饲料添加剂维生素A／D3微粒

MM_FS_CNG_0785饲料添加剂 维生champ-ec8620-2000素A／D3微粒 检验规程 称量法 比色法 分光光度法 高压液相色谱法 MM_FS_CNG_0785 饲料添加剂维生素A／D3微粒 1.适用范围 本方法适用于以维生素A乙酸酯原油与含量为130万IU/g以上的维生素D3原油为原料，配以一定量BHT及乙氧喹啉作稳定剂，采用明胶和淀粉等辅料，经喷雾法制成的微粒，每克含维生素A乙酸酯(C12H32O2)和维生素D3(C27H44O)之比为5:1，其含量应为标示量的85%以上，本品的饲料工业中作为维生素饲料添加剂。 2.产品规格(标示量) 2.1.VA50万IU/g,10万IU/g； 2.2.VA40万IU/g，8万IU/g； 3.技术 3.1.外观和性状 本品为黄色或棕色微粒，遇热，见光或吸潮后易分解、降解，使含量下降，在40℃水中，成乳化状。 3.2.项目和指标 项 目 指 标 含量，标示量的% 85.0～102.0 颗粒度，通过2号筛% 100.0 干燥失重，% ≤5.0 4.过程简述 4.1.主要试剂 无水乙醇； 三氯甲烷(氯仿)； 三氯化锑； 三氯化锑氯仿溶液：取三氯化锑1g加氯仿4mL溶解即成。. 乙酸酐； 硫酸； 95%乙醇； 氢氧化钾； 50%(W／W)氢氧化钾溶液：取氢氧化钾与水1:1混合溶解摇匀即成； 0.5mol/L乙酸制氢化钾液：按中国药典1985年版二部附录128页制备； 抗坏血酸； 1mol/L氢氧化钠液：按中国药曲1985年版二部附录130页制备； 抗坏血酸钠溶液：取3.5g抗坏血酸，溶解于20mL 1mol/L氢氧化钠液中即成； 乙醚；不含过氧化物。按中国药典1985年版二部附录56页制备； 碱性洗涤液：取1份0.5mol/L乙醇制氢氧化钾溶液，8份水，1份95%乙醇混匀即成； 酚酞； 酚酞指示液：取酚酞1g ,加95%乙醇使成100mL即成； 异丙醇：光学纯； 正戊醇； 正已烷；优级纯；. 甲醇：色谱纯； 乙腈：色谱纯； BHT(2,6－叔丁基-4-甲基苯酚)； 维生素D3标准品(卫生部发布)； 对-二四氨基苯甲醛 (用做内示物)； 维生素D3标准贮备液：称取维生素D3标准品20mg，(称准至0.0002g)于100mL棕色量瓶中，加正已烷及数粒BHT溶解并稀释至刻度，摇匀； 内标贮备液：取内标物0.2g (称准至0.0002g)于100mL棕色量瓶中，加5mL无水乙醇溶解，并用正已烷释至刻度，摇匀； 内标分析液：准确吸取2mL内标贮备液并用正已烷烯释至100mL，摇匀； 丙三醇(甘油)； 可溶性淀粉； 甘油淀粉润滑油：取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加热至140℃保持30min，并不断搅拌，放冷即得。 4.2.仪器 实验室一般仪器和设备 筛网：孔径850±29µm(2号筛)； 旋转蒸发器； 紫外分光光度计； 高压液相色谱仪。 4.3.鉴别试验 4.3.1.称取本品100mg用无水乙醇湿润后，在研钵中研磨数分种，加氯仿10mL搅拌、过滤、取溶液2mL于试管中，加三氯化锑氯仿溶液0.5 mL,即显蓝色，并立即褪色(VA)。 4.3.2.称取本品100mg，加氯仿10mL研磨数分钟过滤，取滤液5mL，加乙酸酐0.3mL，硫酸0.1mL，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后呈绿色，(VD3)。 4.4.颗粒度检查 取本品适量倾入筛网中，适当振摇，应100%通过。 4.5.干燥失重 4.5.1.