维生素A和锌摄入对大鼠卵巢脂质过氧化影响

维生素A和锌摄入对大鼠卵巢脂质过氧化影响 　　1  与 　　1?1  材料  　　1?1?1  实验动物  动情周期正常的初成年健康SD雌性大鼠(SPF级)72只，8周龄，体重(180±15)g，(甘肃学院实验动物中心，动物证号：SCXK(甘)2004-007)。 　　1?1?2  试剂  VA醋酸酯(粉剂)，纯度为32?5万U／g(北京嘉康源化工有限公司)；硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，纯(莱阳化工实验厂)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 　　1?1?3  仪器  722型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；SHA-B型水浴恒温振荡器(常州国华电器有限公司)；TGL-6G-A型高速冷冻离心机(上海安亭化学仪器厂)；120型台式天平(德国赛多利斯天平有限公司)。 　　1?2  方法  　　1?2?1  剂量选择与分组  阴道涂片法连续涂片10d，筛检动情周期连续2次为4～5d的初成年健康SD雌性大鼠72只，分笼单只喂养，喂饲营养均衡饲料，饮双蒸水，随机分为6组，每组12只，每日定时等容积(0?5ml)灌胃给予大鼠受试物，具体剂量〔2〕为，正常对照组(CG)：双蒸水0?5ml／d；Zn实验组(ZnG)：累计剂量相当于大鼠20倍推荐摄入量(RNI)；VA实验组(VAG)：累计剂量相当于大鼠30倍RNI；VA和Zn联合实验I组［(VA+Zn)IG］：VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠10倍、20倍RNI；VA和Zn联合实验Ⅱ组［(VA+Zn)ⅡG］：VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠30倍、20倍RNI；VA和Zn联合实验Ⅲ组，［(VA+Zn)ⅢG］：VA和Zn累计剂量分别相当于大鼠50倍、20倍RNI，1次／d，连续30d，期间正常喂饲双蒸水，每隔3d称重1次。 　　1?2?2  卵巢组织匀浆制备  于染毒第31d处死大鼠，分离血清，卵巢称重后剪碎，用玻璃匀浆器加入0?01mmol／L Tris-HCl缓冲液［0?01mol／L蔗糖、0?1mmol／L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)］制成10％(m／v)组织匀浆，5000r／min离心10min，取上清液待测。 　　1?2?3  指标测定  血清和卵巢组织中SOD、GSH-Px活性、T-AOC、MDA含量的测定依据试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明进行，卵巢组织蛋白以总蛋白浓度来校正。 　　1?3  分析  采用SPSS11?5软件进行单因素方差分析，并进行对照组与实验组的两两比较。 　　2  结果 　　2?1  VA和Zn摄入对SOD、GSH-Px活性的影响  在卵巢组织中，各实验组SOD、GSH-Px活性与CG比较明显降低各实验组与CG比较，差异均有统计学意义，(P<0?01)；(VA+Zn)ⅡG与ZnG比较GSH-Px活性降低(P<0?05)；(VA+Zn)ⅡG与VAG比较GSH-Px活性降低(P<0?05)；(VA+Zn)ⅡG与(VA+Zn)ⅢG比较GSH-Px活性降低(P<0?05)。在血清中，各实验组SOD活性与CG比较，除ZnG降低外，其余各实验组均升高，但差异无统计学意义；(VA+Zn)IG与ZnG比较SOD活性升高(P<0?05)，各实验组GSH-Px活性与CG比较，除ZnG、(VA+Zn)IG降低外，其余各实验组均升高，但差异无统计学意义；(VA+Zn)ⅢG与ZnG比较GSH-Px活性升高(P<0?05)，见1。 　　