湿困脾胃证动物模型胃肠功能改变的实验研究

把肺或气管内致炎症物质如灰尘、细菌、病毒等连同痰液一起排 出体外。临床上特效止咳药如可待因之类 ,使用时要严格限制 , 因咳止而痰未排出炎症反而加重 ,最终导致病情恶化 ,所以仅仅 只是止咳或者化痰都不足以根本地解决咳嗽的问题 ,治疗的关键 是抗菌消炎 [ 4 ]。实验明铁苋菜对由刺激性物质或炎性介质引 起的气管、支气管的痉挛有很好的拮抗作用。可能的作用机理是 直接作用于气管平滑肌 ,抑制气管平滑肌的收缩 ,达到止咳、祛痰 作用。具体其止咳化痰的药物的有效成分还有待进一步研究 ,本 实验为开发铁苋菜在止咳化痰的功效及其药用价值的开发和利 用提供了有利的依据。 参考文献 : [ 1 ]　邓　莉 ,胡晋红. 铁苋菜水提取液对三硝基苯磺酸诱导的大鼠溃疡 性结肠炎的防治作用 [ J ]. 第二军医大学学报 , 2005, 26 (5) : 535. [ 2 ]　李仪奎. 中药药理实验学 [M ]. 上海 :上海科学技术出版社 , 1991: 300, 443. [ 3 ]　陈 　奇. 中药药理研究方法学 [ M ]. 北京 : 人民卫生出版社 , 1994: 149. [ 4 ]　李继洪 ,张志蓉 ,程玲珍 , 等. 咳喘清颗粒止咳平喘祛痰作用研究 [ J ]. 时珍国医国药 , 2006, 17 (5) : 749. 收稿日期 : 2008204221; 　修订日期 : 2008210220 基金项目 :四川省教育厅资助项目 (No. 2003A038) 作者简介 :张丰华 (19772) ,男 (汉族 ) ,山东荷泽人 ,现任成都中医药大学 讲师 ,在读 2006级博士研究生 ,硕士学位 ,主要从事方剂复方配伍规律与 疾病动物模型研究工作. 湿困脾胃证动物模型胃肠功能改变的实验研究 张丰华 1 , 刘 　伟 2 , 黄秀深 1 , 罗玉熙 1 , 吴施国 1 (1. 成都中医药大学 ,四川 成都 　610075; 　2. 东方药林药业有限公司 ,广东 广州 　510510) 摘要 :目的 创建大鼠湿困脾胃证动物模型 ,观察大鼠湿困脾胃证动物模型胃肠功能的病理变化。方法 建立大鼠湿困 脾胃证动物模型 ,通过体重、饮食量、腹围指数、胃肠运动吸收功能、胃肠激素水平、病理组织等方面观察其胃肠功能的改 变。结果 模型动物饮食减少 ,体重下降 ,胃肠胀气明显 ,胃排空和小肠推动能力下降 ,胃肠吸收功能降低 ,胃肠激素水平 紊乱 ,胃肠组织发生病理改变 ;经平胃散治疗后模型病变部分恢复 ,效果好于自然恢复组。结论 大鼠湿困脾胃证动物模 型胃肠功能异常 ,平胃散有改善作用。 关键词 :湿困脾胃 ; 　模型 ; 　胃肠运动 ; 　胃肠激素 中图分类号 : R285. 5　　文献标识码 : A　　文章编号 : 100820805 (2009) 0420857202 Study on the Function Change of Stomach In testine in the An ima l M odel of Dam pness Reten tion in the Spleen and Stomach ZHANG Feng2hua1 , L IU W ei2 , HUANG X iu2shen1 , LUO Yu2xi1 , WU Shi2guo1 (1. Chengdu U n iversity of TCM , Chengdu, S ichuan 610075, Ch ina; 2. Eastern Trad itiona lM edicine Pharm a2 ceu tica l L td. , Guangzhou, Guangdong 510510, Ch ina) Abstract:O bjective To investigate the pathological changes in experimental rats of dampness retention in the sp leen and stom2 ach . M ethods The function of stomach intestine was observed by measuring the body weight, appetite, abdomen circumference, movement and absorp tion of stomach intestine , gut hormone level , pathological tissue in experimental rats. Results The appetite of the rats was reduced . And their body weightwas descended . The tympanites of stomach intestine wasmanifest , gastric emp ty2 ing and small intestine impulsing capabilities were decreased , stomach intestine absorp tive function was cut down , gut hormone level was disordered , pathological changes were generated from stomach intestine tissue. But the pathology was partially recoved with Pingwei Powder , and the effects were better than the spontaneous recovery group. Conclusion Pingwei Powder can amelio2 rate the disfunction of stomach intestine in model rats of dampness retention in the sp leen and stomach. Key words:Retention of dampness in the sp leen and stomach; 　Models; 　Gastrointestinal motility; 　Gut hormon 　　湿邪致病是传统中医病因病机学的一个重要内容 ,具有多发 性、复杂性、难治性、隐匿性与变异性等特点 ,根据中医 “诸湿肿 满 ,皆属于脾 ”等理论 ,无论内、外湿邪皆易损伤中焦脾胃 ,从而 在临床上多易导致中焦湿阻证的出现。胃和肠道是湿困脾胃证 的主要病变中心。本实验在对湿困脾胃证动物模型的研究中 ,探 讨其胃肠功能的病理变化。 1　 1. 1　动物 SD大鼠 40只 ,雌雄各半 ,体重 180～220 g,由成都中 医药大学实验动物中心提供 ,合格证号 :川实动管质第 8号 ,检疫 后备用。 1. 2　药物 平胃散 ,配方 :苍术 12 g,厚朴 9 g,陈皮 6 g,炙甘草 3 g,均购自同仁堂成都分店。药液由制剂室制备 ,先按照临床用药 煎煮方法熬制成常规药液 ,再低温浓缩成含 1 g生药 /m l的高浓 度药液。 1. 3　试剂 GastrinⅠEnzyme Immuno A ssay, ADR D IAGNOSTICS, Batch No. : 050504。胃动素 (MTL )放射免疫试剂盒 ,解放军 总医院科技开发中心东亚免疫所提供 ,批号 : 0506。 2　方法 2. 1　动物分组及造模 实验动物适应饲养 1周 ,自由摄食全价颗 粒饲料 ,动物房温度维持在 18～25℃左右。按体重分层将大鼠 随机分为 4组 ,即空白对照组、湿困脾胃模型组、湿困脾胃治疗 组、湿困脾胃自然恢复组 ,每组 10只。 将大鼠放在温度 18～25℃湿度 90% ±5%的造模箱内饲养 ; 造模大鼠单日禁食并给予 4℃冰水 (2 m l/只 )灌胃 1次 ,双日供 应充足饲料并给予猪油 ( 4 m l/只 )灌胃 1次 ;每日 8: 00～16: 00 使大鼠站在 4 cm深的水中 ,控制睡眠时间 8 h。连续造模 20 d。 治疗组造模 20 d后 ,灌胃治疗方药 (10 m l/kg) ,共 5 d。同时空白 对照组和自然恢复组灌胃 0. 9%生理盐水 (10 m l/kg)。 2. 2　指标及检测方法 2. 2. 1　模型一般体征的观察 实验过程中密切观察大鼠的一般 状态 ,如 :饮水摄食情况、生长情况、体重、皮毛色泽等 ,造模及治 ·758· L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2009 VOL. 20 NO. 4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 疗结束后测量不同组大鼠体重、24h摄食量 (代谢笼法 )和腹围指 数。结果采用 SPSS11. 