畸形精子指数和精子畸形指数与男性不育症患者精子密度、活动率及精子形态的关系

广东医学 2OO6年2月 第27卷第2期 畸形精子指数和精子畸形指数与男性不育症 患者精子密度、活动率及精子形态的关系* 姜彦嘉 王奇玲 马春杰 陈爱平 邓顺美 唐立新 文任乾 蔡慧雅 庄嘉明 广东省生育科学技术研究所(广州 510600) 【摘要】 目的 探讨畸形精子指数(teratowospennia index，TZI)和精子畸形指数(sperm deformity index，SDI)与 不育症男性患者精子密度、活动率、精子形态的关系。方法 精子形态采用改良巴氏染色后用白细胞分类计数的 实验室计数器记录精子密度、活动率、精子正常形态和TZI及SDI。结果 对52例标本的统计，SDI与男性不育症 患者精液精子密度、活动率、正常精子形态率呈负相关。而TZI与上述各参数问无相关性。结论 精子畸形指数 是不育男性精液检查的一个重要参数。 【关键词】 男性不育 精液 改良巴氏染色 畸形精子指数 精子畸形指数 常规的精液分析(semen analysis，SA)包括精子密 度、精子活动率、存活率、精子形态及精子一宫颈黏液 穿透试验等，一直是男性生育能力的主要实验室 检查手段。人类精液的分析和影响因素国内外已有许 多报道【lI2J，但有关畸形精子指数(rIZI)及精子畸形指 数(SDI)对精子及生育力的影响在国内却极少有相关 的报道。畸形精子是指头、体、尾的形态变异，如大头， 小头，双头等；中段畸形：如残余胞浆，弯曲畸形等；鞭 毛畸形：如鞭毛缺失，双鞭毛，短鞭毛等；混合畸形：指 同一个精子具有2种或2种以上的畸形。精子畸形反 映了睾丸生精功能障碍。如精索静脉曲张，病毒感染， 精神性应激反应，过敏反应，泌尿生殖道感染、腮腺炎 并发的睾丸炎、附睾结核、精索静脉曲张等。这些病均 可影响精于的质量。长期烟酒过量，均可使精子发生 畸变，可引起睾丸生精功能障碍，畸形精子增多，其后 果是造成不孕，习惯性流产，胎儿畸形，新生儿弱智等 情况的发生。本研究探讨 TZI和 SDI与精液常规分 析、精子形态学等参数的相关性分析。 1 资料与方法 1．1 一般资料 选自2005年本研究所男性科门诊男 性不育患者52例，年龄24～39岁，婚后无避孕正常性 生活1年以上不育，排除无精子症。多数患者为原发 不育，体检未发现有明显睾丸、附睾及输精管异常。 1．2 方法 1．2．1 精液采集 禁欲4～7 d在取精室手淫法取精 液于干燥经消毒的洁净广口杯内，置于37℃水浴箱内 使之完全液化后转移至刻度离心管内测量体积，37％ 水浴中待检。 1．2．2 操作方法 按 WHO的操作方法，分析精液量、 液化时间、pH值、黏稠度以及精子形态等。精液完全 *广东省计划生育委员会科技项目 (编号：99—02) · 231 · 液化后，先取一滴约 1O 精液滴在载玻片上，拉薄涂 片，用改良巴氏染色法染色待检。 1．2．3 精液常规分析 采用手工操作方法按照 WHO 实验室检验的精液分析常规 SA检测。正常 参考值按手册规定精子密度≥20×106／ml／、精子活动 率≥5O％、a级+b级精子活动率≥50％为精液变量的 参考值计数。 1．2．4 计算多重精子缺陷指数 按世界卫生组织(研的) 编写的精液分析手册上的方法进行改良巴氏染色后的 标本进行精子形态分析。形态通常用于白细胞计数的 实验室分类计数器，在按键上标明“正常”、“头部缺 陷”、“中段缺陷”和“尾部缺陷”即可用于精子缺陷计 数。在计数时，带有一种缺陷的一个精子，如精于的头 部缺陷，就按一下标有头部缺陷精子的那个键，并记录 下来，这个精子作为一个细胞计数。