大唇香科科脂溶性成分研究

2�2 � 活性测试结果 � 稻瘟霉活性筛选结果表明, 具有糖链结构的化合物 nob iliside A�J对稻瘟霉具有 一定的诱导变形作用 (MMDC< 126�4 mg /L ) ,其中 化合物 A, B, C, F, I, J的 MMDC值均小于 7�9 mg / L, 具有显著的诱导稻瘟霉菌丝体变形和抑制生长 作用。而苷元 1 b和 2 b则基本无活性 (MMDC> 500mg /L )。体外细胞毒活性测试结果显示, nobili� sideA�J对 P388小鼠白血病和 A549人肺癌显示很 强的细胞毒活性, IC50值均小于 3 mg /L。苷元 1 b 和 2 b对两种受试癌细胞株没有明显细胞毒活性, 表现与稻瘟霉模型的活性检测结果一致。见表 1。 � 表 1� � � Effec ts of Com pouds ofH� nob ilis on P� oryzae and Tum or Cell L ines (m g/L ) Sam ple P�oryzae (MMDC) Tum o r ce ll lines( IC50 ) P388 A549 A < 7�9 1�83 � 0� 22 2�55 � 0� 42 B < 7�9 2�38 � 0� 32 1�54 � 0� 12 C < 7�9 2�42 � 0� 11 1�8 � 0�08 D < 15�8 2�51 � 0� 33 1�19 � 0� 02 E < 63�2 2�06 � 0� 31 1�57 � 0� 14 F < 7�9 2�30 � 0� 23 1�88 � 0� 09 G < 126�4 1�68 � 0� 04 2�24 � 0� 16 H < 15�8 2�29 � 0� 15 1�93 � 0� 24 I < 7�9 2�22 � 0� 11 2�16 � 0� 31 J < 7�9 2�93 � 0� 52 2�47 � 0� 09 1b > 500 > 20 > 20 2b > 500 > 20 > 20 5�FU � 8 10�hydroxy campto thec ine 2�16 � 0� 12 0�77 � 0� 03 � � : Pos itive control� 3 � 讨论 本课题以稻瘟霉活性筛选模型为手段进行活性 追踪, 采用多种层析分离技术, 从产于福建东山岛海 域的黑乳海参中分离纯化得到 10个新的海参皂苷 类化合物。活性研究的结果表明, 从黑乳海参体内 分离纯化到的皂苷类化合物对稻瘟霉模型显示不同 程度的诱导菌丝变形或抑制孢子生长作用, 均有较 强的体外细胞毒活性。研究结果同时表明, 利用稻 瘟霉生物模型对海参皂苷进行活性追踪分离是可行 的。 这是我国研究人员首次对黑乳海参体内的活性 皂苷类化合物进行系统的研究。通过研究发现了多 种具有生物活性的新化学成分, 为研制新的抗肿瘤 和抗真菌药物提供了先导化合物和科学依据, 对开 发利用我国丰富的海洋生物资源具有重要意义。对 今后进一步深入研究我国其它海洋生物的活性成分 和药理作用具有借鉴意义。 参 考 文 献 [ 1] 巫军, 易杨华,吴厚铭, 等 �黑乳海参中两个新的四环三 萜化合物 �中国天然药物, 2005, 3( 5): 276�278� [ 2] Chlud il HD, Munia in CC, Seldes AM, et a l� Cytotox ic and antifunga l trite rpene glycosides from the Pa tagon ian sea cucumberH em o iedem a spectab ilis� J Nat Prod, 2002, 65: 860�865� [ 3] 苏彦斌, 蒋亭, 李军, 等 �柄海鞘 Stye la c lava次生代谢 产物的化学研究 ( I) � 中国海洋药物, 2001, 20( 2) : 14� 16� [ 4] W u J, Y i YH, Tang HF, et a l� Nob ilis ides A�C, three new tr iterpene g lycosides from the seacucumberH olothuria nob ilis� P lantaM ed, 2006, 72: 932�935� [ 5] 林厚文, 汤海峰,张纯, 等 �利用稻瘟分生孢子筛选海兔 抗有丝分裂组份 �中国中药杂志, 2002, 27( 1): 53� [ 6] 季莉莉, 檀爱民,汤俊, 等 �几种吡咯里西啶类生物碱对 肝细胞毒性的探讨 � 中国天然药物, 2004, 2 ( 4): 239� 241� ( 2008- 02- 18收稿 ) 大唇香科科脂溶性成分研究 皮 � 科 1, 张前军2,牟明月 1,柏 � 松 1, 陈 � 青2,姚荣君 2 (贵州大学 1�精细化工研究中心; 2�理学院化学系,贵州贵阳 550025) � � 摘要 � 目的: 研究大唇香科科 T eucrium labiosum的脂溶性成分。