本地猪场提供)。免疫组织化学试剂 (北京 中杉 金桥生物技术有限公司)。HP1100高效液相色谱仪附 紫外检测器(Agilent Technologies公司，美国)。 1．2 方法 1．2．1 实验动物分组 7只四川长白小猪，每只猪背 部左右两侧分别做 4 cm×4 cm 大小的皮肤缺损 3个 ， 深达深筋膜。每侧背部皮肤缺损随机分 3组 ，用不同敷 料覆盖 。A组 ：单纯双层脱细胞羊膜 ；B组 ：单纯双层脱 细胞 SIS；C组 ：空 白，生理盐水纱布覆盖。术后 10 d (2只、各组 4个皮肤缺损)、20 d(2只、各组 4个皮肤 缺损 )、30 d(3只、各组 6个皮肤缺损 )处死动物 ，取病 理组织标本 。 1．2．2 动物手术 术前 24 h用生理盐水水合脱细胞 SIS和脱细胞羊膜。于术前 30 min耳后颈部肌注硫酸 阿托品 0．5 mg，用氯胺酮行基础麻醉 ，俯卧位 固定 。气 管插管呼吸机辅助呼吸，氯胺 酮、安定 、芬太尼复合麻 醉 。于猪背部两侧做 4 cm×4 cm正方形皮肤缺损 ，深 达深筋膜，皮肤缺损间距 3 cm，彻底止血，A、B组分别 用 水合后 的双层脱细胞羊膜 和脱 细胞 SIS贴敷于创 面，用 5-0单股无创尼龙线固定周缘；c组仅用生理盐 水纱布覆盖。3组均用生理盐水湿纱 布、湿棉垫 、凡士 林纱布、干棉垫依次覆盖 ，加压包扎 。术后每 2天更换 敷料一次，A、B组脱细胞羊膜和脱细胞 SIS不更换， C组用生理盐水纱布覆盖 。术后各时间点处死动物取 材 。取材组织包括缺损边缘 2 mm 正常皮肤、创面 中央 组织 ，深及深筋膜正常组织。从缺损 中央将组织分为两 半 ，一半置入 4 多聚 甲醛固定 24 h，制成石蜡切片 ， 供常规染色和免疫组织化学染色用 ；另一半用于测定 皮肤缺损组织羟脯氨酸含量。 1．3 观测指标 1．3．1 创面局部情况 术后更换敷料时观察创面情 况，有无红肿、渗出及 出血等。 1．3．2 创面愈合率 每组皮肤缺损于取材时肉眼观 察创面上皮化边缘，按照 ：创面愈合率 ( )：(原 始创面面积 一未愈合创面面积)×100／原始创面面积 计算 。 1．3．3 组织学观察 取材后常规石蜡切片 ，HE染色 观察 。随机取近表面视野，400倍显微镜下观察，计数 炎性细胞数 (包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、中性 粒细胞 、淋 巴细胞 、单核细胞)，每张切片取 3个视野 ， 计算每个视野的炎性细胞平均值 。以兔抗人Ⅷ相关抗 原多克隆抗体为一抗，按免疫组织化学 SP法染色，胞 膜和胞浆呈棕黄色者为阳性 ，为血管内皮细胞(计数方 法同炎性细胞)。以鼠抗人细胞增殖核抗原抗体 Ki67 为一抗，按免疫组织化学 SP法染色，胞核为棕黄色者 为阳性，为增殖细胞。分别计数皮肤缺损边缘和中心的 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国修复重建外科杂志 2006年第 20卷第 2期 上皮下增殖细胞数 (计数方法同炎性细胞)。 1．3．4 羟 脯 氨 酸 含 量 测 定 取 皮 肤 缺 损 组 织 约 1O0 mg，除去正常皮肤 、痂皮 ，加适 量氯仿 甲醇溶 液 (2：1)，用研磨器研匀，浸泡 2 h，过滤 ，再用乙醇水混 合液(4：1)，丙酮依次冲洗 ，60 C烘箱过夜 ，精确称重。 采用 2，4一二硝基 氯苯柱前衍生化反相高效液相色谱 法，以乙晴一醋酸盐缓冲系统梯度洗脱 ，于 360 nm 波长 处测定羟脯氨酸含量 j。 1．4 统计学方法 采用 SPSS 10．0统计软件包进行统计学处理，数 据以均数±标准差表示。3组间创面愈合率、炎性细胞 计 数、内皮细胞计数、增殖细胞计 数、羟脯氨酸含量 比 较采用单 因素方差，两组间 比较采用独立样本 t 检验 ，P值<0．05为有统计学意义 。 2 结果 2．