0统计软件处理 ,组间比较用单因素方差 分析法 (以下数据采用相同统计方法 )。 2. 2. 2　胃肠相关指标的测定 胃排空及小肠推进实验采用半固 体营养糊法 ,参照文献法 [ 1 ]改进。半固体营养糊 :取羧甲基纤 维素 5 g,溶于 125 m l蒸馏水中 ,然后依次加入奶粉 8 g,白糖 6 g, 淀粉 6 g,且每加 1次搅拌 1次 ,搅拌均匀后 ,再加入少量伊红染 料 ,搅拌均匀 ,最后配成 150 m l含 150 g营养糊的红色混合物 ,放 入 4℃冰箱储藏。使用前 2 h取出 ,恢复至室温。 胃排空试验 :按公式计算胃残留百分比 :胃残留率 ( % ) = (第 1次的胃总重 -第 2次的胃净重 ) /2 ×100% 小肠推进试验 :按公式计算小肠推进营养糊的百分比 :小肠 推进率 ( % ) =营养糊在小肠中的推进距离 ( cm ) /小肠全长 ( cm ) ×100% 胃肠激素测定 :所有组动物动物处置前 ,采用股动脉放血法 采血 5 m l,置于试管中 ,不抗凝 ,室温下静置 1 h,离心 5 m in,转速 2 000 r/m in,分离取血清 ,置 - 20℃冰箱保存 ,待测胃泌素、胃 动素。 2. 2. 3　胃肠组织形态学观察 所有组动物处置后取样 ,打开腹 腔 ,肉眼观察胃肠组织形态 ,然后分别将胃、十二指肠、空肠、结肠 取出 ,立即浸泡于 10%的福尔马林液中固定。常规 HE染色 ,光 学显微镜下观测组织形态。 3　结果 3. 1　模型一般体征的观察 造模后模型组大鼠出现食欲不振 ,饮 食量减少 ,大便溏 ,皮毛色泽晦暗发黄 ,消瘦 ,腹胀 ,体重减轻等症 状 ,造模第 18天自然恢复组死亡 1只大鼠。给药后 ,治疗组大鼠 症状基本好转 ,自然恢复组大鼠体征改善不明显。实验后体重、 24 h摄食量及腹围指数见表 1。 表 1　体重、摄食量、腹围指数变化 ( €x ±s) 组别 动物数 体重 m /g 摄食量 C / g·kg - 1体重 腹围指数 空白对照 10 285. 80 ±31. 77 110. 73 ±12. 25 52. 16 ±6. 12 模型 10 205. 80 ±11. 263 3 97. 80 ±33. 95 65. 19 ±4. 723 3 治疗 10 227. 80 ±19. 54# 106. 16 ±30. 34 60. 14 ±4. 21 自然恢复 9 216. 56 ±13. 03 100. 47 ±25. 98 63. 36 ±2. 67 　　与空白对照组比较 , 3 3 P < 0. 01;与模型组比较 , #P < 0. 05 由表 1可见动物模型建成后体重大幅下降 ,有一定的自然恢 复 ,但经平胃散治疗后体重恢复更为显著。造模后动物 24 h摄 食量明显降低 ,治疗后逐步恢复。造模后动物腹围指数明显升 高 ,治疗后有降低趋势。 3. 2　胃排空及小肠推进率的测定 结果见表 2。 表 2　胃肠运动功能变化 ( €x ±s) 组别 动物数 胃残留率 ( % ) 小肠推进率 ( % ) 空白对照 10 0. 778 ±0. 206 0. 594 ±0. 036 模型 10 0. 976 ±0. 129 93 0. 413 ±0. 0953 3 治疗 10 0. 881 ±0. 183 2▲ 0. 560 ±0. 055##▲ 自然恢复 9 1. 114 ±0. 149 5 0. 461 ±0. 059 　　与空白对照组比较 , 3 P < 0. 05, 3 3 P < 0. 01;与模型组比较 , ##P < 0. 01;与自然 恢复组比较 , ▲P < 0. 05 由表 2可见模型建成后 ,模型组动物胃残留率升高 ,胃排空 能力降低 ,自然恢复过程中继续降低 ,治疗后组略好于自然恢复 组 ;模型组小肠推进功能下降 ,经平胃散治疗后明显改善。 3. 3　血清胃泌素及胃动素含量的测定 结果见表 3。 表 3　胃泌素及胃动素含量变化 ( €x ±s) 组别 动物数 胃泌素 C /ng·m l - 1 胃动素 C /pg·m l - 1 空白对照 10 1. 05 ±0. 14 61. 366 ±13. 162 模型 10 0. 80 ±0. 243 99. 594 ±40. 9613 3 治疗 10 0. 95 ±0. 09 96. 086 ±12. 761 自然恢复 9 0. 92 ±0. 19 114. 164 ±28. 518 　　与空白对照组比较 , 3 P < 0. 