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六 第六节非发酵菌群 第七节 非发酵菌群 1．​  一、概 述 所谓非发酵菌群是指一大群不发酵葡萄糖，需氧或兼性厌氧的无芽胞革兰阴性菌。近年来，由于广谱抗菌药物、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用，导致机体微生态失调和抵抗力下降，非发酵菌引起机会感染或医院内感染日益增多，如败血症、呼吸系统或泌尿系统感染、伤口及皮肤感染、脑膜炎及角膜溃疡等。 由于该群细菌生化反应之间共性少，根据科-属-种的鉴定程序，选用葡萄糖氧化发酵（O/F试验）、氧化酶试验、动力、菌落色素等试验，必要时可做鞭毛染色观察。氧化-发酵（O/F）试验对非发酵菌群的鉴定非常关键，试验培养基中的蛋白质浓度是2g/L，而不是10g/L，可避免细菌利用蛋白质所产生的胺中和分解糖产生的酸，造成错误判断成不利用糖。多数非发酵菌广泛存在于自然界，培养和鉴定温度应选与自然界环境温度相适应的30℃为宜，动力检查应培养于18℃~20℃，在此温度下有利于其鞭毛蛋白的合成。多数非发酵菌氧化酶试验阳性。 非发酵菌的鉴定可选用目前公认质量好的市购成套专用试剂盒如API—20NE等进行编码鉴定，，也可用自动化仪器如Vitek、Biolog、Microscan、Sceptor等鉴定。 非发酵菌群属间生物学特性的主要区别见表6-7-53。 表6-7-53 非发酵菌群属间生物学特性的主要区别 试 验 菌 属 假单胞菌属 黄杆菌属 不动杆 菌属 产碱杆 菌属 丛毛菌属 摩拉菌属 氧化酶试验 + + - + + +/– 葡萄糖试验O/F 0/- - /0 0/- - - – 动 力 +/- - - + + – 菌落色素 不定 橙黄色 无色 无色 淡黄色 无色 鞭毛部位 端毛 - - 周毛 丛毛 – 注：“+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；O/- 表示氧化葡萄糖/不发酵葡萄糖；-/O表示不氧化葡萄糖/发酵葡萄糖；+/－表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性；－/+表示多数（90%以下）阴性，少数菌株阳性 二、假单胞菌属 （一）生物学特性 本属细菌为革兰阴性、直或微弯杆菌，较细长、专性需氧，在普通培养基上能生长。大多数菌种有动力，有鞭毛、无荚膜和芽胞、氧化酶阳性（少数也可阴性）。 铜绿假单胞菌是临床最常见的分离菌，在血平板上35℃培养18h～24h后，形成大而扁平、湿润、有金属光泽、有生姜味的灰绿色或兰绿色的菌落（也可以产生荧光素、红脓素等），大部分形成透明溶血环。 荧光假单胞菌的最适生长温度为25℃~30℃。部分假单胞菌属在35℃培养时不能生长，室温过夜时，则见到生长的菌落。 铜绿假单胞菌具有O抗原和H抗原。应用O抗原可对铜绿假单胞菌进行血清分型，目前可分为20个血清型。 （二）微生物学检验 临床常见假单胞菌的生物学特性鉴定见表6-7-54。 铜绿假单胞菌的绿脓素鉴定 用氯仿提取液提取色素后，加入1mol/L盐酸呈粉红色，即为绿脓素，为铜绿假单胞菌所特有。有荧光素的假单胞菌属荧光群只有三个种，可用42℃生长试验、硝酸盐产气、明胶液化以及乙酰胺水解试验鉴别见表6-7-54。 表6-7-54 临床常见假单胞菌的主要生物学特性鉴定 菌 种 麦 芽 糖 葡 萄 糖 O N P G 荧 光 素 绿 脓 素 氧 化 酶 硫化氢 精 氨 酸 双 水 解 酶 赖氨酸 鸟 氨 酸 七 叶 苷 明 胶 乙 酰 胺 对多粘菌素敏感 鞭 毛 数 目 铜绿假单胞菌 + -/+ - +/- +/- + - + - - - +/- + + ≦3 荧光假单胞菌 + -/+ - + - + - + - - - + - + >1 恶臭假单胞菌 + -/+ - +/- - + - + - - - - - + >1 嗜麦芽窄食假单胞菌 + + + - - - - - + - + + - + >1 洋葱假单胞菌 + + +/- - - + - - + +/- +/- +/- +/- - >1 腐败假单胞菌 + +/- - - - + + - - - - - - + 1 斯氏假单胞菌 + + - - - + - - - - - - - + 1 产碱假单胞菌 - - - - - + - - - - - - - + 1 食酸假单胞菌 - - - - - + - - - - - - + +/- >1 睾丸酮假单胞菌 - - - - - + - - - - - - - +/- >1 鼻疽假单胞菌 + + - - - +/- - - - - - - - - - 注：+ 表示90%以上的菌株阳性（或发酵糖）；－ 表示90%以上的菌株阴性（或不发酵糖）；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性（或发酵糖），少数菌株阴性；－/+ 表示多数（90%以下）阴性（或不发酵糖） ，少数菌株阳性 表6-7-55 荧光群假单胞菌的主要生物学特性鉴别 菌 名 42℃生长试验 硝酸盐产气 明胶液化 乙酰胺水解 铜绿假单胞菌 + +/– +/– + 荧光假单胞菌 – – + – 恶臭假单胞菌 – –/+ – – 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性；－/+ 表示多数（90%以下）阴性，少数菌株阳性 无绿脓素、荧光素的铜绿假单胞菌，菌落大多为粘液状，与荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的主要生物学特性鉴定见表6-7-55。 