:以乙醇提取,硅胶、Sephadex LH�20柱色 谱等方法进行分离, 根据理化常数和光谱数据鉴定结构。结果:分离鉴定了 6个化合物,分别为正十八烷酸 (! )、 ��菠菜甾醇 (∀ )、脱镁叶绿素甲酯 ( # )、木栓醇 (∃ )、羽扇豆醇 (% )和 5, 22�豆甾烯醇 ( & )。结论:以上化合物均 为首次从该种植物中分离得到。 关键词 � 唇形科; 大唇香科科; 脂溶性成分 中图分类号: R284�1 /R284�2� � 文献标识码: A� � 文章编号: 1001�4454( 2008) 07�1003�03 ∋1003∋Journa l o f Ch ineseM ed icina lM a teria ls� � 第 31卷第 7期 2008年 7月 Study on L iposoluble Constituents ofTeucrium labiosum P IKe1, ZHANG Q ian�jun2, MOU M ing�yue1, BA I Song1, CHEN Q ing2, YAO Rong�jun2 ( 1�Research and Deve lopm ent Center of F ine Chem ica ls; 2�Sc ience Co lleg e, Guizhou Un iv ers ity, Guiyang 550025, China) Abstrac t� Objective: T o S tudy liposo lub le constituents o fTeurium labiosum�M ethods: The constituents were isolated and pur ified by silica g el co lumn and Sephadex LH�20 ch rom a tog raphy� The ir structures w ere e luc idated by physicochem ica l properties and spectra l analysis�Resu lts: Six com pounds we re obta ined and identified as stear ic acid (! ), ��sp inastero l(∀ ), M ethy l phaeophorbide a (# ), fr iedelino (∃ ), lupeo l( % ) and stigmasta�5, 22�d ien�3��o l( & )� Conc lusion: A ll these com pounds are obta ined from th is plant fo r the first time� K ey words� Lab ia tae; Teucrium labiosum; L iposo luble constituents � � 唇形科 ( Labiatae)香科科属 ( Teucrium )植物分 布于世界各地, 全球约 100~ 300种, 主产地中海沿 岸地区。我国有 18种, 10变种, 遍布各地,但多数 种类集中于西南部,贵州省有 8种, 3变种 (1)。大唇 香科科 (T eucrium labio sum )又名山苏麻、野薄荷,多 产于云南中部,贵州中部及东北部,四川南部。香科 科属植物具有清热解毒、发表散寒、健脾利湿等功 效。民间主要用以治疗风寒感冒、消化不良、痢疾、 无名肿痛、跌打损伤等症 (2)。 为了深入研究大唇香科科的药用基础, 阐明其 有效成分,笔者对大唇香科科的乙酸乙酯部位的化 学成分进行研究,共分离鉴定 6个化合物:正十八烷 酸 ( ! )、��菠菜甾醇 (∀ )、脱镁叶绿素甲酯 ( # )、木 栓醇 ( ∃ )、羽扇豆醇 ( % )和 5, 22 �豆甾烯醇 ( & )。 以上化合物均为首次从该种植物中分离得到。 1 � 仪器与材料 X�4数字显示显微熔点测定仪 (温度计未校正, 北京泰克仪器有限公司 ); JOEL�ECX500型 500MH z 核磁共振仪 ( TM S为内标 ); HPM S5973质谱仪。柱 色谱用硅胶及高效薄层硅胶板均为青岛海洋化工厂 出品。 Sephadex LH �20为 GE公司生产。化学试剂 为分析纯。 