05, 3 3 P < 0. 01 由表 3可见动物模型建成后血清胃泌素含量降低 ,经平胃散 治疗后有一定程度恢复。造模后动物胃动素含量升高 ,自然恢复 过程中继续升高 ,治疗组略好于自然恢复组。 3. 4　胃肠组织病理观察 造模过程中有 1只大鼠死亡 ,解剖后发 现 ,胃肠胀气明显 ,胃肠壁明显变薄 ,胃壁血管暴露 ,胃黏膜上有 少量散在出血点。将模型组大鼠解剖时发现 ,多数动物胃肠胀气 明显 ,胃内残留营养糊较多 ,营养糊在小肠内推进距离较短。HE 染色后 ,普通光学显微镜下观察发现 ,模型组动物胃肠组织粘膜 缺损 ,黏膜层有少量充血水肿 ,散在分布少量炎症细胞 ,粘膜下层 有大量炎症细胞。治疗组动物病变基本恢复 ,自然恢复组无明显 改变。 4　讨论 本实验根据目前湿阻模型研究现状并结合中医“湿阻中焦 证 ”的发病机制 ,采用“外湿过盛、饮食不节、情志不遂 ”三大因素 相结合的综合法进行造模 [ 2, 3 ]。在“外湿过盛 ”方面 ,我们将造模 箱内湿度控制在 90%左右 ,并且使模型大鼠每天在浅水中刺激 8 h。在“饮食不节 ”方面 ,我们在动物饱食的情况下灌胃大剂量猪 油 ,在动物饥饿的情况下灌胃大剂量冰水 ,将“肥甘厚味、过食生 冷、饥饱失常 ”结合起来。另外我们在以前研究中发现大鼠站在 浅水中不能进行有效的睡眠 ,结合本实验对外湿环境的要求 ,在 正常睡眠期间我们将模型大鼠置于浅水中 ,控制其睡眠时间打乱 其生物钟 ,从而造成其“情志不遂 ”。我们将造模时间定为 20 d, 比以前学者采取综合法的造模时间延长了 15 d左右 [ 4 ]。 胃肠运动在食物消化吸收中起着重要作用 ,既能运送食物、 研磨食物 ,使食物与消化液充分混合 ,转变成易溶解和可被吸收 的形式 ,又能使食物与消化管壁紧密接触 ,以便吸收。胃肠运动 过快过慢均不利于食物的消化吸收。胃肠运动过快 ,食物在肠道 停留时间过短 ,不利于消化吸收 ;胃肠运动过慢 ,缺乏动力 ,不仅 不利于食物的运送、研磨 ,而且不利于食物与消化液的混合、肠壁 的接触 ,从而影响消化吸收。实验结果表明模型动物胃排空和小 肠推进功能下降。胃肠运动吸收功能的异常可能是导致模型动 物出现摄食减少、体重下降、腹围指数增加等症状的直接原因。 本实验研究表明湿困脾胃模型动物胃动素含量增加 ,明显高 于空白对照组 ;模型动物胃泌素水平下降 ,与空白对照组动物比 较有显著意义 ,以前的大多数学者也曾有过近似的报道。胃动素 和胃泌素是调节胃肠运动的重要激素 [ 5 ] ,所以这两种激素水平 的改变以及胃肠实质的病理变化可能是湿困脾胃动物胃肠运动 吸收功能异常的重要原因之一。 本实验研究结果显示 ,模型组动物出现摄食减少、体重下降、 腹围指数增加等症状基本接近湿困脾胃证中湿邪困阻中焦的症 状表现。模型动物胃肠运动吸收功能、激素水平的改变以及胃肠 组织的病理变化 ,在一定程度上揭示了本模型以中焦脾胃为病变 中心的实质。经平胃散治疗后 [ 6 ] ,效果明显好于自然恢复组动 物 ,大多数指标明显改善接近正常。经平胃散治疗后 ,胃动素和 胃泌素两项指标虽然效果好于自然恢复组 ,但改善并不十分明 显 ,说明动物体内激素水平可能需要延长治疗时间才能很好地恢 复 ,在一定程度上体现了湿性黏腻湿邪难以速去的特点。 参考文献 : [ 1 ]　王　枫 ,罗文纪 ,连建伟. 小半夏汤对小鼠胃排空、小肠推进的影响 [ J ]. 浙江中医学院学报 , 2001 , 25 (2) : 48. [ 2 ]　刘　伟 ,黄秀深 ,罗玉熙 ,等. 湿阻证动物模型的研究进展 [ J ]. 四川 中医 , 2006, 24 (4) : 35. [ 3 ]　孔祥华 ,黄 　萍 ,吴清和. 湿阻中焦证研究进展 [ J ]. 甘肃中医 , 2004, 17 (9) : 5. [ 4 ]　郝　悦 ,夏光明 ,周润锁. 睡眠剥夺对大鼠胃动力及胃粘膜损伤的 影响 [ J ]. 解放军医学杂志 , 2004, 15 (2) : 96. [ 5 ]　杨名友 ,陈幼祥 ,谢　勇 ,等. 胃肠动力学与胃肠激素关系的研究进 展 [ J ]. 实用临床医学 , 2005, 6 (4) : 140. [ 6 ]　朱光有. 平胃散应用体会 [ J ]. 河南中医 , 2006, 26 (2) : 75. ·858· 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2009VOL. 20 NO. 4