如果一个精子同 时有头部、中段及尾部缺陷，记录时应同时按相应的三 个按键，这样，三种不同的精子缺陷分别被记录在相应 的分类中，而这个精子只作为一个细胞计数【3J。这一 点在计数时非常重要。记录200个精子形态，计算出 正常形态精子的百分率和 TZI及 SDI。 1．3 统计学方法 采用SPSS 10．0统计软件。由于精 液常规各参数均不服从正态分布，各参数的均值和变 异以中位数(25百分位数，75百分位数)表示。各指标 之间的相关性进行 Sp朗硼an’s相关分析。 2 结果 2．1 精液常规 52例中颜色灰白，黏稠度 5l例为正 常，1例为+++阳性。精液常规各参数的情况见表 1。 2．2 SDI与 TZI的相关分析 SDI与 TZI两个指标之 间具有正相关，相关系数为0．622，P值小于 0．001。 维普资讯 http://www.cqvip.com · 232 · 表 l 基本描述 ngMedical Journal Feb．2006，Vo1．27，No．2 2．3 sDI与精液常规各参数的相关分析 SDI与密 度、活动率、前向活动率、正常形态各指标问均有负相 关性，相关系数分别为 一0．290，一0．372，一0．805，一 0，403，经检验，各相关系数 P值均小于O．05，SDI与各 指标的相关有显著性。精子密度与活动率、前向活动 率、正常形态的相关系数分别为0，384，0．361，0．357，P 值均小于0．01，相关有显著性。活动率、前向活动率和 正常形态的相关系数分别为 0．959和 0．462，P值均小 于O．0l，相关有显著性。 2．4 T-ZI与精液常规各参数的相关分析 rlZI与密度、 活动率、前向活动率、正常形态各指标间的相关系数分 别为一0．1o3，一0．059，一0．117，一0．134，经检验，各相 关系数 P值均大于0．05，rlZI与各指标的相关没有显 著性。 3 讨论 形态异常的精子经常有多种缺陷。若按以前的方 案，当多种缺陷同时存在时，只记录其中一种，即头部 的缺陷先于中段的缺陷，中段的缺陷先于尾部的缺陷。 现在是用畸形指数(teratozoospermla index，，IZI)或多种 异常指数(multiple anomalies index，MAI)，即用缺陷总 数除以畸形精子数目，以及用精子畸形指数(sperm de． fortuity indes，sDI)，即缺陷总数除以精子总数。要提醒 注意的是，畸形精子指数的数值介于 1．00和 3．0o之 间。以前的报道提示，rlZI>1．6与未经治疗不育夫妇 的低生育率有关，而且 SDI 1．6是体外受精失败的阈 值。这些参数预示精子在体内和体外的功能情况 J。 本研究表明，SDI与精子密度、活动率、前向活动 率、正常形态间呈负相关，相关有显著性。而 rlZI与上 述各参数无显著性。究其原因，这与 rlZI和 SDI的计 算方法及其反映的精子缺陷情况有关。SDI由缺陷总 数除以所数精子总数得出的数值。缺陷总数是头部缺 陷精子数、中段缺陷精子数煌尾部缺陷精子数三者之 和。所以 SDI反映的是各种缺陷精子在所数精子中的 比例，即反映了一份标本的多重精子缺陷情况。这必 然与正常精子形态呈负相关。而形态正常是精子运动 的基础之一，所以，也不难理解 SD!与精子活动率及前 向活动率成反比。至于 SDI与精子密度的负相关，有 待于进一步研究进行解释。同样，rlZI即畸形精子指 数，是由缺陷总数除以缺陷精子数得出的值。T-ZI等于 1表示每个异常精子只有一种缺陷，TZI等于 3则表示 每个异常精子都有头部、中段和尾部缺陷。所以，rlZI 反映的是每个精子的缺陷程度，是针对每个精子个体 而言，而精子密度、活动率、前向活动率和正常形态以 及 SDI是就每一份精液的整体而言。