1 创面局部情况 术后 2 d，各组创面均有浆液性 渗出，皮肤收缩不 明显；A、B组覆盖的材料与创 面黏 附紧密 ，与纱 布敷 料无粘连 ；C组纱布与创面黏附紧密 ，更换纱布时创面 出血。术后 6 d，3组创面深度均变浅 ，A、B组创面干 燥 ，与周围纱布敷料无粘连 ，创面无炎性渗出物；C组 创面有较多浆液性渗出物，揭开纱布后见创面肉芽组 织较新鲜，创面明显渗血。术后 10 d，各组创面深度平 正常皮肤，创面边缘有上皮 向创面 内长入，揭开 C组 纱布可见有渗血。术后 20 d，各组创面进一步缩小，A、 B组创面干燥 ，脱细胞羊膜或脱细胞 SIS周缘翘起，质 地变脆，部分脱落，显露上皮化创面，A、B组上皮覆盖 无明显差别 ，两组创面愈合率均较 C组高 ；C组创面仍 有少量渗出，创面周 围有上皮化创面。术后 22 d，C组 创 面结痂 ，创面渗出停止。术后 25 d，各组创面上皮化 面积增加，C组创面结痂。术后 30 d，脱细胞羊膜或脱 细胞 SIS敷料脱落 ，A、B组创面愈合 ；C组创 面部分 愈合。 2．2 创面愈合率 术后各时间点 A、B两组创面愈合率均高于 C组 ， 差异有统计学意义(P<0．05)。A、B两组 比较，差异无 统计学意义(P>0．05)。结果见表 1。 2．3 组织学观察 2．3．1 HE染色观察 术后 10 d，A组脱细胞羊膜与 创面黏附较紧密 ，中央部分更为明显 ，黏附紧密，羊膜 无血管化，创面周缘有新生上皮向创面中央方向生长； 有上皮覆盖的区域炎性细胞较少 ，而无上皮覆盖的区 域有较多炎性 细胞 ，创面表面与脱细胞羊膜之 间有一 层薄痂 ，无覆盖上皮的区域为肉芽组织，含有较多的毛 表 1 各组不同时间点创面愈合率 ( ，x~s) Tab． 1 Healing rate of wound at different intervals in different groups( ，j±s) 分组 Group 创面愈合率 Cells concerned with inflammation 10 d( ：4) 20 d( 一4) 30 d( 一 6) 与相同时间点c组比较P值<0．05 Compared with Group C．，J< 0．05 细血管；有少量细胶原纤维分布于创面组织内。B组脱 细胞 SIS与创面黏附紧密，与新生上皮或肉芽组织之 间也有一层薄痂 ，与 A组 比较 ，新生上皮生长无明显 差异 ；新生上皮下及 肉芽组织 内炎性细胞稍多，毛细血 管无明显差异 。C组创面边缘见新生上皮 ，创面炎性细 胞较 A、B两组明显多，毛细血管扩张明显 。术后 20 d， 3组大部分创面周缘被新生 上皮覆盖 ，上皮与正常上 皮组织相 比上皮钉 突少 ，无汗腺和毛囊。A、B两组新 生上皮长度较 C组长 ；皮下组织 中，A、B两组炎性细 胞数无 明显差别 ，C组炎性细胞量 明显高于 A、B两 组 ；3组均见新生皮下组 织 内胶原成分 增加，胶原增 粗，新生上皮与正常上皮交接处及新生皮下组织与深 筋膜交接 处胶原变化更 明显，胶原 纤维方 向 C组 较 A、B组紊乱 (图 1)。术后 30 d，各组创面大部分被上皮 覆盖，皮下组织内炎性细胞、毛细血管数量较术后 10、 20 d减少 ，C组炎性细胞数明显较 A、B两组多，皮下 组织胶原纤维较 A、B组粗、密集 ，排列紊乱。各组皮下 组织 中胶原纤维仍 比正常皮肤少 。 2．3．2 炎性细胞计数 术后 10 d，3组炎性细胞数较 多，其 中 C组 明显高于 A、B组 ，差 异有 统计学 意义 (P<0．05)。术后 20、30 d，随着上皮的生长，各组炎性 细胞数量均下降，但 C组仍高于 A、B两组，差异有统 计学意义(P<0．05)。各时间点 A、B两组 比较，差异 无统计学意义(P>0．05)。结果见表 2。 2．3．3 血管内皮细胞计数 术后各时间点各组血管 内皮细胞数逐渐减少 ，相同时间点 3组间比较 ，差异无 统计学意义(P>o．05)。结果见表 2。 2．3．4 细胞增殖计数 各组术后 lO d创面边缘皮下 组织及 中央肉芽组织 内增 殖细胞 明显 高于术后 20、 30 d，各时间点 3组增殖细胞数逐渐减少 。