表1  VA和Zn摄入对雌性大鼠卵巢及血清SOD活性、GSH-Px活性的影响（略） 　　注：与CG比较，a P<0?01；与ZnG比较，b P<0?05；与VAG比较，c P<0?05；与(VA+Zn)ⅡG比较，d P<0?05 　　2?2  VA和Zn摄入对T-AOC活力、MDA含量的影响  在卵巢组织中，各实验组T-AOC活力与CG比较明显降低(各实验组与CG比较，差异均有统计学意义，P<0?01，其中(VA+Zn)IG和ZnG与CG比较，P<0?05；各实验组MDA含量与CG比较，除ZnG与VAG升高外，其余各联合实验组均降低，但差异无统计学意义；(VA+Zn)IG与ZnG比较，MDA含量降低(P<0?05)；(VA+Zn)ⅢG与ZnG比较，MDA含量降低(P<0?05)。在血清中，各实验组T-AOC活力与CG比较降低，(VA+Zn)ⅡG和(VA+Zn)ⅢG与CG比较，差异有统计学意义，P<0?05，各实验组MDA含量与CG比较均降低；(VA+Zn)ⅢG与CG比较，差异有统计学意义(P<0?05)；(VA+Zn)ⅢG与(VA+Zn)IG比较，MDA含量降低P<0?05，见表2。 　　表2  VA和Zn摄入对雌性大鼠卵巢及血清T-AOC活力、MDA含量的影响（略） 　　注：与CG比较，a P<0?05，b P<0?01；与ZnG比较，c P<0?05；与(VA+Zn)IG比较，d P<0?05 　　3  讨论 　　摄入大剂量VA可引起急性、慢性及致畸毒性〔3,4〕，过量摄入Zn可以损害免疫器官和免疫功能〔5，6〕，VA和Zn具有某些相似的生理功能，可能具有协同效应〔7,8〕。本研究观察到过量摄入VA、Zn能引起大鼠卵巢的氧化应激。SOD与GSH-Px作为酶系和非酶系自由基清除剂，对维持机体抗氧化能力稳定起关键作用，各实验组卵巢组织中SOD活性、GSH-Px含量有不同程度降低，说明过量摄入VA、Zn可抑制SOD活性，使GSH-Px含量减少，破坏机体氧化平衡状态，从而使细胞抗氧化应激能力下降，而氧化应激会进一步引起脂质过氧化、巯基耗竭等氧化性损伤。T-AOC是机体防御体系之一，其能力强弱与健康程度存在着密切联系，该体系有酶促和非酶促2个体系，这种机能的降低常常导致各种疾病的产生，而过量摄入VA、Zn所致的各实验组卵巢组织中T-AOC的降低，更进一步证实过量VA、Zn所致脂质过氧化损伤作用加剧。在本实验研究剂量下，过量摄入VA、Zn对大鼠卵巢功能已产生一定的影响，引起卵巢组织的氧化损伤，表现在抗氧化系统活性降低，MDA增加，由此调节卵巢抗氧化系统的活性，这可能是过量摄入VA和Zn对生殖系统损伤的毒理机制之一。 【参考文献】   　　〔1〕 周源苑，王玉，马剑华.维生素A和锌过量摄入对大鼠脾脏的损伤作用［J］.中国卫生，2006，22（9）：1055-1056. 　　〔2〕 马剑华，王玉，张格祥，等.过量摄入维生素A和锌对肝脏细胞周期的影响［J］.中国公共卫生,2005,21(8):967-969. 　　〔3〕 周建烈.维生素A的缺乏、补充与中毒［J］.中国临床营养杂志,2000,8(4):262-264. 　　〔4〕 王英姿.浓缩鱼肝油致急性维生素A中毒11例报告［J］.中国农村卫生事业,2003,23(5):63. 　　〔5〕 贾存英.缺锌与补锌［J］.微量元素与健康研究,2001,18(1):77. 　　〔6〕 Fengyuan Piao,Kazuhit Yokoyama,Ning Ma,et al.Subacute toxic effects of zinc on various tissues and organs of rats［J］.Toxicology Letters,2003,145:28-35. 　　〔7〕 梁鸿雁,高宏伟,曲永利,等.锌与维生素A互作效应的研究［J］.四川畜牧兽医,2003,30(5):38-39. 　　〔8〕 李云,罗杰,王瑞淑.维生素A的致畸性以及锌对其致畸作用的影响［J］.华科大学,2002,33(4):613-616.