嗜麦芽窄食单胞菌前称嗜麦芽假单胞菌，经DNA-rRNA杂交、DNA G+C mol%，细胞脂肪酸组成等研究后曾归入黄单胞菌属，但由于无黄单胞菌素，近年许多学者建议归入窄食单胞菌属。 本菌为革兰阴性杆菌，一端丛鞭毛，大多在1～3根之间，氧化酶阴性（少数阳性）。最适生长温度为35℃，临床实验室常将生化反应在25℃～30℃培养后进行鉴定。血平板培养18h～24h后菌落较小，48h后，开始β-溶血，有草绿色色素扩散在溶血区内,菌落呈“双圈状”或“牛眼状”，并伴有淡黄色色素。O-F培养基中，由于该菌氧化麦芽糖能力比葡萄糖快而得名。氧化酶阴性、KIA不发酵葡萄糖、半固体动力呈阳性，则考虑本菌。与有关菌株的主要生物学特性鉴别如下表6-7-56。 （三）临床意义 假单胞菌属在自然界如水、空气、土壤广泛存在，也存在于人体皮肤和肠道，组成人体的正常菌群。各种原因导致机体免疫功能下降（如手术、化疗、激素治疗、抗菌药物的治疗、免疫抑制剂使用、以及慢性消耗性疾病），尤其是灼伤病房患者、ICU病房患者、最容易引起铜绿假单胞菌感染。常见有皮肤、呼吸道、泌尿道和伤口以及菌血症、中耳炎、心内膜炎、角膜溃疡、褥疮等感染；治疗可选氧哌嗪青霉素、妥布霉素、丁胺卡那、环丙沙星、头孢他定、舒普深和亚胺培南等。 嗜麦芽窄食单胞菌在自然界广泛存在，常定植于人呼吸道及粪便中。该菌为条件致病菌，可引起呼吸道感染、心内膜炎、脑膜炎、泌尿道感染及伤口感染等。近年来已成为院内感染的重要病原菌。由于该菌对亚胺培南天然耐药，实验室应注意本菌如出现敏感结果时也应为耐药。近年来临床对亚胺培南的使用增加，故而嗜麦芽分离率仅次于铜绿假单胞菌和不动杆菌。该菌的耐药程度高，抗菌药物选择难，必须依赖于实验室，常选择抗菌药物为：头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、复方新诺明等。 表6-7-56 嗜麦芽窄食单胞菌与相关菌的主要生物学特性鉴别 菌 名 氧化酶 色 素 动力 ONPG DNA酶 七叶苷 赖氨酸 鸟氨酸 洋 葱 假 单 孢 菌 + –/淡黄 + + – + + + 嗜麦芽窄食假单孢菌 – 淡黄 + + + + + – 黄 杆 菌 属 + 橙黄色 – +/– + +/– – – 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性 二、不动杆菌属 （一）生物学特性 不动杆菌属细菌为不发酵糖类、氧化酶阴性、动力阴性及硝酸盐还原试验阴性的革兰阴性球杆菌，单个或成双排列，属奈瑟菌科，涂片分布均匀，革兰染色不易脱色，称之谓“浓染”，易误认为革兰阳性菌，无芽胞及鞭毛。需氧，在普通培养基上生长良好，最适温度35℃，有些株在42℃可生长。血平板上培养18h~24h可见圆形、白色、光滑、边缘整齐直经约1.5mm ~2.0mm大小的菌落，有时可见β-溶血。 （二）微生物学检验 该属细菌氧化酶、吲哚、硫化氢、甲基红、动力和V－P试验均阴性，葡萄糖不发酵，可利用不同的有机酸。常见不动杆菌的主要生物学特性见表6-7-57。 表6-7-57 常见不动杆菌的主要生物学特性 试 验 醋酸钙不动杆菌 鲍曼不动杆菌 溶血不动杆菌 琼氏不动杆菌 约翰逊不动杆菌 洛菲不动杆菌 耐放射线不动杆菌 35℃生长 100 100 100 100 0 100 100 硝酸盐还原试验 0 0 0 0 0 0 0 10%乳糖 100 0 100 0 0 0 0 明胶液化 0 0 96 0 0 0 0 葡萄糖氧化 100 95 52 0 0 0 33 绵羊血琼脂溶血 0 0 100 0 0 0 0 反乌头酸盐利用 100 99 52 0 0 0 0 β-丙氨酸利用 100 95 0 0 0 0 - DL-4氨基丁酸盐利用 100 100 100 88 35 40 100 L-精氨酸利用 100 98 96 95 35 0 100 壬二酸盐利用 100 90 0 0 0 100 100 枸橼酸盐利用 100 100 91 82 100 0 0 戊二酸盐利用 100 100 0 0 0 0 100 L-组胺酸利用 100 98 96 100 0 0 0 DL-乳酸盐利用 100 100 0 100 100 100 100 D-苹果酸盐利用 0 98 96 100 22 76 0 丙二酸盐利用 100 98 0 0 13 0 100 注：所有数值表示实验菌株的阳性百分率 （三）临床意义 本菌为条件致病菌，广泛存在于空气中以及自然界，近年来临床感染有增加的趋势。可从尿液、脓汁、分泌物、痰、咽拭子、血液和脑脊液等标本尤其是烧伤病人的烧伤部位分泌物及老年性慢性支气管炎患者呼吸道标本分中离到该菌。 三、产碱杆菌属 （一）生物学特性 革兰阴性短杆菌，有时呈弧形，成对或链状排列。具有周身鞭毛，多数无荚膜，需氧，营养要求不高，最适生长温度为25℃~35℃，能在普通培养基上生长，除木糖氧化亚种外，均不氧化葡萄糖，血平板上可形成灰色、扁平、边缘菲薄的较大菌落。在蛋白胨肉汤中产氨、可使pH上升至8.6以上，为本菌的特点。 