参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定

参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定 参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含 量测定 2011年第9期111 参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定 王玉龙 摘要:目的:建立参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定的方法.方法:采 用HPLc法测定本品中人参-~Rgl,人参皂 Zi~Rbl,三七皂苷R1的含量.结果:人参皂苷Rgl,人参皂苷Rhl,三七皂苷R1线性范 围分别依次为O.0396,0.1584tzg,0.04076— 0.16304txg,0.0412-0.16481xg;平均回收率分别为 100.20%,100.13%,99.68%.RSD~J'I为O.38%,0.39%,0.36%.结论:本方法简便可 靠,结果稳定,可用于参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定. 关键词:参芪--V丸;人参皂苷Rgl;人参皂苷Rbl;三七皂苷R1;含量测定 中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1006—0979(2O11)09一O111-02 AnalysisoftheactivecompoundsofPanaxnotoginsengandPanaxginsenginKangerxincapsules WANGYU-Long HospitaloftraditionalchinesemedicineinYancityjiansuprovice224001 Abstract:ObjectiveToanalyzetheactivecompoundsofPanaxnotoginsengandPanaxginsenginKangerxincapsules.MethodsHPLC wasusedtoanalyzethecontentsofginsenosideRglandRbl,notoginsenosideR1inKangerxincapsules.ResultsThelinearrangesof ginsenosideRgl,ginsenosideRbl,notoginsenosideR1were0.0396-0.15841xg,0.04076-0.16304p.gandO.0412-0.16481xgwithaverage recoveriesof100.20%(RSD=0.38%),100.13%(RSD=0.39%)and99.68%(RSD=0.36%),respectively.ConclusionThemethodiS simple,reliableandstable,whichcouldbeusedforthequalitycontrolofKangerxincapsules. Keywords:Kangerxincapsule,ginsenosideRgl,ginsenosideRbl,notoginsenosideR1,cont entdetermination 参芪二甲丸是由红参,三七,黄芪,紫河车等中药组成的中 药制剂,在临床上治疗各种肝硬化及慢性肝炎有肝硬化发展倾 向者疗效较好.用于益气养血,活血软坚等症.参芪二甲丸为我 院医院制剂,尚无含量测定方法,为了有效控制本品的质量,本 人对其进行了定量研究,该制剂三七和人参为方中主药,它们 中的主要有效成分是人参皂苷Rgl,人参皂苷Rbl,三七皂苷 Rl,已有文献报道采用HPLC法测定以上成分的含量来控制制 剂的质量【1-6].本文采用HPLC法,对参芪二甲丸中三七和人参的 有效成分进行含量测定,可用于控制参芪二甲丸的质量,同时也 可作为参芪二甲丸的质控标准. 1薄层鉴别 1.1试剂与试药:人参对照药材(中国药品生物制品检定所,批 号:120917—200508,供含量测定用),人参皂苷Rgl(中国药品生 物制品检定所,批号:110703—200424,供含量测定用),人参皂苷 Rbl(中国药品生物制品检定所,批号:110703—200424,供含量测 定用),三七皂苷Rl(中国药品生物制品检定所,批号:110745— 200415,供含量测定用);甲醇等试剂均为纯.参芪二甲丸 (批号为060806,060807,060808).硅胶G板(上海东方药品科技 实业有限公司1. 1.2薄层鉴别:取参芪二甲丸5g的内容物,研细,加三氯甲烷 40mL,加热回流lh,弃去三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,加水 0.5mL拌匀湿润后,加水饱和的正丁醇10mL,超声处理30min, 吸取上清液加3倍量氨试液,摇匀,放置分层,取上层液蒸干,残 渣加甲醇lmL使溶解,作为供试品溶液.另取人参对照药材1g, 同法制成对照药材溶液.另取人参皂苷Rgl对照品,人参皂苷 Rb1对照品及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1mL各含2mg 的混合溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法试验,吸取上述三 种溶液各5lxl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷一乙 酸乙酯一甲醇一水(15:40:22:lO)1OoC以下放置的下层溶液为展开 +江苏省盐城市中医院(224001) 2011年3月25日收稿 剂[71,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105oc~n热至斑 点显色清晰,分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视.供试品色谱 中,在与对照药材色谱相应的位置上,分别显相同颜色的斑点. 