A、B两组边 缘和中心的增殖细胞数明显低于 c组，差异有统计学 意义(P<0．05)，A、B两组间比较，差异无统计学意义 P>0．05)，见表 3。 维普资讯 http://www.cqvip.com 2 4 U r J】 睦 删 水 !【}、．}l】1．^ ．I； I创 rllI l I羟脯 盘 均 骶 r( I． 件竹绒 学意 (，’ f)[j )；A 13 ¨ 鞍， 蚌 兄统 _¨ 酋盟(，。 c)c) 1．站 袁 j 讨 论 I 昧f ⋯ 世 辟ft物 I常 M啦料 J 然 物 f绯 E功物 己类物旭构 ． 料 叮5； 、帖纱布 台北}r维纱m ．这类敷料 保护刮⋯作 1_Ij．制怍筒他 价格恒酋 nl儿进 恃刨而 润，救料 维翳脱浩，造成异物 M，慨纳州可引起疼痈、J．怍 大．日捌伤新 的 【【 l 符_，『些般料竖成改进．但l 墟缺电仍然术很好范Ⅲ{ ! 成嫩料．知 嗵遗 膜 多氢 性I 睦乙 泡俅 水凝腔 啦料 ，藻 艘盐类 敷料 ．脞 体啦制并．种类紧多 荇冉优缺点|l；生物敞荆，¨ 舁体 皮 刊-戊 、 脱 、动物 啦腱 腔 啄膜 甲0t胺 薄膜锋 ．可 各 M 女 m (十 + J l’ 2 i hl r Il ‘⋯ ‘r n n~．d h¨ ln¨ }Im|11⋯il~Jl and -¨ Ill~l r r“h¨ IIl 、¨ L nlil r⋯ |l1 ln1 rv i n1．1jII r l¨|ln⋯ lL j * 目 0f 镕 r十 ，i h ¨ ¨1 l · lIl1⋯ “ 、¨⋯ I r 111 1 ll l_I“ in dil¨ r ⋯ r‘1_】D⋯ Il~』 目 l §组 211 iI ⋯ 200] ^L E I 』I n_I w I I ¨l’ J、铂 J【_l t lI￡ ， m r II r 隶 女 Ⅲ # ¨ I 14l f’日l l●J1⋯ rnti⋯ n j#r¨ l 2Il d 5 nr【⋯ ，prrn“㈣ t Tlli 200】 ‘ ．_1【 l【LI|_1州 |【Ⅲ l 1w 1 ⋯ ⋯ ⋯一l_ “ tI， lⅢl Ⅲ I¨ I1 1 h1 LtII ⋯ 1l l¨ r⋯I J1l川 I T 1 ⋯ ⋯ {r__|⋯ r】rlf ⋯n 、 h ⋯⋯ I1 w i n uilI1 rl” ‘T¨ 11II 、 l 】Ii r·II i T1f T⋯ III(⋯ I Ⅲ ll_n I ⋯ “E v cI1】⋯ _l_、 I r¨ u L】w c】1 I I1}t ¨ TT1『l |_。n wII’ ¨ r1 1¨ f，r ⋯I L I 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国修复重建外科杂志2006年第2o卷第2期 表 4 各组不同时间点羟脯氨酸含量( g／rag， ± ) Tab．4 The content of hydroxyproline at different intervals in different groups(p．g／mg， ± ) 组别 Group 羟脯氨酸含量 Content of hydroxyprohne i 了_—— 一— 苫 与相同时间点 C组比较P值dO．05，一 与相同时间点 C组比较 ，】值<0．O1 Compared with Group C，，】< 0．05：～ Compared with Group C， ，】< 0．01 黏附在创面上较长时间，具有透气、保护创 面、减轻疼 痛的特点口]。其中，羊膜被认为是一种比较好的生物敷 料 ，用于眼表损伤的治疗有多年的历史 ，用于角膜 、结 膜的损伤有促进创面愈合的作用，也有用于烧伤的报 道，使用羊膜后 ，其能黏附于创面 ，具有透气功能 ，创面 干燥 。使用后患者疼痛明显减轻 ，约 7 d，随边缘上皮生 长，羊膜边缘卷曲，创面愈合后羊膜脱落 】。