这大概就是 T-ZI 与上述参数相关无显著性的原因。 在严重畸形精子症(正常形态率≤5％)及少精子 症的不育患者中，精子与透明带结合异常比率很高。 因此，l临床上应把这些有精子缺陷，尤其是会影响精子 与透明带结合的患者检测出来，采用 ICSI治疗，避免 这些患者用 ⅣF治疗而导致很低的受精率。精子形态 学分析和精子与透明带结合试验有助于l临床选择 M 或 ICSI治疗不育患者。 在不育症患者中，由于精子形态异常引起的不育 或生育力低下比例很高，约为 30％～4o％。以往临床 上诊断为不明原因不育症患者，其中又很多人实际上 是由于畸形精子率高导致受精率低或失败，其问题在 于对精子形态的认识不够及测定不准L4J。在常规精液 分析中，精子形态学测定对预测精子受精能力最有价 值，但精子形态学评估则是较不容易做准确和稳定的。 畸形精子的检测和计数应当按 WHO的标准中推荐的 染色方法和计数方法进行，并且要严格掌握正常精子 形态的标准以及畸形精子的分类标准。实验室技术人 员应通过大量的试验，通过多观察一些正常生育男性 的精液标本，严格按照 WH O实验室检验手册的操作 方法做，同时，实验室应有质量控制，每个实验室技术 人员要经常核查自己的标准，这样可提高实验室技术 人员对正常精子形态的认识。现在比较普遍采用的是 严格精子形态学测定方法 5。 若按以往 WHO实验室检验手册(第一至三册)中 所规定的人类精子正常形态应在>30％，但在 WH O手 册中(第四册)没有明确规定人类精子正常形态的参考 值是多少，然而提到来自辅助生殖技术项目的资料表 明，如果正常的精子低于15％，体外受精率低 3。有资 料表明，精子形态对预测 M 受精率极有意义，根据研 究结果显示，用严格精子形态测定的正常率≤5％的患 者，ⅣF受精率平均低于 30％ J，其中大部分受精失 维普资讯 http://www.cqvip.com 广东医学 20O6年2月 第27卷第2期 败，故这类患者应选用 ICSI治疗。一般地，精子外观 形态异常主要与精子功能有关_6_6。 本文研究的目的只是探讨畸形精子指数 (rIzI)和 精子畸形指数(SDI)与男性不育精子密度、活动率、精 子形态的关系。从辅助生殖技术的角度来分析，我们 更应该去探讨分析研究少、弱精子症与 TZI及 SDI之 问的相关性，为临床提供有意义的相关数据，为此，我 们将会作进一步的研究。 参考文献 [1] W1TrEMER C。WARTER S，OHL J，et a1．Prognostic value 0f ec— tive㈣ parc el'Sin vitrofertilization programCJ]．JAssistRepred Genet，1997。14(6)：321—327． [2] CUI T H，ZHAO R L，WANG Q，et a1．Determination 0f 8p~rlll · 233 · acrosin~ivityfor evalufion 0fmaleCJ]．Asian JAndrol。2002，2(3)； 229—232． [3] WHO．WH O Laboratory m衄ual for the examination 0f human se and 一cervical rtlllCil$interation[M]．4th ed．London：Ca丌l— bridge University Press。1999：60，5—24． [4] 刘德一，朱伟杰，等．精予功能检测对选择 lvF或ICSI治疗不 育症的临床意义[J]．生殖与避孕。2OO4。24(4)：193—197． 【5 J KRUGERT F，AGPSTAAA，SI删 0NS K F。et a1．