第09章 维生素类药物的分析

nullnull第九章维生素类药物的分析null第一节 概述维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。null VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPPnull-H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第二节 维生素Anull为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯（一） 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物null维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75% 新维生素Ab 320.5 24% 新维生素Ac 310.5 15% 异维生素Aa 323 21% 异维生素Ab 324 24% 相对生物效价nullVitA2VitA3 易发生脱氢、脱水、聚合反应null鲸醇null △或有金属离子存在时氧化↑null环氧化物VitA醛VitA酸nullCHCl3不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等null条件 无水无醇CHCl3null蓝色紫红null（BP（1998））λmax为326nm 一个吸收峰λmax为350～390nm 三个吸收峰null去水VitA（VitA3）↓VitAnullnull立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）UV法（一）null三点校正法 1. 条件： （1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。null2. 波长的选择： （1） 1 VitA的max（328nm） （2） 2 3 分别在1的两侧各选一点null测定对象 VitA醋酸酯第一法 等波长差法nullnull第二法 等吸收度法(皂化法)测定对象 VitA醇nullnull测定法 （1）基本步骤: 第一步 A选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除 null注意： C 为混合样品的浓度 第二步 求null第三步 求效价换算因数由纯品计算而得：nullnullnull第四步：求标示量％null（等吸收度法） 适用于维生素A醇第一法无法消除杂质干扰时用此法[ 皂化法、6/7A法 ]（3）第二法null水溶性脂溶性null 判断max是否在323～327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算是否null 判断 A300 /A325 是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325(校正)nullnull（二）三氯化锑比色法优点 简便 快速λmax 618nm～620nm曲线法 苯并－二氢吡喃醇第三节 维生素Enull***null生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10（天然品）（合成品）dl－α－生育酚醋酸酯null结构与性质一、苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键 易水解null（一）硝酸反应橙红色null（橙红色）生育红HNO3强氧化剂null三氯化铁－联吡啶反应（二）null对-生育醌弱氧化剂null红色nullλmax = 284nmλmin = 254nm0.01%无水乙醇中null维生素EUV图null薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）显色剂 硫酸（105℃ 5′） VitE Rf = 0.7null游离生育酚 硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄→灰紫） 利用游离生育酚的还原性， 将硫酸铈还原成硫酸亚铈试剂（二）null（M生育酚= 430.8）例 取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。null≤2.15％null药典规定消耗硫酸铈液（0.01mol/L）≤1.0ml设：应消耗硫酸铈液≤ V ml 0.01×1.0 ＝实际浓度× V若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L， 应重新计算硫酸铈的消耗量nullGC法（一）GC特点1、选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制null利用生育酚的易氧化性还原型氧化型二苯胺（亮黄→灰紫）null防止Ce(SO4)2的水解 减慢生育酚被O2氧化速度C、酸性条件Ce(SO4)2易溶于水 生育酚易溶于醇B、溶剂分子量较大，反应慢 易被O2氧化A、反应速度氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)第四节 维生素B1HClCl-null（一）溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UVλmax = 246nmnull嘧啶环 —— 伯氨噻唑环 —— 