综述放射免疫技术

综述放射免疫技术 前言:当前随着科学技术的迅猛发展放射免疫技术已经在我们的日常生活中开始发挥着举足轻重的作用，其主要是以免疫测定的形式来服务人们。免疫测定作为一种比较前沿的技术，在一定程度上为人们的健康提供了保证。 主:放射免疫测定 放射免疫技术是利用抗原抗体反应的特异性和同位素标记检测的高度灵敏性相结合，在体外测定的一种技术。 一、 分类:放射免疫 免疫放射 放射受体 二、 原理: 1、放射免疫:是标记抗原和未标记抗原对有限量抗体的竞争性结合(competitivebinding)或竞争性抑制(competitiveiNhibition)反应。 竞争性结合反应的经典标记抗(Ag*)和非标记抗原(Ag)与限量抗体(Ab)竞争性结合 Ag*和Ag具有等同的 与Ab结合能力 2、免疫放射:是以同位素标记的过量抗体与检品中待测抗原直接结合，然后用固相免疫吸附剂分离游离和结合标记抗体的免疫放射测定。 (1)、单位点:先用过量标记抗体与待测抗原进行反应，形成抗原抗体复合物;用固相抗原结合未结合标记抗体并将其分离, 测定上清液的放射量 (2)、双位点:先用固相抗体与抗原结合，再用过量的标记抗体与抗原的另一决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记抗体复合物，洗弃剩 余标记抗体，测固相上放射性。 3、放射受体:是以同位素标记的配基(如激素)与细胞膜表面或组织中的相应受体特异性结合，进行测定的放射受体。 三、实验前的准备: 1、用于标记的抗原 2、标准抗原或待测物标准品 3、特异性抗体 4、分离剂 5、标记用同位素 6、γ-计数仪 7、离心 8、标记方法的选择 (1)、氯胺-T法: 氯胺-T的化学名称为N-氯代甲苯磺酰胺钠盐,迄今仍然是实验室最常用的碘化方法之一。 氧化原理:氯胺-T水解成次氯酸释放出碘阴离子，该离子被氧化成碘分子，碘分子裂解成正碘离子和负碘离子，正碘离子与酪氨酸中的酚基发生置换，生成放射性碘标记的酪氨酸残基，进而测定其放射性。 (2)、乳过氧化物酶法 : 乳过氧化物酶 (LPO) 在本法中用作催化剂，它和过氧化氢作用，生成新生态氧，使负碘离子氧化成分子碘，最后形成正碘离子，置换蛋白质中酪氨酸残基中酚羟基邻位的氢。 (3):Iodogen法: Iodogen商品名为氯甘脲，化学名1,3,4,6-四氯3 ,6 -二苯-甘脲，它与氯胺-T同属氯酰胺类，也是氧化剂，氧化作用中等，不溶于水，可溶于二氯甲烷等有机溶剂中，将其溶液涂布于试管表面，干后形成固相氧化剂，碘化反应就在涂有固相氧化剂的试管内进行. (4):偶联标记法: 又称间接标记法，或Bolton-Hunter法。如果待标记的配基不含酪氨酸残基，上述三种方法将有困难，可以考虑采用偶联标记法。 以氯胺-T法制备碘标记的3,5-(4-羟基苯)-丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯 (HPNS)，然后与蛋白质中的游离氨基缩合，生成含放射性碘的蛋白质或多肽配基. 四:碘标记物的制备与纯化方法: 1、 凝胶过滤法 2、 离子交换层析法 3、 聚丙烯酰胺凝胶电泳 4、 高效液相色谱法 五:放射免疫技术的应用: 1.激素的测定:RIA可用于大多数激素的测定，对相关疾病的诊断和治疗提供重要的实验依据。如?蛋白质及肽类激素 胰岛素、胰泌素、胃泌素、生长激素、ACTH、TSH、HCG等;?非肽类激素 T3、T4、孕酮、雌二醇、雌三醇、醛固酮、地塞米松、前列腺素等。 2.药理学方面:在药理学和临床药学方面，RIA可用于药物的吸收、 分布和代谢研究，检测违禁药物、药物中毒等。常涉及药物有地高辛、吗啡、巴比妥类、核酸衍生物(cAMP、cGMP等)和一些常用的抗生素。 3.其他 用于检测乙肝系列抗原和抗体、Ig亚型分析等;检测肿瘤的胚胎性抗原如AFP、CEA等;以及测定SGOT、LDH及其同工酶、CPK、Y-GT、Q-HBD、载脂蛋白和心钠素等。 六:前景 RIA技术问世40年来，在加速医药科学现代化进程中，所作出的 贡献举世公认。非放射性标记免疫分析作为后起之秀已日臻完善， 有的在分析技术自动化方面已超过RIA。高度自动化的分析主要 面向临床常规大量样品的检测，但仪器价格昂贵，尚难普及。在 生物医学基础研究中，新的生物活性物质的发现日益增多，成为 基础医学科研中的热门课题。研究这些新的活性物质和某些疾病 发生及发展的关系，需要建立高灵敏度、高特异性的检测方法， 高自动化的非放射性标记免疫分析，在生命科学实验中是不能取 代RIA技术的。由此可以预测，在生物医学研究中，RIA技术将 对新的生物活性物质的检测，成为首选方法。 总结: 随着高科技的发展，一些前沿技术已经逐渐应用于我们的日常生 活，尤其是在当今一些疑难病症的应用上产生了很好的效果。希 望我们的科研人员再接再厉，为人类造福。