新鲜大唇香科科采自贵州省贵阳市, 经贵阳医 学院陈德媛教授鉴定为唇形科 ( Lab iatae)香科科属 植物大唇香科科 (T eucrium labiosum )的全草,标本存 于贵州大学理学院化学系。 2 � 提取分离 干燥大唇香科科 30 kg粉碎, 用 95%乙醇冷浸 提取 3次 (每次 10 d), 减压回收乙醇,得浸膏, 加水 分散, 用乙酸乙酯萃取,减压回收溶剂得提取物 2�5 kg。经过反复硅胶柱层析, 石油醚�乙酸乙酯梯度洗 脱 ( 100∗1~ 1∗1) ,再经重结晶, Sephadex LH�20等手 段分离纯化得到化合物 ! ( 16�5 mg)、∀ ( 8�6 mg)、 # ( 550 mg)、∃ ( 35 mg)、% ( 40mg)、& ( 85mg)。 3 � 结构鉴定 化合物 !:白色粉末,分子式 C18H 36O 2。 EI�MS m / z: 284 ( M + ) , 241, 185, 129, 73, 43。1H�NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 2�35 ( 2H, ,t J= 7�6H z, CH 2 ), 1�64( 2H, m, CH 2 ) , 1�25( 28H, brs, 14 + CH 2 ) , 0�88 ( 3H, ,t J= 6�8, CH3 )。以上数据与文献 (3)报道一 致, 故确定为正十八烷酸 ( stearic acid)。 化合物 ∀: 白色粉末, 分子式 C29H48O。E I�MS m / z: 412 (M + ) , 3797, 363, 271, 81, 55, 41。1H�NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 5�4( 3H, m, C7, C22, C23 �H ), 3�5 ( 1H, m, C3�H ), 1�55( 1H, s, OH ), 1�02( 3H, d, J= 6�5H z) , 0�88 ( 3H, ,t J = 9H z), 0�81 ( 6H, d, J = 8H z) , 0�79( 3H, S) , 0�53( 3H, s, C19�CH3 )。以上数 据与文献 (4)中报道的 ��菠菜甾醇相符, 故确定为 �� 菠菜甾醇 ( ��sp inasterol)。 化合物 #: 蓝黑色晶体, 分子式 C36H38N4O 5。 E I�MSm /z: 606(M+ ), 548, 459, 111, 97, 57。1H�NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 3�37( s) , 7�91( dd, H�31 ) , 6�24 ( d, J= 26�4H z), 6�13( d, J= 11�6) , 9, 27( s, H�5 ), 3�14( s), 3�58 ( q ), 1�65 ( t) , 9�43( s, H�10 ), 3�60 ( s) , 4�21 ( d, J= 12�8) , 3�67 ( s), 3�67 ( s), 4�46 ( m ) , 1�80( d, J= 7�2) , 8�55 ( s, H�20) , 6�27 ( s), 3�90 ( s) , 1�67 ( 21, 23NH ); 13C�NMR ( 500 MH z, CDC l3 ) : 142�01 ( C�1) , 131�82 ( C�2 ), 136�45 ( C� 3) , 136�23 ( C�4 ), 97�47 ( C�5 ), 155�59 ( C�6 ), 136�11 ( C�7 ), 11�18 ( C�7,), 145�16 ( C�8 ), 19�34 ( C�81 ) , 17�32 ( C�82 ), 150�92 ( C�9 ), 104�38 ( C� 10), 137�88 ( C�11 ), 129�00 ( C�12 ) , 121�00 ( C� 12 1 ) , 129�00 ( C�13 ) , 189�59 ( C�131 ) , 64�68 ( C� 13 2 ), 169�58 ( C�133 ) , 52�87 ( C�134 ) , 149�61 ( C� 14), 105�12 ( C�15) , 161�16( C�16), 51�05 ( C�17 ), 29�82 ( C�171 ) , 30�99 ( C�172 ), 173�34 ( C�173 ), 51�68( C�174 ), 50�06( C�18) , 23�07( C�181 ) , 172�15 ( C�19 ) , 93�09 ( C�20 ), 12�09 ( C�21) , 128�88 ( C� 31), 122�76( C�32)。