测试方法 称取本品1g，(称准至0.0002g)置于已干燥至恒重的称量瓶中，置电热恒温箱中，保持105℃干燥至恒重，减失重量，不得超过5.0%。 4.5.2.计算和结果的表示 样品干燥失重按式(1)计算： 式中：X──样品干燥失重率，%； G1──干燥前的样品加称量瓶重量，g； G2──干燥后的样品加称量瓶重量，g； G──样品的重量，g。 4.6.含量测定 4.6.1.样品前处理 称取样品适量，使含维生素A乙酸酯10万国际单位(称准至0.0002g)，置皂化瓶中； 加95%乙醇20mL，20%抗坏血酸钠溶液(临用新配)5mL，50%氢氧化钾溶液(临用新配3mL，置90℃水浴回流30min，迅速冷却)； 自冷凝管顶端加水2×15mL，冲洗冷凝管的内壁，将皂化液移至500mL(甲)分液漏斗中(分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂)； 皂化瓶用2×15mL水，2×10mL乙醇清洗，皂化瓶洗液并入(甲)分液漏斗中； (甲)分液漏斗用不含过氧化物的乙醚2×50mL振摇30s，静置，分层，把水层转移至250mL(乙)分液漏斗中； 水层用10mL乙醇，50mL乙醚，振摇30s静置，分层。把水层转移至皂化瓶中，把乙醚层转移至(甲)分液漏斗中，用2×10mL乙醚洗涤(乙)分液漏斗，洗 液合并在(甲)分液漏斗中； 把水层再转移到(乙)分液漏斗中，用50mL乙醚提取一次，弃去水层，乙醚层再并入(甲)分液漏斗中； 合并后的乙醚液用2×50mL碱性洗涤液洗涤，振摇，静置分层，弃去水层； 乙醚液用每次50mL水洗涤，直至洗涤液遇酚酞液不显红色为止； 将乙醚层放入250mL量瓶中，用适量乙醚洗涤(甲)分液漏斗，洗液并入量瓶，用乙醚稀至刻度并摇匀。 4.6.2.维生素A乙酸酯含量测定 4.6.2.1.测定方法 准确量取2mL乙醚液于100mL量瓶中，迅速加入异丙醇溶解，并稀释至刻度，使成每毫升中含维生素A乙酸酯10～15国际单位，摇匀。用紫外分光光度计测定，以1cm石英比色皿，在300nm、310nm、325nm、334nm四个波长处测定其吸光度，并测定吸收峰的波长。最大吸收峰的波长应在323～327nm之间，且300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值应不超过0.73。 4.6.2.2.结果计算 按GB 7292第3.4项表示。 4.6.3.维生素D3含量测定。 4.6.3.1.高压液相色谱分离VA、VD； 4.6.3.1.1.测试条件 高压液相色谱仪； 紫外检测器：波长254nm； 分离柱：C8硅胶柱；UBONDAPAK C8µm； 流动相：甲醇:乙腈:水=200:200:35(水量可适当调节，使VD3的Rt约7min)； 流速：1.5mL/min； 灵敏度：1.0AUFS； 4.6.3.1.2.分离方法 a. 试液的制备：吸取4.6.1项下的乙醚液50mL于100mL皂化瓶中，加1mL内标贮备液，数粒抗氧剂(BHT)，置于旋转蒸发器上，保持60℃真空蒸发至干，准确加入甲醇:乙腈=1:1的溶液5mL溶解残留物； b.操作：进a项供试液500mL于分离柱，收集5～9min(可根据具体情况而定)流出液，于50 µL皂化瓶中，加数粒抗氧剂(BHT)，装于旋转蒸发器上60℃真空蒸发至干，冷却。准确加内标分析液5mL，溶解待测。 4.6.3.2.测定方法 4.6.3.2.1.测试条件 高压液相色谱仪； 紫外检测器：波长254nm； 分析柱：硅胶柱Lichrosorb Sibo 5 µm； 流动相：正已烷:正戊醇=1000:3； 流速：2.0mL/min； 灵敏度：0.05AUFS。 