④组织工 程皮肤 ，这是解决皮源问题的方向，目前已有带活细胞 的组织工程皮肤用于临床的报道 ，但由于价格昂贵，运 输、使用不方便，与临床应用需要相差较远等原因而未 广泛使用。 一 种良好的皮肤替代物应符合造价低、保存期长、 复活后即可应用 、无抗原性 、具持久性 、柔韧性、可防止 水分丢失、对细菌具有屏障作用 、对不规则创面的顺应 性好 、易于固定 、随儿童发育成长能相应地生长扩大、 一 次手术即完成移植过程 ，以及不会过度增生的条件 。 但 目前尚无一种皮肤替代物能同时满足这些条件。 猪脱细胞 SIS经高渗盐水或去垢剂一酶消化法彻 底去除材料 中的残 留细胞 ，在修复多种组织的实验 中 表现出良好的组织相容性 ]。0．2 过氧乙酸(含 5 无水 乙醇)可达到完全消毒作用。包括细菌和病毒均可 杀灭 ，可避免人畜共患病 ，使用安全 。 。虽有实验证明 羊膜具有保护创面、促进创面上皮化的功能，但羊膜的 来源受到一定的限制，很难做到批量加工和生产。脱细 胞 SIS克服 了羊膜生产和加工上的缺点 ，容易做到批 量加工和生产 ，且随着异种移植的研究深入，猪的多种 器官可能成为人的器官的供体 。该实验结果表明用脱 细胞羊膜或脱细胞 SIS覆 盖创伤性皮肤缺损创 面，与 空白对照组比较，有促进创面愈合的效果。术后各时间 点 A、B组创面愈合率均高于 C组，而 A、B组之间差 异不明显 。脱细胞羊膜和脱细胞 SIS覆盖的创面与敷 料不黏附，换药时不出血 。术后 6 d，创面干燥 ，表面无 渗出，而空白组术后 20 d未愈合的创面仍有渗出。 脱细胞羊膜促进上皮生长的机制还不清楚，可能 与羊膜含有高水平 的表皮生长 因子、碱性 成纤维细胞 生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)等作 用有关⋯]。猪脱细胞 SIS与脱细胞羊膜创面愈合率 比 较，差异无统计学意义。表明脱细胞SIS也有促进创面 上皮化的作用。猪脱细胞 SIS被证明与多种组织有 良 好的组织相容性，用于修复膀胱、尿道、阴茎、硬脑膜、 腹壁、小肠等组织缺损 ，且组织易于血管化，组织相容 性好。猪脱细胞SIS促进创面上皮化的机制尚不清楚， 研究表明，猪脱细胞 SIS含有纤维连接蛋白、Ⅳ型胶 原、FGF一2、转化细胞生长因子p等。SIS还有抗微生物 的作用，有抑制大肠杆菌 和金黄色葡萄球菌 的作 用 。FGF一2有利于角朊细胞、内皮细胞、黑色素细胞 和成纤维细胞的有丝分裂，有促进角朊细胞增殖的作 用h 。猪脱细胞 SIS促进创面上皮化的功能可能与多 种因素相关 ，创面受到 SIS的保护 ，减少 了换药时敷料 与创面黏附，避免上皮组织脱落，覆盖创面使其免受微 生物的影响 ；同时与 SIS含有多种有利于上皮细胞迁 移、增殖的因子有关。 实验结果表明脱细胞羊膜和脱细胞 SIS覆盖的创 面皮下组织及肉芽组织 内增殖细胞 、羟脯氨酸含量较 空 白对照组低，组织中胶原纤维排列较空 白对照组规 律 ，可能脱 细胞羊膜及脱细胞 SIS具有抑制创 面成纤 维细胞过度增殖的功能，从而抑制瘢痕的形成 ，其机制 尚不清楚。羊膜用于治疗结膜疾病时也有预防结膜下 瘢痕形成的作用，许军等认为与羊膜的机械屏障及羊 膜含有的一些 生长因子对成纤维细胞的调节作用有 关 ⋯。 羟脯氨酸是胶原较为特有的氨基酸 ，通过羟脯氨 酸的测定可以间接反映组织胶原的含量 。羟脯氨酸含 量测定表明，A、B组术后 2O、30 d羟脯氨酸含量均低 于 C组 ，其原因不清楚 。从细胞增殖核抗原抗体 Ki67 表达来看 ，C组在术后各时间点 Ki67表达的细胞数均 高于 A、B组 ，而在皮下组织及 肉芽组织中主要细胞成 分是成纤维 细胞 ，所以成纤维细胞 的增加可能是羟脯 氨酸含量增加的原因之一 。A、B组与 C组比较，C组 炎性细胞明显高于 A、B组，其原因可能与脱细胞羊膜 和脱细胞 SIS表面干燥，抑制细菌生长有关，也可能与 这两种材料本身有抑制细菌生长的作用有关口 。有研 究表明，炎症是刺激瘢痕形成 的原 因n ，脱 细胞羊膜 和脱细胞 SIS对炎症的抑制作用是否是皮下和肉芽组 织中胶原含量较低的原因，还值得进一步研究。 