20110330-15189经验交流-南方医院

nullISO 15189 医学实验室认可 ——检测系统的性能验证实验经验交流 ISO 15189 医学实验室认可 ——检测系统的性能验证实验经验交流 廖雯, 2011-3-30几个主要的实验室管理标准几个主要的实验室管理标准各个国家/地区的实验室管理法规（强制性） 美国 2003 年 2 月 24 日修订的《临床实验室管理改进法案》(CLIA) 我国卫生部 2006 年 6 月 1 日实施的《医疗机构临床实验室》 专业机构基于法规制定的实验室认可标准 美国的 CAP 计划 国际标准化组织制定的质量标准 ISO/IEC 17025《检测/校准实验室—质量和能力的通用要求》 ISO 15189《医学实验室—质量和能力的专用要求》 ISO 15190《医学实验室—安全要求》 GB 19489 《实验室—生物安全通用要求》 中国的 ISO 15189 医学实验室认可中国的 ISO 15189 医学实验室认可ISO 15189:2007 , 自 2008 年 12 月 1 日实施 医学实验室—质量和能力的专用要求 Medical laboratories -Particular requirements for quality and competence 中国合格评定国家认可委员会（CNAS）2008 年 6 月 16 日发布 CNAS-CL02《医学实验室质量和能力认可准则》 CNAS-CL02 等同采用 ISO 15189:2007 ISO 15189 介绍 ISO 15189 认可标准ISO 15189 介绍 ISO 15189 认可标准ISO 15189 介绍 技术要求ISO 15189 介绍 技术要求ISO 15189 介绍 技术要求-5.5检验程序ISO 15189 介绍 技术要求-5.5检验程序5.5.7 检验程序改变时，应向服务客户解释5.5.1 选择符合实验室服务用户的需求并适 用于检验的程序5.5.4 检验程序的性能应与预期用途相关5.5.6服务客户需要时，可列供客户参考5.5.5定期评审生物参考区间5.5.2 应评估所选用的方法和程序5.5.3 所有程序需文件化检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价方案检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价方案检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价方案非配套系统 — 评价所有的性能参数，与配套系统做结果比对检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价方案检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价方案配套检测系统 — 验证公司提供的性能参数非配套系统 — 评价所有的性能参数，与配套系统做结果比对检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价方案检测系统性能评价和验证 定量检验项目验证和评价方案免疫 — TSH 功能灵敏度配套检测系统 — 验证公司提供的性能参数非配套系统 — 评价所有的性能参数，与配套系统做结果比对检测系统性能评价和验证 定量精密度评价检测系统性能评价和验证 定量精密度评价EP5-A2 实验方案 2 个浓度水平 至少 20 天实验，每天做2批，批间间隔时间不少于 2 小时 每批每个水平2 次重复测定 每批或每天改变物和质控品的检测顺序 为了模仿日常的操作过程，每批包含至少10个病人样品一同检测 优势 目前精密度评价实验方案中最全面和最具有统计学效能的 劣势 实验过程繁琐，统计复杂，实用性不强 检测系统性能评价和验证 定量精密度验证检测系统性能评价和验证 定量精密度验证EP15-A 实验方案 2 个浓度水平 至少 5 天实验，每天做一批 每批每个水平3 次重复测定 每次重复检测的时间以及检测顺序不做要求 检测系统性能评价和验证 定量精密度验证检测系统性能评价和验证 定量精密度验证样品要求 浓度位于医学决定水平附近，如 Glu 126md/dl or 7.0mmol/l 生产制造商提供的精密度评估浓度附近 质控品、校准品、病人血清或其他已知浓度的样品，尽可能与病人测量样品相似检测系统性能评价和验证 定量精密度评价检测系统性能评价和验证 定量精密度评价检测系统性能评价和验证 定量精密度评价检测系统性能评价和验证 定量精密度评价 实验结果统计计算 批内不精密度 Sr 总不精密度 S1 统计结果与谁来比较？ 厂商说明书中声明的精密度 允许总误差(CLIA’88, 生物变异） 批内不精密度 Sr < 1/4 允许总误差 总不精密度 S1< 1/3 允许总误差 性能验证试验模板检测系统性能评价和验证 定量正确度验证检测系统性能评价和验证 定量正确度验证验证正确度的方法 参加室间质评 方法学比较 参考方法 参考物质 检测校准品，计算回收率 检测的校准品批号与定标用批号不一样 回收率在允许总误差范围内可接受 检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 相关概念 分析测量范围AMR 只患者样本未经任何处理，由检测系统直接测量得到的可靠的结果范围，在此范围内一系列不同样本分析物的测量值与其真值呈线性关系 临床可报告范围CRR 指定量检测项目向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释，浓缩或其他预处理。对于CRR大于AMR的检验项目，需进行最大稀释度验证试验，并结合临床决定水平和功能灵敏度来共同确定该项目的CRR。检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 验证分析测量范围的几种方法 目测法 主观，粗略，不具重复性 仅作为初步评价线性的一个工具 平均斜率法 采用最小二乘法直线回归做统计分析方法 最大缺点是对离群值非常敏感，单个的离群值可能将整个回归直线拉“高“或者拉”低“ EP6-P 指南 采用单一直线回归处理，这种方法的缺点是易受检测的不精密度影响 EP6-A指南 采用多项式回归作为分析线性的评价方法。被认为是到目前为止分析测量范围评价实验中最好的统计学方法。检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证EP6-A 实验方案 验证线性：5-7个浓度水平，重复2次测定。 