Predictive valUe 0f abnormal sperm morphology in in vi,tro fertilization[J]．Hum Re一 州 ，1988，49(1)：112一ll7． 【6 J BAKER W H G，LIU D Y，BOUM3~ H，et a1．Diagnosis 0f sperm defects in seiecting p eI1tsfor assisted fertillzation[J]．Hum Rep,~d， 1993。8(11)：1779—1783． (收稿日期：2005—09—21 编辑：庄晓文) 咬肌自然再附着的临床应用研究 郑健生 柳大烈 杜本军 单磊 南方医科大学珠江医院整形外科 (广州51o28o) 【摘要】 目的 研究咬肌自然再附着的生物学变化，为临床应用提供理论依据。方法 将下颌角缩小整形 术患者咬肌从下颌骨附着处剥离，下颌角截骨后将咬肌复住，不缝合固定，以术前正常咬肌为对照，通过检测手术 后咬肌厚度和肌电活动的变化，研究咬肌自然再附着的临床应用价值。结果 56例患者手术后咬肌形态出现了 可逆性萎缩，肌电活动经历了从减弱到恢复的过程，随访 1年，咬肌形态和功能恢复良好。结论 咬肌自然再附 着是临床上简单可行的手术方法，值得推广。 【关键词】 咬肌 再附着 应用 下颌骨的手术常涉及到咬肌的剥离和再附着，失 附着后通常将肌肉或肌腱原位缝合固定。由于口内人 路行下颌角缩小整形术时视野有限，缝合固定会增加 手术难度，而且动物实验表明咀嚼肌剥离后未缝合固 定不会引起组织的不可逆损害⋯1。我们在临床手术中 将咬肌从下颌骨附着处剥离，下颌骨截骨后咬肌自然 复位，不缝合固定，以术前正常咬肌为对照，随访 56 例，效果良好。报告如下。 1 资料与方法 1．1 一般资料 2000年 1月至2003年 12月共手术56 例下颌角缩小整形术，患者都是健康女性，年龄18 32 岁，颌面部发育正常，五官端正，牙列完整，咬骀关系正 常，下颌角肥大为骨性肥大。 1．2 治疗和检测方法 手术全部采用口内切口，麻醉 成功后，在口内自下颌升支下前缘，向前沿龈颊沟至第 二双尖牙作切口，遗留 1 cm宽牙龈缘黏膜组织以便缝 合，垂直下刀，直达骨膜。伸入剥离子，沿骨膜下充分 剥离咬肌在下颌骨升支外侧板中下段、下颌角及下颌 体下缘的附着处，根据术前设计截除下颌骨，高速电转 磨平骨面，不去除咬肌，至两侧下颌角形态对称满意 后，将咬肌自然再附着，不缝合固定，常规放置引流管， 缝合切口，包扎固定。分别于术前和术后 1，6，1个月 随访，用彩色多普勒超声诊断仪和肌电仪分别检测患 者最大紧咬时咬肌的最大厚度和肌电变化，具体如下。 B型超声测试：采用美国 Acuson 128XP／10彩色多 普勒超声诊断仪，10 MI-Iz频率探头。受试者采取端坐 位，双眼平视，体态放松，将探头置于咬肌体表，在牙齿 正中用力咬黯状态下冻结图像，于口角与耳屏切迹连 线平面测量咬肌的最大厚度，精确度为0．1 mill。由同 一 名医师独立完成测量工作，分别测量 3次，取均值。 肌电仪测试：采用上海市海神医疗电子仪器厂生 产的“NDI一200P+”检测仪测试肌电，在紧咬位时将同 心圆电极置入咬肌肌 肉鼓起最明显处 ，约在下颌角上 方 3 cm。测试时首先启动记录系统，立刻嘱咐受试者 做快速最大紧咬，系统自动记录信号，并输出相应结 果，记录运动单位电位的平均峰峰值。重复测量3次， 每次间隔 10 min，取均值。 1．3 统计学方法 组间差异的显著性采用 ONE WAY A_NOVA检验，SPSS 10．0统计软件进行统计学处理。 2 结果 手术前后紧咬位咬肌最大厚度和肌电值的变化见 维普资讯 http://www.cqvip.com