3组间血管内皮细胞比较无明显差异，表明 3种 维普资讯 http://www.cqvip.com · 16O· 创面覆盖方法对血管形成影响的差异无统计学意义。 但 C组术后 10 d，毛细血管扩张明显 ，术后 20 d减轻 。 毛细血管扩张的原因可能与炎性反应较重有关 。 综上述 ，采用脱细胞羊膜、脱细胞 SIS覆盖创伤性 皮肤缺损，与空白对照组比较，有提高创面愈合率、减 少炎性反应 ，控制皮下组织及肉芽组织中细胞增殖 ，使 胶原纤维有序排列的作用 ，减少创面组织的出血和渗 出。脱细胞 SIS覆盖创面具有与脱细胞羊膜覆盖创面 相近的修复效果 。 4 参考文献 1 廖文伦．烧伤创面敷料的研究进展．医学文选，2003，22(5)：730— 732． 2 Gris 0，I opez—Navidad A，Caballero F，et a1．Amniotie membrane transplantation for ocular surface pathology：long—Term Results． Transplant Proe，2003，35(5)：2031-2035． 3 Dua HS．Gomes JA，King AJ，et a1．The amniotic membrane in Ophthalmology．Surv Ophthalmol，2004，49(1)：51—77． 4 Ramakrishnan KM ，Jayaraman V．Management of parial thickness burn wounds by amniotic membrane：a COSt—effective treatment in developing countries．Burns，1 997，23(Suppl 1)：33—36． 5 张晨，高景恒，柏树令．脱细胞组织基质一 生物衍生材料的新成 员．实用美容整形外科杂志，2000，11(3)：140—141． 6 苏琰，张长青，曾炳芳．小肠黏膜下层修复组织缺损的应用研究．国 外 医学 骨科学分册 ，2004，25(1)：41—43． 致读者 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery，2006．Vol 20(2) 8 11 罗静聪，李秀群，杨志明，等．脱细胞羊膜的制备及其生物相容性研 究．中国修复重建外科杂志，2004，18(2)：1O8—111． 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根据《中国学术期刊(光盘版 )检索与评价数据规范》的规定 ，为便于文献 的统计 与期刊评价 ，确定文献 的检索 范围 ，提高检索 结 果的适用性 ，本刊已于 2005年增 加论文文献标识码 。文献标识码分类如下 ：A：理论与应用研究学术论文 (包括综述报告)；B：实用性 技术成果报告(科技)、理论学习与社会实践总结(社科)；c：业务指导与技术管理性文章(包括领导讲话、特约评论等)；D：一般动态 性信息(通讯、报道、会议活动、专访等)；E：文件、资料(包括历史资料、统计资料、机构、人物、书刊、知识介绍等)。不属于上述各类的 文章以及文摘、零讯、补白、广告、启事等不加文献标识码。请作者投稿时务必根据以上分类注明该文文献标识码 。 关于关键词标引的 每篇论文需标引 2～5个关键词 ，请尽量使用美 国国立医学图书馆编著的最新版《Index Medicus》中医学 主题 词表(MeSH)内所 列的词。如果 MeSH表中尚无相对应的词，可选用直接相关的几个主题词进行组配；可根据树状结构表选用最直接的上位主题词； 必要时 ，可采用 习用的 自由词并 列于最后 。关键词中的缩写应按 MeSH表还原为全称 。每个英 文关键 词第 一个字母 大写 ，并 与中文 关键词相对应 。 本刊编辑部 2006一Ol一12 维普资讯 http://www.cqvip.com