氧化酶和触酶阳性，石蕊牛乳培养基中和O-F培养基中产碱，脲酶、靛基质、硫化氢、明胶、VP、甲基红反应、苯丙氨酸脱氨酶和精氨酸双水解酶阴性。 （二）微生物学检验 产碱杆菌属为周身有鞭毛，O-F培养基中葡萄糖产酸为木糖氧化亚种，不产酸的为其它产碱杆菌。产碱杆菌属的主要生物学特性鉴定见表6-7-58。 表6-7-58 产碱杆菌属的主要生物学特性 硝酸盐还原 丙二酸盐 葡萄糖酸盐 O/F 木糖 葡萄糖 脱硝产碱杆菌木糖氧化亚种 + – – O O 脱硝产碱杆菌脱硝亚种 + +/– + -/- -/- 粪产碱杆菌 – + – -/- -/- 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性； O 表示O/F培养氧化糖；-/- 表示O/F培养均不氧化和发酵糖 （三）临床意义 粪产碱杆菌广泛存在于自然界如水、土壤、人和动物的肠道及皮肤，是人类的正常菌群，也是医院感染重要的条件致病菌。可从人血液、呼吸道、尿液及脑脊液等标本中分离到。临床感染标本中脱硝产碱杆菌木糖氧化亚种分离率比粪产碱杆菌高。 四、黄杆菌属 （一）生物学特性 革兰阴性杆菌、无动力、无荚膜和芽胞。菌落圆形光滑、透明或半透明、亮黄色。脑膜败血性黄杆菌的菌落大小为1 mm ~1.5mm，其它为2 mm ~3mm。在固体培养基上大多数菌株产生淡黄或橙黄色脂溶性色素，氧化酶、DNA酶和ONPG大多阳性，吲哚阳性或阴性。 营养要求不高，个别菌种培养需要添加辅助生长因子。在普通营养琼脂和麦康凯平板上生长，血平板上不溶血，最适温度为25~30℃，需氧生长。 （二）微生物学检验 黄杆菌属细菌吲哚试验应培养48h后用二甲苯提取，再加入吲哚试剂。通常微弱发酵葡萄糖，产酸量少且时间长。大多数菌水解七叶苷，液化明胶。主要菌种间的生物学特性见表6-7-59。 表6-7-59 黄杆菌属主要菌种的生化特性 试 验 脑膜炎败血黄杆菌 短小黄杆菌 芳香黄杆菌 嗜糖黄杆菌 嗜醇黄杆菌 Ｏ/Ｆ 葡萄糖 + + – + + 木 糖 – – – + 甘露醇 + – – – + 蔗 糖 – – – + + 乳 糖 – – – + + 麦芽糖 + + – + + 尿 素 酶 – – + + + 吲 哚 + + – – – 明胶液化 + + + – – 七叶苷水解 + – – + + 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性 （三）临床意义 本菌属存在于水、土壤、植物中，是引起医院感染的常见菌之一，常引起手术后感染或败血症等。脑膜败血性黄杆菌可引起新生儿脑膜炎，且死亡率高。近几年黄杆菌属感染有增加的趋势，对广谱抗菌药物耐药程度高，但对利福平、红霉素、氯林可霉素及复方新诺明等抗菌药物仍较敏感。 五、军团菌属 （一）生物学特性 军团菌于1976年首次在美国费城一次退伍军人集会后的呼吸道感染标本中分离到，故称作军团菌，是一种具有高度爆发性、流行性的呼吸道感染病原菌。 本菌为革兰阴性杆菌，大小为2~3μm×0.3 ~0.4μm，无芽胞、无荚膜。革兰染色可见菌体有空泡。多形性，可出现丝状体，具有极端鞭毛或侧鞭毛，能运动。苏丹黑、碱性沙黄染色可见菌体内有蓝黑色或蓝灰色脂滴。氧减少时不生长或生长缓慢，初次分离在含有2.5%~5%CO2环境中生长良好。最适生长温度为35℃，最适pH为6.9~7.0。营养要求较为苛刻，且生长缓慢，半胱氨酸和铁为其特殊营养需要。在活性碳酵母浸膏培养基（CYE琼脂）上经35℃培养4~5天可生长出很小的菌落，数日后可增大至4~5mm,有光泽、灰白色、具粘性。在Feeley-Garman培养基中培养3~5天可见针尖大小菌落，在紫外线照射下可发出黄色荧光。 （二）微生物学检验 触酶阳性，尿素酶阴性，液化明胶，不分解糖类，硝酸盐还原阴性，部分菌株氧化酶阳性，多数菌株产生β-内酰胺酶。在普通营养琼脂或血平板上不生长，在含有铁和半胱氨酸的CYE与F-G培养基上才能生长。军团菌属主要生物学特征见表6-7-60。 表6-7-60 军团菌属种间的主要生物学特性鉴别 菌 名 CYE琼脂荧光 血平板及普通平板上生长 F-G褐色素 β-内酰胺酶 明胶酶 氧化酶 马尿酸水解 嗜 肺 军 团 菌 暗黄 – + + + + + 米克戴德军团菌 暗黄 – – – - + - 长 滩 军 团 菌 暗黄 - + +/- + + - 华兹沃思军团菌 暗黄 - + + + +/- - 约 旦 军 团 菌 - - + + + + - 伯兹曼军团菌 淡兰 - + +/- + +/- - 杜莫夫军团菌 淡兰 - + + + - - 戈尔曼军团菌 淡兰 - + + + - - 阿尼斯军团菌 淡兰 - + + + - - 辛辛那提军团菌 - - + + + - - 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性 （三）临床意义 军团菌可引起军团军病，最主要是由嗜肺军团菌，为一种全身性疾病，可分为轻型和重症型。轻型类似流感，病人有发热、头痛、无力等症状，称为庞地亚克热（Pontiac fever）。重症型是以肺部感染为主的多器官损害，发病初起时有胸痛、咳嗽、发热等症状，最终导致呼吸衰竭死亡。军团菌亦是医院感染的病原菌之一，当患有慢性疾病的住院患者以及各种原因导致机体免疫功能低下的患者更易感染。 