薄板斑点的 R f值与品脱 镁叶绿素甲酯相同, 1H�NMR和 MS数据与文献 (5�7) 报道的脱镁叶绿素甲酯一致, 故确定为脱镁叶绿素 ∋1004∋ Journa l o f Ch ineseM ed icina lM a teria ls� � 第 31卷第 7期 2008年 7月 甲酯 (M ethy l phaeophorbide a)。 化合物∃: 无色柱状结晶 (石油醚 �乙酸乙酯 ) , mp 291~ 292− 。 E I�MS m /z: 428 (M + ) , 413, 395, 275, 248, 231, 206, 179, 149, 125, 109, 95, 69。1H� NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 0�90( 3H, d, J= 6�6H z, 23� CH 3 ), 0�77, 0�82, 0�95, 0�99, 0�99, 1�01, 1�17( each 3H, s, 7 + CH3 ) , 3�34 ( 1H, m, 3�H ); 13 C�NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 19�8 ( C�1 ), 36�9 ( C�2 ), 72�7 ( C�3) , 49�2( C�4), 38�1( C�5) , 41�7( C�6), 18�0( C� 7) , 53�2 ( C�8 ), 37�1 ( C�9) , 61�3( C�10) , 35�5 ( C� 11) , 30�7 ( C�12) , 38�4 ( C�13 ), 39�7 ( C�14) , 32�5 ( C�15) , 36�1 ( C�16 ) , 30�1 ( C�17 ), 42�8 ( C�18 ) , 35�3 ( C�19 ), 28�5 ( C�20 ), 32�9 ( C�21 ), 39�3 ( C� 22) , 10�0 ( C�23) , 14�6 ( C�24 ), 18�6 ( C�25) , 18�8 ( C�26) , 20�8 ( C�27 ) , 32�0 ( C�28 ), 35�1 ( C�29 ) , 32�3( C�30)。以上数据与文献 (8)报道的数据一致, 鉴定为木栓醇 ( friedelino l)。 化合物%: 白色结晶 (丙酮 ) , mp 215 ~ 217− 。 E I�MS m / z: 426(M + ) , 218, 207, 189, 175, 161, 135, 109, 95, 69, 55, 41。1H �NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 0�78 ( 3H, s, 24�CH3 ) , 0�81( 3H, s, 28�CH3 ), 0�85( 3H, s, 26�CH3 ), 1�70 ( 3H, s, 30�CH3 ) , 4�59 ( 1H, brs, 29� H ), 4�71 ( 1H, brs, 29�H ), 3�21 ( 1H, dd, J= 11�4, 4�8H z, 3�H); 13 C�NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 38�6 ( C� 1) , 27�3( C�2) , 78�9( C�3), 38�8( C�4) , 55�2( C�5) , 18�3( C�6) , 34�2 ( C�7 ), 40�8 ( C�8) , 50�4 ( C�9 ) , 37�1 ( C�10 ), 20�9 ( C�11 ), 25�1 ( C�12 ), 38�0 ( C� 13) , 42�8 ( C�14) , 27�4 ( C�15 ), 35�5 ( C�16) , 42�9 ( C�17), 48�2 ( C�18 ), 47�9 ( C�19) , 150�9 ( C�20) , 29�8 ( C�21 ), 40�0 ( C�22 ), 26�6 ( C�23 ), 21�0 ( C� 24) , 15�9 ( C�25) , 15�8 ( C�26 ), 14�5 ( C�27) , 18�0 ( C�28), 109�4( C�29) , 19�3( C�30)。以上数据与文 献 (9)报道的数据一致, 鉴定为羽扇豆醇 ( lupeo l)。 