绿色木霉和枯草芽孢杆菌对玉竹锐顶镰孢菌的拮抗作用研究（可编辑）

绿色木霉和枯草芽孢杆菌对玉竹锐顶镰孢菌的拮抗作用研究（可编辑） 绿色木霉和枯草芽孢杆菌对玉竹锐顶镰孢菌的拮抗作 用研究 黑龙江农业科学: ~ 植物保护? 绿色木霉和枯草芽孢杆菌对玉竹 锐顶镰孢菌的拮抗作用研究 杨洪一 。周阳阳。.东北农业大学 园艺学院,黑龙江 哈尔滨 ; .东北林业大学 生命学院,黑龙江 哈尔 滨 摘要:采用平板对峙培养法、对扣培养法和圆盘滤膜法研究绿色木霉和枯草芽孢杆茵对玉竹锐顶镰孢茵的拮 抗作用。结果表明:木霉和枯草芽孢杆菌对锐顶镰孢菌菌丝生长具有一定抑制作用,木霉的抑制效果较差, 枯草芽孢杆菌的抑制效果较好,其中枯草芽孢杆菌菌株 的抑制作用最强,其非挥发性代谢产物对病原 菌的抑制率可达 。 关键词:锐顶镰孢茵;玉竹;木霉;枯草芽孢杆菌 中图分类号: . 文献标识码: 文章编号: ? ?. 方法 药材玉竹为百合科 植物玉竹? . . 平板对峙培养法 将锐顶镰孢菌和木霉.的干燥根 在平板上活化,取直径约的锐顶镰孢 茎,可药食两用,昧甘,微寒,具有养阴润燥,生津 菌、木霉菌块分别接种到平板的两侧 距平 止渴等功能口 。我国玉竹资源丰富,分布较广。 板边缘 ,以仅接种锐顶镰孢菌平板为对照, 在玉竹的栽培生产中,病害大量发生,发生的主要 重复 次。 。 培养 ,测量菌落直径,计算木 病害有玉竹褐斑病、紫轮病、锈病和根腐病等,其 霉对病原菌的抑制率 抑制率/对照菌落直 中玉竹褐斑病是危害较重的一种病害,在辽宁清 径一与木霉对峙培养的菌落直径 /对照菌落直 原等玉竹主产区,成株发病率接近,严重影 径× 。对峙培养中的竞争系数分级参 响了玉竹的产量和质量。 见文献。 在前期研究中基于用柯赫法则对病原菌进行 将在 平板上 ?活化 的枯草芽孢杆 分离、纯化,并借助形态学及分子生物学手段相结 菌接种到平板上,距离中心 处, ?培 合的方法对病原菌进行了鉴定,确定其为锐顶镰 养 后,挑取在平板上 ?活化 的锐 孢菌 。为了进一步有效 顶镰孢菌菌块,接种到培养枯草芽孢杆菌的 防控病害,现进一步分析木霉和枯草芽孢杆菌 平板中心,将两者进行对峙培养,用只接种锐顶镰 种生防因子对锐顶镰孢菌的拮抗作用。 孢菌平板作为对照。待对照菌丝前端长到培养皿 材料与方法 边缘时,测量锐顶镰孢菌从平皿中心到接种拮抗 . 材料 菌方向的菌落直径,计算抑制率,每处理重复 锐顶镰孢菌分离自感染褐斑病的玉竹叶片, 次 。 保存于东北林业大学微生物实验室;绿色木霉由 抑制率/ : 对照病原菌菌落直径一与拮抗 中国科学院东北地理农业生态研究所 哈尔滨农 菌对峙培养的病原菌菌落直径 /对照病原菌菌落 田有害生物控制课组提供;枯草芽孢杆菌菌株 直径×.和 保存于东北林业大学微生物实 . . 木霉挥发性代谢产物 采用对扣培养法 验室。 测定木霉挥发性代谢产物对锐顶镰孢菌的抑制作 用 。在培养皿的皿盖和皿底分别加入培 养基,再在皿盖、皿底中分别接种直径的木 收稿日期: ? 一 基金项目:黑龙江省博士后基金资助项目 ? 霉、锐顶镰孢菌菌块, ?培养 ,采用十字交叉 第一作者简介:杨洪一 一 ,男,吉林省九台市人,博士, 副教授,从事植物病理学研究。 ? : . 。 法测量锐顶镰孢菌菌落直径,计算木霉挥发性代?植物保护? 