六、莫拉菌属 （一）生物学特性 新版伯杰手册按球菌和球杆菌将莫拉菌属分为布兰汉亚属和莫拉亚属，后者为革兰阴性球杆菌，有时可呈多形性，成双或短链状，无芽胞和鞭毛，但有些菌株有荚膜。需氧，多数菌在普通培养基上能生长，少数菌株需在培养基中加入兔血清才能生长，如缺陷莫拉菌不能在SS平板上生长。在血平板上生长成光滑的直径为0.1～0.5mm半透明菌落，48h后菌落直径可达1mm，不溶血。其特点是氧化酶和触酶阳性，不分解任何糖类，不产生吲哚，在65g/L Nacl肉汤中不生长。 （二）微生物学检验 标本接种血平板或含有血清的培养基分离培养。经24h培养可见针尖大小的菌落，结合染色镜检及生化反应进行鉴定。莫拉菌属的主要生物学特性见表6-7-61 （三）临床意义 本菌为条件致病菌，引起人类的感染有肺炎、脑脓肿或脑膜炎、心内膜炎、败血症、中耳炎、眼结膜炎等。 表6-7-61 莫拉菌属的主要生物学特性 试 验 缺陷莫 拉菌 非液化 莫拉菌 犬莫 拉菌 林肯莫 拉菌 奥斯陆 莫拉菌 亚特兰大 莫拉菌 苯丙酮酸 莫拉菌 动力 - - - - - - - 触酶 + + + + + + + 生长： 麦康凯培基 - - + - V + V 42℃ - V / - D V V 基础培养基醋酸盐 - - + / + V V 尿素酶 - - - - - - 苯丙氨酸脱氨酶 D - - / - - + 明胶液化 d - - - - - - 硝酸盐还原 + + + - V - V 氮气产生 - - V V - V - DNA酶 - - + - - - - 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性；D 表示数据分散；/ 表示无统计资料；V 表示不定；d 表示迟缓 第八节 小细菌 小细菌指的是一些无动力、无芽胞、菌体小的革兰阴性球杆菌，且对营养要求苛刻。主要有嗜血杆菌属、布鲁菌属、弗朗西斯菌属、鲍特菌属和巴斯德菌。 一、嗜血杆菌属 （一）生物学特性 嗜血杆菌属为一群无动力、无芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，营养要求较高，在培养基中必须加入新鲜血液（含有X和V因子）才能生长因而得名嗜血杆菌。属内许多流感嗜血杆菌株有荚膜，多见于b血清型，并有较强的毒力。 需氧或兼性厌氧，接种万古霉素巧克力琼脂，初次培养于5%～10%C02环境中生长良好。可见0.5～1mm小菌落，灰白色、圆形、光滑、半透明。流感嗜血杆菌荚膜株培养过夜后形成较大、粘稠的菌落，产生V因子的金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌同时培养时可见卫星现象。一般血平板上生长不良。 （二）微生物学检验 临床标本分离时，凡血琼脂上发育迟缓，经35℃ 24h培养，菌落仅针尖大小，氧化酶阳性，涂片为革兰阴性卵圆形或点状小杆菌，而普通琼脂不生长，首先考虑嗜血杆菌属。共性为需X或V因子，兼性厌氧或CO2有促进生长作用。葡萄糖为发酵型，硝酸盐还原试验阳性，无血液培养中不生长。 根据溶血和X、V因子等主要生物学特性的鉴别见表6-7-62。根据吲哚、尿素酶及鸟氨酸脱羧酶试验不同将流感嗜血杆菌分为8个生物型。见表6-7-63。 （3）​ 临床意义 流感嗜血杆菌为上呼吸道的正常菌群，有荚膜的b型株很少，可引起人急性咽炎、喉炎、气管炎、肺炎、中耳炎、脑膜炎、心包炎以及骨髓炎等。有荚膜的流感嗜血杆菌可引起全身性感染。无荚膜的菌株引起局部的上呼吸道邻近部位感染。 副流感嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、溶血性嗜血杆菌和副溶血性嗜血杆菌栖居人的上呼吸道，可引起呼吸道感染，心内膜炎、菌血症、败血症和脑脓肿等。 副嗜沫嗜血杆菌，可引起亚急性心内膜炎，也可从尿液及脓液中分离到本菌。 杜克嗜血杆菌，可引起软性下疳，有时与淋病奈瑟菌同时感染。 表6-7-62 嗜血杆菌属主要生物学特性 菌 名 生长因子 需 生 长 溶血性 氧化酶 触酶 吲哚 尿素 水 解 脱 羧 酶 硝酸盐还原 糖 发 酵 试 验 荚 膜 X因子 V因子 鸟氨酸 精氨酸 赖氨酸 葡萄糖 乳糖 木糖 甘露醇 蔗糖 果糖 山梨醇 流感嗜血杆菌 + + - - + + V V V - V + + - + - - - - +/- 副流感嗜血杆菌 - + - - + V - V V - V + + - - + + + - +/- 溶血嗜血杆菌 + + - + + + V + - - - + + - V - - V - - 副溶血嗜血杆菌 - + - + + V - + V - - + + - - - + + - - 嗜泡沫嗜血杆菌 + - + - - - - - - - - + + + - + + + - - 副嗜泡沫嗜血杆菌 - + + - + - - - - - - + + + - + + + - - 杜克氏嗜血杆菌 + - - V + - - - - - - + V - - - - - - - 埃及嗜血杆菌 + + - - + + - + - - - + + - - - - - - - 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性；V 表示不定 表6-7-63 流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌的生物型 菌 种 和 生 物 型 吲 哚 尿 素 酶 鸟氨酸脱羧酶 流感杆菌生物型 Ⅰ + + + Ⅱ + + – Ⅲ – + – Ⅳ – + + Ⅴ + – + Ⅵ – – + Ⅶ + – – Ⅷ – – – 副流感杆菌生物型 Ⅰ – – + Ⅱ – + + Ⅲ – + – Ⅳ + + + Ⅴ – – – Ⅵ + – + Ⅶ + + – Ⅷ + – – 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性 二、布鲁菌属 布鲁菌属通过DNA-DNA杂交研究证明只有牛布鲁菌一个种，其它为对人无感染生物变种。 （一）生物学特性 该菌为革兰阴性小球杆菌，无动力，无芽胞和荚膜。革兰染色复染经常着色不好，时间应适当延长，需要3min。需氧，牛布鲁菌在初分离时需5%~10% CO2，营养要求较高，初分离时的培养基中宜含硫胺，烟酸和生物素等。最适生长温度为35℃。在血平板上培养5~7天可形成微小，灰色，凸起的菌落，不溶血。除绵羊和犬布鲁菌菌落为粗糙型外，其它为光滑型，在液体培养基中可形成轻度混浊并有沉淀。 （二）微生物学检验 急性期感染血液培养阳性率较高，骨髓、尿液、关节液、乳汁、CSF等也能分离到布鲁菌。 能利用葡萄糖，但产酸量少，吲哚、甲基红、V-P试验呈阴性。不分解甘露醇，尿素酶阳性，硝酸盐还原试验阳性，产生H2S。其它生化反应见表6-7-64。 表6-7-64 布鲁菌属间的主要生物学特性 菌 种 触 酶 氧化酶 糖分解 精氨酸脱羧酶 硝酸盐还原 尿素酶 H2S 产生 对染料耐受 葡萄糖 半乳糖 阿拉伯糖 硫 堇 40μg 复红 20μg 羊布鲁菌 + + + – – – + V – + + 牛布鲁菌 + + + + + – + + + – + 猪布鲁菌 + + + + + + + + -/+ + – 森林鼠布鲁菌 + – + + + – + + + – – 绵羊布鲁菌 + – – – – – – – – + -/+ 犬布鲁菌 + + + – – + + + – + – 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；－/+表示多数菌株（90%以下）阴性，少数菌株阳性， V 表示不定 （三）临床意义 布鲁菌病为人畜共患病的病原菌。布鲁菌可以通过人的皮肤、呼吸道、消化道进入人体而感染。感染人群常和皮毛及食品加工工作有关，也有报道由于食用未经巴氏消毒的牛奶而感染。布鲁菌病通过空气传播比接触传播更为重要。进入机体后，先侵犯局部淋巴结，随后进入血液，出现菌血症，患者表现有畏寒、发热、全身无力等症状。然后细菌汇集入肝、脾、骨髓等器官，在细胞内寄生，这时血中细菌数逐渐减少，体温下降甚至恢复到正常。在组织细胞中的寄生菌生长繁殖到一定程度后，再次进入血流为菌血症，病人体温升高，称之为波浪热。可累及全身器官，也可引起睾丸炎、附睾炎、乳腺炎、输卵管炎等。有时病程持续数年，反复发作。 三、鲍特菌属 （一）生物学特性 鲍特菌属为革兰阴性小杆菌，无芽胞、有荚膜。陈旧培养物菌体可呈多形性。在液体培养基中菌体可呈短链状排列。除支气管败血鲍特菌和鸟鲍特菌外，其它菌无鞭毛。 本属细菌为专性需氧菌，最适培养温度为35℃。百日咳鲍特菌营养要求最高，常用培养基为鲍-金（Bordet-Gengou）培养基，此培养基中含有血液、马铃薯及甘油等。在生长过程中产生大量的脂肪酸、重金属离子、过氧化物等影响此菌的生长，活性炭、树脂、淀粉等可以吸附脂肪酸或使抑制物失去活性而有利于细菌的生长。在Regan-Lowe培养基（即活性炭~马血琼脂）上35℃培养3~5天才能检出菌落。百日咳鲍特菌在培养时不需CO2。 （二）微生物学检验 本菌在鲍-金培养基上经2~3天培养后，可形成细小、光滑、凸起，灰色的不透明露滴状菌落，菌落周围有狭窄的溶血环。菌落经多次传代后变为粗糙型。在含有血液的液体培养基中呈均匀混浊生长，管底有少量沉淀。 百日咳鲍特菌不发酵糖类，不产生H2S，吲哚试验，明胶液化试验，硝酸盐还原试验和枸椽酸盐利用试验阴性。其它主要生物学特性见表6-7-65。 表6-7-65 鲍特菌属的主要生物学特性 试 验 百日咳鲍特菌 副百日咳鲍特菌 支气管败血鲍特菌 鸟鲍特菌 触酶 +/– + + + 氧化酶 + – + + 动力 – – + + 硝酸盐还原 – – + – 尿素酶 – + + – 生长： Regan-Lowe琼脂 3~6d 2~3d 1~2d 1~2d 血琼脂 – + + + 麦康凯琼脂 – ± + + SS琼脂 – – + + 蛋白胨琼脂生长 – + + ± 棕色色素 - + – – 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性；± 表示生长不良 （三）临床意义 百日咳鲍特菌是百日咳的病原菌。近30年来红霉素对百日咳鲍特菌的最低抑菌浓度一直未见升高。红霉素仍被选作治疗和预防用药。其它可选用氨苄西林、阿莫西林、利福平或复方新诺明等抗菌药物。 四、巴斯德菌属 （一）生物学特性 巴斯德菌属为革兰阴性球杆菌，菌体长1～2μm，无动力，无芽胞，有些菌株有荚膜。兼性厌氧菌，最适生长温度35℃，在含有血液的培养基上生长良好。能分解蔗糖，不液化明胶，甲基红和V-P试验均为阴性。氧化酶和触酶阳性，硝酸盐还原试验阳性。 （二）微生物学检验 临床血液标本先行增菌后分离培养。痰及脓液、脑脊液直接接种血平板或巧克力平板，并同时作标本直接涂片染色镜检，发现革兰阴性球杆菌有助于本菌诊断，进一步鉴定可参考表6-7-66。 