胰蛋白酶消化液配置及保存

胰蛋白酶消化液配置及保存 蛋白酶消化液配置 1．D-Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，4℃保存备用。 2．称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中)，加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右，调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解。 3．用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的最适pH值)，并加入0.02%EDTA以协助消化作用。 4．滤过除菌，-20℃冻存。 蛋白酶消化液配置过程中的注意事项： 1．BSS的pH值应确定为7.2左右。 2．如配制的Hanks液高压灭菌后液体变混，则可将100 mL的CaCl2与含有其他成分的液体分别装瓶高压灭菌之后，再在无菌条件下配制，定容。这样可以避免高压灭菌后液体变混。 3．胰酶受热易失活，所以尽量避免盛夏配制，并且在配制过程中温度应始终保持在4℃左右。 4．胰酶研磨要充分，否则在过滤时会将较大的颗粒过滤掉，不能达到真正的浓度。 5．胰酶分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时体积会膨胀，而多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。