图1薄层色谱图 A供试品溶液 B人参药材 c对照品溶液 2有效成分的含量测定 2.1仪器与试药 2.1.1器材:Waters2695型高效液相色谱仪庆国Waters公司);PDA检测 器(Waters2996);DiamonsilC18柱(5Ixm,250minx46mm,迪马公司); 2.1.2试药:人参皂苷Rgl(中国药品生物制品检定所,批号: l10703—200424,供含量测定用),人参皂苷Rbl(中国药品生物 制品检定所,批号:110703—200424,供含量测定用),三七皂苷 R1(中国药品生物制品检定所,批号:110745—200415,供含量测 定用);甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);二次蒸馏水.参芪二甲丸 (批号为060806,060807,060808). 2.2含量测定 2.2.1色谱条件:色谱柱:DiamonsilC18柱(5m,250mmx4.6 mm);以乙腈为流动相A,水为流动相B,按下进行二元梯度 洗脱;流速:1.0mL?min一;柱温:35~C;检测波长:203nm. 表1流动相的变化 112内蒙古中医药 2.2.2对照品溶液制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥12h 的人参皂苷Rgl,人参皂苷Rbl及三七皂苷R1对照品适量,加 甲醇制成:人参皂苷Rgl质量浓度为0.396mg'mL..,人参皂苷 Rbl质量浓度为O.407mg?mL一,三七皂苷Rl质量浓度为0.103 mg?mL的混合溶液,作为对照品溶液: 国2参苠二甲丸高效麓相色诺图 图3对照晶高效液耜色谱圄? A三七皂苷R113人参皂苷Rglc人参皂苷Rbl 2.3供试品溶液制备:取样品适量,研细,混匀,精密称定5g,置 具塞锥形瓶中,精密加入甲醇5Oral,称定重量,放置过夜,置 8Ooc水浴上加热回流2小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减 失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得. 2.4线性关系的考察:分别精密称取人参皂苷Rgl,人参皂苷 Rbl和三七皂苷R1各10rag放人50mL量瓶中,用甲醇定容,再 吸取2mL,3mL,5mL,7mL,8mL定容到10mL量瓶中,按上 述的HPLC条件分析,以峰面积(A)对进样量(m)进行线性回 归,得回归方程分别为:人参皂苷Rgl线性方程为A= 6027040.6612m+2593.5532,r=0.99993753,线性范围为0.0396, 0.1584g;人参皂苷Rbl线性方程为A=5048410.2970m+ 682.5648,r=0.99997099,线性范围为0.04076,0.16304~g;三七皂 苷Rl线性方程为A=1492572.4784m+16.1181,r=0.9999,线性范 围为0.0412—0.1648Is.g. 2.5精密度试验:分别精密吸取人参皂苷Rgl,人参皂苷Rbl和 三七皂苷R1对照品溶液,于测定条件下进样lOIxL,分别重复进 样5次.以3种组分峰面积分别计算,结果人参皂苷Rgl,人参 皂苷Rbl和三七皂苷R1的RSD分别为0.8056%,0.5342%, 1.2251%,结果表明仪器精密度良好. 2.6重现性试验:精密称取参芪二甲丸内容物(批号060806)共5 份,按"2.3"项制备供试品溶液,取供试品溶液20,按"2.1"项 色谱条件测定,按外标法以峰面积计算样品含量.结果样品中测 得人参皂苷Rgl,人参皂苷Rbl和三七皂苷Rl平均含量分别为 2.96,3.Ol,0.5865mg/粒,人参皂苷Rgl,人参皂苷Rbl和三七皂 苷Rl的RSD分别为0.38%,0.39%,O.36%.测定结果表明.本方 法重现性符合要求. 2.7稳定性试验:精密称取参苠二甲丸内容物(批号060806),分 别按"2_3"项制备供试品溶液,分别在0,2,4,8,10,24h进样,结 果人参皂苷Rgl,人参皂苷Rbl和三七皂苷Rl的RSD分别为 0.23%,0.35%,0.22%.表明供试品溶液在24h内稳定. 2.8回收率试验:精密称取已知含量的参芪二甲丸样品9份(批 号060806),每批3份,分别精密加入人参皂苷Rgl,人参皂苷 Rbl和三七皂苷Rl对照品适量,按"2.3"项下方法制备供试品 溶液并在上述色谱条件下测定,计算同收率,得平均回收率分别 为9975%,99.82%,100.07%. 表2回收率实验结果 2.9样品测定:取3批参芪二甲丸内容物,分别按"2_3"项下方 法进行处理样品及测定,结果批号为060806,060807,060808的 样品测得的三七总皂苷含量分别为1.1825,1.1892,1.2093mg/g. 3讨论 3.1提取方法考察:用甲醇为提取溶剂,对回流法和超声法处理 30min比较,结果表明,回流法处理提取效率较高,故选用回流 法处理. 3.2流动相的选择ItOl:经过实验,选择了乙腈为流动相A,水为流 动相B,以表1操作,能将杂质与有效物质分离,且分离效果较 好,保留时间合适. 参考文献 fl】阮呜.高效液相色谱法测定人参总皂苷的含量[J3.时珍国医 国药.2007,5(11:173. 【2]俞坚,刘杭,王京霞.高效液相色谱法测定2--lz中三七皂苷R1 和人参皂苷Rgl的含量[J].中华中医药杂志,2008,34(2):76. 【31王强,江英桥,马世平等.高效液相色谱法测定三七中三七皂 苷R1的合量[J].中国中药杂志,2000,25(m1:617. 【4】权丽辉,赵淑平,薛岚等.HPLC测定鑫森脑泰粉针剂中.-~-Az 皂苷Rl的含量[J].中草药,2001,32(6):502. I5】李性天,周密妹,耿立坚等.高效液相色谱法梯度洗脱测定三七 中三七皂苷R】的舍量[J3.中国医院药学杂志,2000,20(12):728. f6】华彬,陆免林.复方心脑舒中颗粒中人参皂苷Rgl的舍量测 定[J]时珍国医国药2003,14(8):469. f7】国家药典委员会.中华人民共和国药典.2005年版(一部) fS].北京:化学工业出版社,2005,7. f81王梅,范亚刚,高文分.RP—HPLC梯度洗脱法同时测定三七总 皂苷及血塞通注射液中3种皂苷的含量『J】药物分析杂志, 2000,23(6):20. f9】国家药典委员会.中华人民共和国药典.2005年版(一部) 『s].北京:化学X-业出版社.2005.323.