高效液相色谱法测定盐酸溴己新片的含量

高效液相色谱法测定盐酸溴己新片的含量　　【摘要】目的建立高效液相色谱法测定盐酸溴己新片的含量。方法色谱柱：AlltimaC18柱(4.6mm×150mm，5μm);流动相:乙腈?0.05mol·L-1磷酸盐缓冲液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(体积比30∶70)，流速1.0mL·min-1，检测波长为249nm。结果盐酸溴己新在66.0～96.4μg·mL-1浓度范围内线性良好(r=0.9999，n=5),平均回收率为98.85%(RSD=0.60%,n=6)。结论本法快速、简便、准确，重复性好。　　【关键词】高效液相色谱法;盐酸溴己新;含量测定　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentdeterminationofbromhexinehydrochlorideintablets.MethodsBromhexinehydrochlorideinthetabletswasanalyzedonanAlltimaC18(4.6mm×150mm，5μm)columnwithmobilephasecomposedofacetonitrile?0.05mol·L-1phosphatebuffer(30∶70,finalpH3.0adjustedwith0.2%triethylamine).Theflowratewas1.0mL·min-1withUVdetectionwavelengthat249nm.ResultsCalibrationgraphwaslinear(r=0.9999,n=6)inconcentrationrange66.0?96.4μg·mL-1.Theaveragerecoveryofbromhexinehydrochloridewas98.85%andRSD0.60%(n=6).ConclusionsThemethodissimple,rapidandreproducible.　　Keywords:HPLC;bromhexinehydrochloride　　盐酸溴己新是一种临床上常用的祛痰药，疗效确切。目前盐酸溴己新的含量测定方法有紫外分光光度法[1]、HPLC法[2]和毛细管电泳法[3]，中华人民共和国药典2005年版收载的盐酸溴己新片的含量测定方法为紫外分光光度法，但该法测含量专属性不够强，易受辅料干扰[4]。为系统评价其药品质量，确保临床疗效，本文建立了高效液相色谱法测定盐酸溴己新含量的条件，并与紫外-可见分光光度法的测定结果做比较，结果明高效液相色谱法更为简便、准确、专属性强。　　1、仪器与试药　　1.1仪器　　岛津LC?10AT型高效液相色谱仪，岛津SPD?10A紫外检测器;UV?2450型紫外?可见分光光度计　　1.2试药　　盐酸溴己新对照品(100427?200402，供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所;盐酸溴己新片(广州南沙琪宝制药有限公司，批号20060805，20060807，20060810);乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。　　2、方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱：AlltimaC18柱(4.6mm×150mm，5μm);流动相：乙腈?0.05mol·L-1磷酸盐缓冲液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(体积比30∶70);检测波长249nm，流速1.0mL·min-1，进样量20μL。色谱图见图1。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备　　精密称取10.6mg盐酸溴己新对照品，置25mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL至10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，用0.45μm的微孔薄膜滤过，即得质量浓度为84.80μg/mL的对照品溶液。　　2.2.2供试品溶液的制备　　精密取样品0.15g，置于50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL至10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，0.45μm的微孔薄膜滤过，即得。　　2.2.3空白溶液的制备　　将不含被分析成分的盐酸溴己新辅料混合均匀后，精密称取93.9mg到50mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。　　图1HPLC图谱　略　　2.3线性关系考察　　分别精密吸取对照品溶液4、8、10、16、20μL,进样测定峰面积。以色谱峰峰面积(A)为纵坐标,对照品进样量(m)为横坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程：A=27251m-120995(r=0.9999，n=5)，结果表明,盐酸溴己新的进样量在66.0～96.4μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,线性范围是33.92～169.6μg·mL-1。　　2.4精密度试验　　取同一对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，每次20μL，测定峰面积，结果峰面积的RSD为0.59%，表明精密度良好。　　2.5稳定性试验　　取同一供试品溶液，分别于制备后0、2、4、8、12、16、24h进样，按上述色谱条件测定，峰面积的RSD为0.71%。盐酸溴己新样品溶液在24h内基本稳定。　　2.6重复性试验　　分别取同一批供试品,按“2.2.2”项下方法重复制备样品6份,并按以上色谱条件进行测定，计算得盐酸溴己新含量分别为99.92%、100.93%、100.12%、99.58%、99.50%、101.20%，RSD为0.70%，结果表明供试品制备方法重复性良好。　　2.7回收率试验　　取已知含量的样品约0.05g，共6份，精密称定，分别精密加入盐酸溴己新对照品18.00、18.40、20.10、20.90、21.90、22.90mg，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。　　表1盐酸溴己新回收率试验结果(略)　　2.8样品测定　　分别精密称取3批样品,按“2.2.2”项下方法制备,按上述色谱条件进行测定，结果见表2。　　表2盐酸溴己新片的含量测定结果(略)　　3、讨论　　3.1本实验通过对盐酸溴己新对照品溶液进行紫外扫描(190～400nm)，得到紫外吸收图，结果发现盐酸溴己新在249nm处有最大吸收峰，故选择249nm为检测波长。　　3.2实验中曾考察过甲醇?冰醋酸水溶液、乙腈?冰醋酸水溶液、甲醇?磷酸盐缓冲液、乙腈?磷酸盐缓冲液等不同的流动相系统，结果发现乙腈?磷酸盐缓冲液(0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液加0.2%三乙胺溶液，用磷酸调节pH为3.0)(体积比30∶70)为流动相时，盐酸溴己新的峰形好，赋形剂也不干扰其测定。本法测定盐酸溴己新的含量，回收率高，呈良好线性，重复性良好，符合定量分析要求。　　3.3同时对相同3批样品按中国药典[1]中的紫外分光光度法进行测定,结果平均标示量分别为101.3%、101.8%、98.6%,RSD分别为1.36%、1.82%、1.90%(n=6);与HPLC法的测定结果比较,2种方法之间差异没有显著性。　　【】　　[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京:化学工业出版社，2005:585-586.　　[2]殷国真,韩加怡.高效液相色谱法测定定喘止咳胶囊中三组分的含量[J].现代应用药学,1995,12(2):56-57.　　[3]邹定,吴学军,南国柱.毛细管区带电泳测定复方氯丙那林片中3种药物含量[J].中国药学杂志,1998,33(6):360-362.　　[4]叶隽,陈斌.HPLC法测定盐酸溴己新片的含量及溶出度[J].药学服务与研究，2006，6(2)：148-149.