表6-7-66 巴斯德菌属和放线杆菌属主要生物学特性鉴别 试 验 产气巴斯德菌 犬巴斯德菌 溶血巴斯德菌 多杀巴斯德菌 嗜肺巴斯德菌 P.dogmatis P.trehalosi P.volantium P.bettyae 口腔巴斯德菌 马放线杆菌 人放线杆菌 猪 放 线 杆 菌 脲 放 线 杆 菌 L-阿拉伯糖 +/- – + V -/+ – – – – – -/+ – +/- – 纤维二糖 – – – – – – V / – – – – + – D-半乳糖 + + + + + + – / – + V + +/- – 乳糖 -/+ – V – V – – V – – + + + – 麦芽糖 + – + -/+ V + + + V – + + + +/- D-甘露糖 + + -/+ + + + + / V + + – + V 鼠李糖 V – V – V +w – / – – + + + – D-海藻糖 – V – V +/- + + + – + + + + – D-木糖 + -/+ + d V – – V – – + + + – 触 酶 + + + + + + – + V + V – + V 七叶苷水解 – – V – – – V / – – – V + – 麦康凯生长 + – + V V – + – V – + – + V 吲哚 -/+ V – +/- + + – – – +w – – – – 需要NAD – – – – – – – + – – – – – – 氧化酶 V + + + + + + + – + +/- + +/- +/- 尿素酶 + – – – + + – – – – + + + + 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/— 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性；－/+表示多数菌株（90%以下）阴性，少数菌株阳性；V 表示不定；/ 表示未进行试验；w 表示弱反应 （三）临床意义 巴斯德菌属和放线杆菌属均为动物感染性疾病的病原菌，当人被动物咬伤或抓伤时，可通过接触感染病原菌，畜牧业人 员及兽医等常可被感染。可引起肺部感染、脑膜炎、脑脓肿、腹膜炎、关节炎及伤口感染等。 五、弗郎西斯菌属 （一）生物学特性 弗朗西斯菌属只有一个种，即土拉弗朗西斯菌，是引起土拉热的病原菌，本菌能引起一些野生动物感染，常见于野兔中，又称野兔热杆菌病。人感染常因接触病兽所引起 。 土拉弗郎西斯菌为球杆状小杆菌，有时呈多形性的革兰阴性杆菌。大小为0.20μm×0.2μm～0.7μm，无芽胞和动力，在动物组织中有荚膜。 本菌为需氧菌，在普通培养基上不生长，常用卵黄培养基或胱氨酸血琼脂培养基，最适温度35℃。在卵黄培养基上培养24h~48h可长出1mm~1.5mm菌落，呈圆形、光滑灰白色。对碳水化合物及醇类发酵能力很弱。可分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气。本菌可产生少量H2S气体，能分解尿素，不产生吲哚。 本菌对热敏感，56℃ 5～10min即死亡；对低温有较强的耐受力，在20℃~25℃水中可存活1～2个月。 （1）​ 微生物学检验 临床采集患者血液、淋巴结穿刺液等标本、应立即接种培养，如不能直接分离培养，可将标本放于10℃以下的环境中。 此外，野生动物、家畜或尸体、污染的食品或水均可作检查材料，进行显微镜检查及分离培养。只有标本含有大量细菌时，才能获得阳性结果，一般标本均不适合直接镜检。 用培养物制备涂片时可先制成3%甲醛盐水菌悬液，干燥后用3%盐酸酒精固定5min，干燥后染色。 本菌的分离培养阳性率不高，皮肤溃疡物和穿刺液培养成功率也很低。标本可接种于卵黄培养基或Francis培养基，同时也接种于普通平板。当普通培养基不生长，而在卵黄培养基上生长，可结合镜检和反相血凝试验就可判定是否为土拉弗朗西斯菌。 本菌的生化反应对鉴定无意义，如上述不能确定时,可作动物试验确定之。方法是将穿刺液、脓液等标本混匀于1ml肉汤中，取0.2～0.4ml注射小白鼠的腹腔及皮下，一般注射两只小白鼠，通常在10天内死亡（1～2天死亡多为其它细菌感染所致死）。小白鼠死亡后立即在无菌条件下进行解剖，取心、肝、脾直接接种在卵黄培养基中，并用印片镜检，通常发现大量的土拉弗朗西斯菌。 （三）临床意义 人类感染土拉弗朗西斯菌的传播途径很多，可因动物咬伤，食入污染食品而感染，亦可经空气传播引起呼吸道感染。潜伏期一般为3～5天，临床表现多样性，发病急，高热伴有剧烈头痛，肌肉、关节酸痛及食欲不振等全身症状。除肺型外，一般预后良好。 （朱百荣写 夏晓华审） 第九节 厌氧菌 一、概述 厌氧菌是一大类对氧敏感，只能在厌氧条件下生长繁殖和生存的细菌。因此，在人工培养厌氧菌时，必须要有一个无氧环境，否则厌氧菌既不能生长，也不能生存。以往人们对厌氧菌认识不足，只局限于破伤风芽胞梭菌、产气荚膜芽胞梭菌和肉毒芽胞梭菌等厌氧芽胞杆菌。近年来，由于人体正常菌群中厌氧菌引起的感染日益增多，以及厌氧培养技术和检测技术的进步，临床细菌检验中不仅能将有芽胞的厌氧菌分离出来，而且对过去许多难以分离培养的无芽胞厌氧菌，也能不断从临床标本中分离出来，使厌氧菌检出率逐渐提高。 