4.6.3.2.2.测试方法：用微量注射器，准确吸取上述试液500µL注进分析柱，记录所得色谱峰。 4.6.3.2.3.计算和结果表示如附录A所录。 5.检验规则 5.1.本产品应由生产厂的质量检验部门进行检验，生产厂保证所有出厂的产品均符合本标准的要求，每批出厂的产品，都应附有质量检验合格证明书。 5.2.使用单位可按照本标准规定的检验规则、技术要求和测试方法，验收本产品。 5.3.取样方法 取样需备有清洁、干燥、密闭、避光性的样品瓶，并贴有标签，注明生产厂名称、产品名称、批号及取样日期。抽样时，应用不锈钢抽样针，每桶抽样适量，盛于样品盘中，充分均匀后，取出20～30g，装入样品瓶中，送化验室分析和留样。 5.4.如果在检验中有一项指标不符合标准时，应重新抽样，进行复核，产品重新检验，检验结果即使只有一项指标不符合标准时，则整批不能验收。 5.5.如供需双方对产品质量发生异议时，可由双方协商选定仲裁单位，按本标准的检验规则和检验方法进行仲裁检验。 6.标志、包装、运输和贮存 6.1.标志 6.1.1.采用鲜明标签，贴于桶的2/3处。 6.1.2.标签内容 生产厂名、产品名称、注册商标、批准文号、批号、净重、规格。 6.2.包装 内衬二层聚乙烯袋，密封，盛于外包装容器内。 6.3.运输 运输必须有遮盖物，避免日晒，雨淋，受热及撞击，搬运装卸小心轻放，不得倒置，不得与有毒物质混装、混运。 6.4.贮存. 应保存于阴凉干燥的仓库中，避免受潮进水和受热，本品不得与有毒、有害或有酸味物质一起堆放。原包装负责期为一年。 7.来源： GB 9455-88 附录A 维生素D3含量测定中计算和结果的表示 (补充件) A1样品中VD3含量按A1计算 式中：PD──供试品中VD3峰的响应值； Ppre──预VD3峰的响应值； F──预VD3的转换因子； FD──校正因子； Win──内标物称量，g； Vs──供试品的稀释倍数； Pin──内标物峰的响应值； Vin──内标物稀释倍数； Ws──供试品称量，g。 A2 FD(校正因子)的测定与计算 分别准确吸取VD3标准贮备液5mL和内标贮备液5mL，放入50mL棕色量瓶中，加正已烷稀释至刻度，混匀，过滤，取100µL过滤液注入分析柱。 计算： 式中：pin──内标峰响应值； Wr──VD3标准品称量，g； Vin──内标稀释倍数； Pr──VD3标准品峰响应植； Win──内标物称量，g； Vr──VD3标准品稀释倍数。 A3 Fpre(预VD3)校正因子测定与计算 准确吸取5mLVD3标准贮备液，于100mL皂化瓶中，加数粒BHT，置90℃水浴，避光回流45min，冷却，转移至50mL棕色量瓶中，加5mL内标贮备液，用正已烷稀释至刻度，混匀，取100 µL注入分析柱。 A3.1.Fpre(预VD3)校正因子计算： 式中：P%──转化的预VD3百分含量； Pin──内标峰响应值； Wr──VD3标准品称量，g； Vin──内标稀释倍数； Ppre──预VD3峰的响应值； Win──内标物称量，g； Vpre──VD3标准品稀释倍数。 A3.2. q%(未转化VD3含量)的计算： 式中：FD──校正因子； PD──标准品中未转化的VD3响应值； Win──内标物称量，g； Vr──VD3标准品稀释倍数； Pin──内标峰响应值； Wr──VD3标准品称量，g； Vin──内标稀释倍数。 A3.3. P%转化的预VD3含量计算： P%=100-q%………………………(A5) A4. F(P-VD3转化成VD3)-预VD3转化因子的计算