五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究

五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究 　    【摘要】  目的研究五指毛桃水提液体外抗菌作用，为其在临床的应用提供依据。方法制备五指毛桃水提液，采用圆滤纸片法测定其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、黄曲霉的抗菌效果;采用圆滤纸片-二倍连续稀释法测定其最低抑菌浓度。结果在一定的浓度下，五指毛桃水提液对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌均具有抑制作用，最低抑菌浓度均为1g /ml，而对黑曲霉、黄曲霉没有抑制作用。结论五指毛桃水提液对细菌具有较强的抑制作用，具有良好的开发前景。 　    【关键词】  五指毛桃; 体外抗菌; 最低抑菌浓度 　     五指毛桃Radix fici Hirtae为桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vah1.的干燥根，又名“南芪”“五爪龙”“五指牛奶”“土北芪”[1]。五指毛桃味辛、甘，性平，具有健脾利湿、益肺止咳、舒筋通络的功效，在临床上主要用于治疗脾虚浮肿、食少无力、肝炎、风湿痹痛、肺痨咳嗽等症[2]。原植物分布在我国南部及西南部地区，因疗效独特而在华南地区较为广泛地应用。五指毛桃具有抗炎镇痛作用，在临床上用来治疗慢性盆腔炎、慢性支气管炎、肝炎、膀胱炎、肺结核等病[3，4]。但其药理研究报道较少，本文初次对其水提液的抗菌作用进行了研究，为其在临床的应用提供实验依据。          1 材料 　　1.1 实验菌种金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus，枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis，大肠杆菌Escherichia coli，黑曲霉Aspergillus niger，黄曲霉Aspergillus flavus均由本系微生物与制药实验室提供。 　　1.2 试剂和仪器五指毛桃购于玉林市中药材市场。牛肉膏蛋白胨培养基，查氏培养基。细菌培养箱、低温离心机等。 　　2 方法 　　2.1 五指毛桃水提液的制备称取五指毛桃200g，加蒸馏水10倍，浸泡1h，加热煮沸后文火煎煮2h，趁热滤取药液。药渣再加5倍水，煎煮1h后取滤液。2次滤液合并后，加热浓缩，药液浓缩至4g/ml。115℃灭菌30 min，置4℃冰箱保存备用[5]。 　　2.2 细菌悬液的制备将菌种分别接种到相应斜面培养基上，置于恒温箱中活化，细菌和霉菌的活化条件分别为28℃下培养48h、37℃下培养24h。经活化后的菌种用生理盐水稀释到106CFU/ml。 　　2.3 体外抗菌实验 　　2.3.1 抑菌圈的测定采用圆滤纸片法。取已灭菌的6 mm圆滤纸片，浸入五指毛桃水提液中浸泡2h后取出，放到无菌操作台中晾干。将5种菌悬液各取0.1 ml分别涂布于相应的培养基中，制成含菌平板。用灭菌镊子夹取圆滤纸片置于含菌平板面，每个平板放3片，各滤纸片的距离大致相等，纸片距平板边沿大于1 cm，用灭菌蒸馏水设阴性对照，每个菌种做3个平行。将平板置于恒温箱中培养(细菌37℃下培养24 h，霉菌28℃下培养48 h)。用游标卡尺测其抑菌直径，取3个平行的平均值[6]。 　　2.3.2 最低抑菌浓度的测定采用圆滤纸片-二倍连续稀释法。取五指毛桃水提液原液5ml，二倍递减浓度稀释,即将药液依次按1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32的比例进行稀释,最终药液的质量浓度依次为2，1，0.5，0.25，0.125 g/ml。取已灭菌的圆滤纸片分别浸入上述提取液中浸泡2h，置于无菌操作台晾干。其余操作同“2.3.1”项。以有抑菌圈的最低浓度为五指毛桃的最低抑菌浓度[7]。 　　3 结果 　　3.1 抑菌圈测定结果五指毛桃对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和黄曲霉这5株菌种的抑菌圈直径测定结果见表1表1 五指毛桃水提液对5株菌种的抑菌圈直径mm由表1可知，五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有明显的抑制作用，而对黑曲霉、黄曲霉无抑制作用。 　　3.2 最低抑菌浓度的测定结果不同浓度五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度测定结果见表2表2 五指毛桃水提液对3株菌种最低抑菌浓度的测定结果五指毛桃水提液浓度C/g·ml-　由表2可知，不同浓度五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果相似，最低抑菌浓度均为g /ml。 　　4 讨论