厌氧菌所致感染可遍及临床各科和人体各部位，因此，为了提高对厌氧菌感染的诊断与治疗水平，开展并做好各种厌氧菌的检测工作，具有重要临床价值。 (一)厌氧菌感染的临床及细菌学指征 1．分泌物发出恶臭。 2．感染的病变组织内含有气体，如产气荚膜梭菌引起的感染，感染局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音。 3．感染部位发生在粘膜附近，口腔、鼻咽腔、肠道、阴道等粘膜，均有大量厌氧菌寄生，这些部位及附近有损伤，极易发生厌氧菌感染。 4．外伤及枪伤的闭锁性深部感染，或人、动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。 5．感染组织的分泌物或脓汁中有硫磺样颗粒，可能为放线菌感染。 6．感染组织脓性分泌物呈暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，可能有产黑色素普雷沃菌或不解糖卟啉单胞菌感染。 7．常规血培养阴性的细菌性心内膜炎。 8．近期有胃肠道和女性生殖器官手术后发生的感染。 9．分泌物直接涂片革兰染色，镜检有细菌，而常规培养阴性者。 10．普通培养阴性，而在液体及半固体培养基深部长有细菌，可能有厌氧菌。 (二)厌氧菌在自然界和正常人体中的分布 厌氧菌种类繁多，已发现的厌氧菌有30多个属，计200余种，厌氧菌分布广泛，存在于土壤、沼泽、湖泊、海洋、河流的沉渣、污水、食物及人和动物体内，如正常人的肠道、口腔、阴道、尿道、上呼吸道和皮肤等处均有大量厌氧菌寄居。它们与需氧菌一起共同组成人体的正常菌群。 人体各部位存在的厌氧菌种类并不一样。如皮肤主要是丙酸杆菌属菌；口腔中主要是产黑色素普雷沃菌、拟杆菌、梭杆菌、消化球菌和消化链球菌，其次也存在放线菌、双歧杆菌、真杆菌和乳酸杆菌等；肠道内主要有脆弱拟杆菌、消化球菌、消化链球菌、双歧杆菌、梭状芽胞杆菌和乳酸杆菌等；阴道内主要是乳酸杆菌、双歧杆菌，其次也存在拟杆菌、丙酸杆菌、消化链球菌和消化球菌等。 在人体寄居的厌氧菌的数量比需氧菌大得多，厌氧菌与需氧菌之比， 在大肠中是1 000～10 000∶1，阴道内为10～100∶1，口腔中为10∶1，因此，必须对厌氧菌予以重视。 在正常情况下，寄居在人体内的正常厌氧菌群对人是无害的，与人体保持平衡状态。厌氧菌代谢产生的乙酸、乳酸等能抑制病原菌生长。如长期大量使用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等，在发生菌群失调或机体免疫力下降或细菌进入非正常寄居部位，此时厌氧菌即可作为条件致病菌导致内源性感染。 (三)厌氧菌检验方法 1．直接检查 取各种送检标本(血液除外)涂片，行革兰染色，镜检，观察细菌形态与染色性。通过显微镜下检查，肉眼观察标本性状，气味，并结合标本来源，可以对标本中可能有的细菌作出估计，便于选择培养基和做进一步检查。标本发出腐臭味，镜检发现染色不均，形态奇特者常为有厌氧菌的表现。脆弱拟杆菌在染色标本中常表现为长短不一，两端钝圆着色深，中间着色浅，不均匀，且有空泡的革兰阴性杆菌；菌体细长、两端尖、呈梭形的革兰阴性杆菌，有时有紫色颗粒沿菌体长轴排列，菌体尖端相对，成对排列，并有丁酸臭味者，常为核梭杆菌；菌体长短不一，高度多形性，中部肿胀或呈圆球者，可能是坏死梭杆菌或死亡梭杆菌；标本有琥珀酸味，发恶臭，在紫外光照射下发砖红色荧光，涂片染色镜检见有革兰阴性球杆菌，间或有长短不一的多形性，可能为产黑色素普雷沃菌；涂片中发现极小的革兰阴性球菌者，可能是韦荣球菌；在脓汁中发现硫磺颗粒，菌体分枝，呈网状、X、Y、V或栅状排列，有琥珀酸气味者，大多是放线菌；有醋酸气味的革兰阴性杆菌可能是双歧杆菌；涂片染色呈革兰阳性无芽胞杆菌，有乳酸气味者，可能是乳酸杆菌；涂片染色见有革兰阳性芽胞杆菌，则可能为梭状芽胞杆菌属菌。 2．分离培养 （1）培养基的选择 1）强化血琼脂平板(BAP)，是一种非选择性培养基几乎能培养出所有的厌氧菌。 2）七叶苷胆汁琼脂平板(BBE)，耐胆汁的脆弱拟杆菌群细菌与变形和死亡梭杆菌可在其上生长，菌落较大，水解七叶苷，可在菌落周围形成棕黑色的晕(部分普通拟杆菌和变形梭杆菌除外)。 3）卡那霉素-万古霉素冻溶血琼脂平板(KVLB)，可抑制大多数兼性厌氧菌生长，绝大多数拟杆菌属和普雷沃菌属菌在此培养基上生长良好，梭杆菌和厌氧球菌不能生长。不解糖卟啉单胞菌和牙龈卟啉单胞菌也不能生长。本培养基是分离头颈部、口腔、上呼吸道常见的产黑色素普雷沃菌常用的选择性培养基。所加血液以兔血效果最好。 4）卵黄平板(EYA)和兔血平板，用于选择分离产气荚膜芽胞梭菌。该菌在兔血琼脂平板上，有双溶血环，内环是与菌落一样大小的透明环，外环是宽的α溶血区，在室温中放30min，可见菌落变绿色或褐色，同时可接种卵黄平板，以进行卵磷脂酶试验及聂格尔试验来鉴定产气荚膜芽胞梭菌。 5）其它选择培养基，如苯乙醇血琼脂平板，可以抑制变形杆菌和其它肠道杆菌，有利于厌氧菌生长。用乳酸钠培养基选择韦荣球菌；改良FM培养基选择梭杆菌；CCFA培养基选择艰难梭菌等。 6）液体培养基，有庖肉培养基、硫乙醇酸钠肉汤等。庖肉培养基可用于所有厌氧菌的培养，特别适用于梭状芽胞杆菌的增菌培养。硫乙醇酸钠肉汤培养基最适用于缓慢生长的放线菌和丙酸丙酸杆菌的培养。 以上培养基在接种标本前必须处于无氧状态，各种琼脂平板要求当天配制或放在充以CO2的容器内，置4℃冰箱保存，1～2天内用完。