季铵（三）硫色素反应（四）碱性nullChPnullnull硫色素＋2HnullVitB1H+H+H+nullS元素反应Cl-反应null喹那啶红－亚甲蓝 （紫红→天蓝）nullUV法（二）null片剂、注射剂（每片）相当于标示量的%=A = ECL规格 g/片g/100mlgChPnull准确度高 灵敏度低 操作繁琐 设备简单nullnull2×337.273479.22null 取本品约50mg，精密称定，加水50ml溶解后，加盐酸2ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液4ml，继续煮沸2分钟，用80℃恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（1→20）20ml分次洗涤，再用水10ml洗涤1次，最后用丙酮洗涤2次，每次5ml，在80℃干燥至恒重，精密称定，所得重量与0.1939相乘，即得nullA. 取样量 50mg 提高灵敏度B. 80℃ 保持4个H2OC. HCl 增大沉淀颗粒D. 硅钨酸 ：VitB1 = 8 ：1 使沉淀完全E. 硅钨酸边搅拌边缓慢加入 增大沉淀颗粒nullnull激发波长365nm 发射波长435nmnull+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇SdAb对照液供试液null（1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析null第五节 维生素CL－抗坏血酸nullnull二烯醇结构二酮基结构二烯醇结构null有活性有活性无活性null糖类的显色反应结构与糖类相似nullC3－OH的 pKa = 4.17C2－OH的 pKa = 11.57一元酸nullL(+)－抗坏血酸 活性最强手性C（C4、C5）**null与碱反应nullnullnullnull1、与AgNO3反应2、与2，6 - 二氯靛酚反应(ChP2000)氧化型(ChP2000)null（玫瑰色）（无色）null3、与碱性酒石酸铜反应USP4、与KMnO4反应null或盐酸50℃吡咯USPnullnullnullBP0.01mol/L HClnull指示剂 淀粉指示液nullnull 取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6null（1）酸性环境 d . HCl （2）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定 赶走水中O2减少O2的干扰nullUSPJPnullnull（2）快速滴定 2min内 （1）酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定 （定量过量）（测剩余染料）null（4）缺点 需经常标定贮存≤一周干扰多 氧化力较强null1、HPLC的优点灵敏度高选择性高分离分析同步微量分析干扰少 快速null2、HPLC法分离VitC常用方法及测 定对象 对象 制剂、生物样品、果汁方法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分配色谱法（正、反相）血、尿、组织、细胞等null108．在三氯醋酸或盐酸存在下，经 水解、脱羧、失水后，加入吡 咯即产生蓝色产物的药物应是 A. 氯氮卓 B. 维生素A C. 普鲁卡因 D. 盐酸吗啡 E. 维生素Cnull99：88．中国药典（2000年版）采用 以下何法测定维生素E含量 A. 酸碱滴定法 B. 氧化还原法 C. 紫外分光光度法 D. 气相色谱法 E. 非水滴定法null99：77. 下列药物的碱性溶液，加入 铁氰化钾后，再加正丁醇， 显蓝色荧光的是 A. 维生素A B. 维生素B1 C. 维生素C D. 维生素D E. 维生素Enull97：77．既具有酸性又具有还原性的 药物是 A. 维生素A B. 咖啡因 C. 苯巴比妥 D. 氯丙嗪 E. 维生素Cnull99m：132.维生素C的鉴别反应，常采 用的试剂有 A. 碱性酒石酸铜 B. 硝酸银 C. 碘化铋钾 D. 乙酰丙酮 E. 三氯醋酸和吡咯null98：85. 能发生硫色素特征反应的药物 是 A. 维生素A B. 维生素B1 C. 维生素C D. 维生素E E. 烟酸null115．维生素A的鉴别试验为 A. 三氯化铁反应 B. 硫酸锑反应 C. 2,6-二氯靛酚反应 D. 三氯化锑反应 E. 间二硝基苯的碱性乙醇液反 应null77．中国药典（2000年版）规定维生 素A的测定采用紫外分光光度法 （三点校正法），此法又分为 A．等波长差法 B．等吸收度法 C．6/7 A法 D．差示分光法 E．双波长法null78．维生素E的鉴别试验有 A．硫色素反应 B．硝酸氧化呈色反应 C．硫酸-乙醇呈色反应 D．碱性水解后加三氯化铁乙醇 液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反 应 E．Marquis反应null 维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离 ，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。生育酚null 维生素B1 的噻唑环在 介质 中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合 环合，然后经 等氧化剂氧 化生成具有荧光的 ，加 荧 光消失，加 荧光又显出；此反应 称为 反应。碱性铁氰化钾硫色素酸碱硫色素null 维生素C是 元弱酸，具有强 性，易被氧化剂氧化，常用 作其它制剂的 剂。 一还原抗氧null