建立线性：9-11个浓度水平，重复测定2-5次 重复检测 2 次 如果同一项目要检测不同类型的样品，则需要对每种检测样品进行线性验证或评价 检测顺序随机或一天内做两次实验，第一次实验由低到高重复测定1次，第二次实验由高到低重复测定1次 Tips： 至少6个检测浓度 检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 样品要求 病人混合血清（理想的样品基质），高值样品位于线性上限，低值位于下限 稀释方案 Tpis 日常工作中多留取高低值标本 低值标本可用推荐稀释液代替，如果用稀释液可能会得到负值结果。 高值标本可通过在低值标本中加入分析物的方法制备 检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 数据的收集 性能验证试验模板检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 随机误差判断 随机误差用L个样本的所有重复测量结果的集合方差来评价，是一个不依赖于分析物浓度的总测量均值的变异，用SDr（CVr）来表示 将SDr与不精密度的设定目标进行比较，既可以判断词精密度能不用来真实，可靠地评价线性关系。检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 回归分析 计算每个非线性系数斜率的标准误SEi，然后进行t检验，判断非线性系数是否有统计学意义。 如果非线性系数与0没有显著性差异，则认为存在线性。 如果非线性系数与0有显著性差异，只能认为是非线性被检测到，而不代表队患者的检测结果有多大的影响 检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 非线性分析 通过计算回归标准误，确定最适的二次多项式或者三次多项式 计算每个浓度处的线性偏离（DL) 将每个浓度水平处的DL与设定的误差范围比较。 如果DL<设定误差：检测到统计学上的非线性，由于非线性误差小于设定目标，采用线性方式处理患者结果 如果DL>设定误差：代表该点可能是非线性——找原因；观察散点图，试着舍去DL最大值的浓度点，重新进行统计分析，即缩小线性范围。 检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 – 简单的统计方案检测系统性能评价和验证 分析测量范围验证 – 简单的统计方案若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，用直线回归对数据进行统计，得直线回归Y=bX+a，若r2>0.95，b在0．97～1．03范围内，a接近于0，则可直接判断测定方法在实验所涉及的浓度范围内成线性。性能验证试验模板检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证方案一： 样本要求：接近线性范围上限的样品，至少3个 按照需要验证的稀释倍数来稀释 理论值为上限样品的浓度/稀释倍数 回收率：检测值与理论值的% 判断：在允许总误差范围内 检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证 方案二： 样本要求：用超过线性范围的样品，做5个浓度的系列稀释（1,2,3,4,5) 中间浓度的稀释样品(3)检测值为理论值，假设5号样品的稀释倍数为需要验证的倍数， 5号样品的理论值：(3号稀释倍数/5 号样品的稀释倍数)x3号样品检测值 回收率：5号样品检测值/理论值x% 判断：在允许总误差范围内 检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证 Tips： 免疫项目（AFP等）建议使用第二种方案。 Eg：AFP 测量范围：0.5-1000IU/ml 推荐稀释比例：1:50 检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证检测系统性能评价和验证 定量稀释倍数验证 Tips： 生化项目稀释倍数的选择 Eg：UREA 测量范围：0.5-40mmol/L 验证的稀释倍数为：3倍 检测系统性能评价和验证 参考区间验证检测系统性能评价和验证 参考区间验证参考区间的建立 参考区间的转移和验证 a：同样的系统，处于同一地区，检验服务的范围和对象基本相同。 b：不同的系统，处于同一地区，检验服务的范围和对象基本相同。首先进行系统之间的比对和偏倚评估。 c：相同的系统，不同的地区，检验服务范围和对象。在既往研究报道中未显示不同人群间此项目参考值有明显差异的。 C28-A2 20个正常人（保留病人信息记录） 结果有18个以上在参考区间内，验证了参考区间 采样调查问卷nullThank you for your attentionRoche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031 China This presentation is our intellectual property. Without our written consent, it shall neither be copied in any manner, nor used for manufacturing, nor communicated to third parties.COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche检测系统性能评价和验证 灵敏度验证检测系统性能评价和验证 灵敏度验证检测底限LLD 样品单次检测可以达到的非空白检测相应两对应的分析物量。检测系统或者方法小于或者等于检测底限的分析物量只能报告“无分析物检出”。 检测系统性能评价和验证 灵敏度验证检测系统性能评价和验证 灵敏度验证生物检测线（BLD）定义 某样品单词检测可能具有的最小响应量刚大于空白检测低值响应量，该样品内含有的分析物浓度或其他量值为生物检测低值 检测系统性能评价和验证 定量功能灵敏度检测系统性能评价和验证 定量功能灵敏度功能灵敏度定义 检测20天（或10天，每天2次） 20% CV 对应的浓度为功能灵敏度 样品要求 系列检测低限样品实验室内部比对实验室内部比对不同检测系统测同一项目，需进行比对 定量比对参考 EP9-A2 40 例病人新鲜样品 样品浓度分布：一半正常，一半异常（一半低值，一半高值） 定性比对 2份阳性、3份阴性病人新鲜血清，试剂盒阴阳性对照、空白、弱阳性质控物 同时检测，结果差异<1/2室内质控 RCV 定量检测的比对方案定量检测的比对方案