黑 龙 江 农 业 科 学 期 谓十产物对锐顶镰孢菌的抑制率 抑制率一对照病 丝占据平板 / 以上,竞争系数为?级,木霉对锐 原菌的菌落直径一处理病原菌的菌落直径/对照 顶镰孢菌的抑制作用比枯草芽孢杆菌的强。而在 病原菌的菌落直径× ,对照仅接种锐顶镰 枯草芽孢杆菌中,枯草芽孢杆菌菌株 的抑 孢菌。 制效果较好,而菌株 .的效果很差。 . . 木霉非挥发性代谢产物 采用圆盘滤膜 表 拮抗菌对病原菌对峙培养结果 法测定木霉非挥发性代谢产物对锐顶镰孢菌的抑 制作用 。在培养皿的皿底加入培养基,接 种直径的木霉菌块,之后在培养基上铺 层 灭菌玻璃纸,培养,揭下玻璃纸,接种直径 . 木霉与枯草芽孢杆菌挥发性代谢产物对锐 为 的锐顶镰孢菌菌块, ?培养 后测量 顶镰孢菌的抑制作用 锐顶镰孢菌菌落直径,以未接种木霉平板为对照。 对扣培养 后,调查木霉和枯草芽孢杆菌 . . 枯草芽孢杆菌挥发性代谢产物 采用对 挥发性代谢产物对病原菌生长的影响,从调查结 扣培养法测定枯草芽孢杆菌挥发性代谢产物对锐 果可以看出 见表,木霉和 株枯草芽孢杆菌 顶镰孢菌的抑制作用 。在平板接种锐顶 对病原菌均存在一定的抑制作用,抑制率分别为 镰孢菌菌丝块,在另一个同样大小的 培养基. 、 。 和 . ;其原因可能 在于木霉 平板上接种枯草芽孢杆菌,再将前者反扣在后者 和枯草芽孢杆菌生长过程中分泌出的挥发性代谢 之上,两皿接触处用胶带密封,用未接种拈抗菌的 产物,如抗生素等,抑制了病原菌菌丝生长。其中 倒扣平板作为对照,每处理重复 次,于 ?培 木霉的抑制作用较差,而枯草芽孢杆菌菌株 养, 后采用十字交叉法测量病原菌菌落直径, .的抑制效果较好,枯草芽孢杆菌菌株 计算枯草芽孢杆菌挥发性代谢产物对病原菌生长 对病原菌菌丝生长的抑制作用最强。 的抑制率。计算方法同 . . 。 表 拮抗菌挥发性代谢产物对病原菌的抑制作用 . . 枯草芽孢杆菌非挥发性代谢产物 将经 活化了的枯草芽孢杆菌菌株接种到盛有 的 液体培养基的三角瓶中,于 , 。振荡培养 ,制成菌液,然后在 ?冷冻 离 心机中 离心,取上清液,将上 . 木霉与枯草芽孢杆菌非挥发性代谢产物对 清液于?高压灭菌 。制得无菌的拮抗 锐顶镰孢菌的抑制作用 菌菌株分泌物液。 恒温培养 后,测量病原菌的菌落直径,从 将 菌株的分泌物液各加人等体积的 测量结果中可以看出 见表 ,木霉和枯草芽孢 培养基,混匀后倒皿,在平皿中央接一直径为 杆菌产生的非挥发性代谢产物对锐顶镰孢菌的生 的病原菌菌块。每处理重 复 次,以不加分 长产生一定的抑制作用,抑制率分别为 . 、 泌物液为空白对照。置于?恒温培养箱中, . 和 . %。枯草芽孢杆菌菌株 的 后用十字交叉法测量菌落直径,计算抑菌率。 抑制效果最好,完全抑制了锐顶镰孢菌的生长。 计算方法同 . 。 表 拮抗菌非挥发性代谢产物对 结果与分析 病原菌的抑制作用 . 木霉与枯草芽孢杆菌对锐顶镰孢菌的拮抗 作用 从对峙培养结果可以看出 见表,绿色木 霉和枯草芽孢杆菌对病原菌具有一定抑制作用。 结论与讨论 对峙培养病原菌菌丝生长速率明显低于单独接种 病原菌菌丝的生长速率,说明木霉和枯草芽孢杆 我国药用植物资源丰富,分 布较广。由于药 菌在生长过程中分泌出病原菌抗生物质。木霉菌 材用量增加,生产上已经由传统野外采集转变为