化合物& : 白色针晶 (石油醚�乙酸乙酯 ) , 分子 式 C29H48O, mp 154 ~ 155− 。L iebermann�Burchard 反应为阳性。E I�MS m /z: 412(M + ) , 397, 396, 395, 381, 300, 273, 271, 255, 231, 225, 181, 175, 119, 95, 93, 66, 55, 31。1H �NMR ( 500MH z, CDC l3 ) : 5�35 ( 1H, d, J= 5�5H z) , 5�16( 1H, dd, J= 8�5, 15H z) , 5�01 ( 1H, dd, J = 8�5, 15H z), 3�52 ( 1H, m ); 13C� NMR( 500 MH z, CDC l3 ) : 37�2 ( C�1) , 31�9 ( C�2 ), 72�0( C�3) , 42�3 ( C�4), 140�8( C�5 ), 121�8( C�6 ), 31�9( C�7) , 31�9 ( C�8 ), 50�2 ( C�9) , 36�5 ( C�10 ), 21�1 ( C�11) , 39�8 ( C�12) , 42�3 ( C�13) , 56�9 ( C� 14), 24�3 ( C�15) , 28�9 ( C�16) , 56�1 ( C�17 ), 12�0 ( C�18 ), 19�4 ( C�19) , 40�5 ( C�20) , 21�2 ( C�21 ), 138�3( C�22) , 129�3 ( C�23) , 51�2 ( C�24) , 31�9( C� 25), 21�2 ( C�26) , 19�0 ( C�27) , 25�4 ( C�28 ), 12�2 ( C�29)。以上数据与文献 (10)报道的数据一致,鉴定 为 5, 22 �豆甾烯醇 ( st igmasta�5, 22�dien�3��ol)。 致谢:核磁和质谱数据分别由贵州大学精细化工研究中心和贵 州省中国科学院天然产物化学重点实验室测定。 参 考 文 献 [ 1] 孙迪安, 李广义 �香科科属植物中二萜研究进展 �天然 产物研究与开发, 1995, 7( 4): 58�64� [ 2] 贵州省中医研究所 �贵州中草药名录 �贵阳:贵州人民 出版社, 1988: 508�510� [ 3] 林材, 曹配雪,梁光义 � 马兰化学成分的研究 � 中国药 学杂志, 2006, 41( 4): 251�252� [ 4] 杨尚军, 仲英,骆宏丰, 等 �霞草根化学成分的研究 �中 国中药杂志, 1999, 11( 24): 680�681� [ 5] Hueyhc, Hu iKW, Junko I, et a l� Cyto tox ic pheopho rb ide� re lated compounds from C lerodendron calam ito sum and C� cyr tophy llum� J Nat Prod, 2001, 64: 915�919� [ 6] W rayv, Jurgens U, Brockm ann H, et a l� Electo rph ilic re� ac tions of chlor in derivativ es and a comprehensive collec� tion o f 13C date of these products and close ly related com� pounds� Tetrahedron, 1979, 35: 2275�2283� [ 7] Nakatani Y, Ourisson G, Beck j� Cy tostatic pheophytins from silkwonm escreta and de rved photocytotox ic pheopho r� b ides� Chem Pharm Bu l,l 1981, 29: 2261�2269� [ 8] 袁久志, 孙启时 �麻栎叶的化学成分研究 �沈阳药科大 学学报, 1999, 16( 1): 60�62� [ 9] 袁久志, 孙启时 �蒙古栎化学成分的研究 �中国中药杂 志, 1998, 23( 7): 548�550� [ 10] 高幼衡, 徐鸿华, 刁远明, 等 � 佛手化学成分的研究 (! ) �中药新药与临床药理, 2002, 13( 5): 315�316� ( 2007- 12- 14收稿 ) ∋1005∋Journa l o f Ch ineseM ed icina lM a teria ls� � 第 31卷第 7期 2008年 7月