培养基使用前24h必须置于无氧环境，使其预还原或使用预还原灭菌法制作的培养基。使用液体培养，用前煮沸10min，驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种。 （2）标本的接种 用无菌注射器抽取标本，在选择性培养基和血琼脂平板上各接种2～3滴，分区划线。液体培养基需接种1～2ml标本到培养基的底部。接种后立即放入厌氧装置中进行培养。按需要可同时培养需氧菌、兼性厌氧菌和微需氧菌，接种至血平板，分别置于有氧、含5%～10% CO2和厌氧环境培养。因为兼性厌氧菌对灭滴灵不敏感，为了便于在混合培养物中发现厌氧菌，一般将标本分3区划线接种于平板上，在第1，2区交界处，贴1张含5μg/片的灭滴灵纸片。如纸片周围出现抑菌圈，表明有厌氧菌存在。对于组织或其它固体标本，可在厌氧手套箱内研磨碎标本，无条件者，在处理标本时应尽快处理标本。用１ml硫乙醇酸钠肉汤或其它液体培养基与标本混匀，然后用于接种。 （3）厌氧培养方法 厌氧培养法有多种多样，但都必须降低氧化还原电势而构成无氧环境。常用方法有厌氧罐法、气袋法、转管法、厌氧手套箱培养法。前两种方法比较简便，不需特殊设备，适用于小型实验室。后两种方法设备较为复杂昂贵，但效果较佳。有学者作过比较认为厌氧袋系统培养厌氧菌的检出率(95%)与厌氧箱法(99%)相近，因此在小型实验室进行单个标本培养，厌氧袋系统可以代替厌氧箱法用于培养厌氧菌。 其它尚有一些不需特殊设备，并能在有氧环境中进行培养的更为简单的方法。如平皿焦性没食子酸法、生物耗氧法、高层琼脂培养法等。初代培养在35℃至少培养48h，如疑似放线菌应延长至72h～96h。 3．鉴定 可根据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定，最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物检查。 菌落性状主要包括菌落形态、色素产生、溶血、在紫外线下检查发出的荧光等。抗菌药物敏感性诊断试验有卡那霉素、万古霉素、灭滴灵和粘菌素等。聚茴香脑磺酸钠(SPS)敏感试验可用于厌氧消化链球菌与其它革兰阳性球菌的区别，前者对50g/L的SPS溶液敏感，而后者耐药。 生化反应主要包括多种糖、醇类发酵试验，硫化氢和吲哚产生，硝酸盐还原、七叶苷、触酶、卵磷脂酶、脂肪酶、蛋白溶解、明胶液化、胆汁肉汤生长等试验。 终末代谢产物检查，使用气液相色谱分析仪，分析待检菌在PYG(蛋白胨-酵母浸膏-葡萄糖)或CMC(庖肉、碳水代合物)肉汤培养基中，代谢产生终产物挥发性脂肪酸(VFA)、非挥发性脂肪酸(NVFA)和醇类等，来鉴定厌氧菌种类。 二、厌氧革兰阳性球菌 (一) 生物学特性 革兰阳性球菌，圆形或卵圆形，成堆或成双，长短链。生长温度25℃～38℃，最适生长温度35℃～37℃。生长比较缓慢，往往需要48 h孵育后，才能形成肉眼可见的菌落。营养要求高，新鲜脑、心浸汁，血消化汤，吐温-80可促进生长。24h~48h菌落光滑、凸起细小，粗糙型菌落可呈车轮状，较大，一般不溶血，液体培养基中呈絮状或沉淀生长，但不混浊。分解碳水化合物产酸或产气。酸产物主要有乙酸、甲酸、丙酸、丁酸、异丁酸、乳酸等，但产量很少。生化特性见表6-7-67。 表6-7-67 消化球菌和消化链球菌生化特性 菌 种 葡 萄 糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖 纤二糖 硝 酸 盐 吲哚 尿 素 七叶苷 明胶 凝固酶 触酶 在PYG中生长产生的脂肪酸* 黑色消化球菌 － － － － － － － － － － － + B，C，iv，a 厌氧消化链球菌 +w － + － － － － － － － － － A，IC，ib，b，iv 大消化链球菌 － － － － － － － － － V － － A，(l)，(s) 微小消化链球菌 － － － － － － － － － － － － A，(l)，(s) 不解糖消化链球菌 － － － － － － V － － － － + A，B，(l)，(p)，(s) 产吲哚消化链球菌 － － － － － + + － － － + － A，B，P，(l)，(s) 普氏消化链球菌 +w － +w － － -/+ － -/+ － － － V B，C，iv，a 四联消化链球菌 + － + + － － － + － － － V B，L，(a)，(p) 产生消化链球菌 + + + + + － － － + － － － A，(l)，(s) 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；－/+ 表示多数菌株（90%以下）阴性，少数菌株阳性；V 表示不定；+w表示弱阳性；脂肪酸缩写中，大写字母表示主要代谢产物，小写字母表示次要代谢产物，圆括号内表示可变反应；A：乙酸；B:丁酸；IB:异丁酸；C：己酸；IC:异己酸；L:乳酸；P：丙酸；S：琥珀酸；IV：异戊酸；V：戊酸；*：PYG=蛋白胨-酵母浸膏-葡萄糖 (二)微生物学检验 黑色消化球菌在血平板上可形成灰褐色或黑色菌落。涂片染色显微镜下可见成堆排列，触酶阳性。消化链球菌属菌落灰白或微黄色，细小、边缘整齐、圆形、光滑、凸起、不透明、不溶血。本菌对多聚茴香磺酸钠(SPS)特别敏感，用纸片法测定，抑菌圈直径大于12mm，可快速鉴定本菌。大消化链球菌和微小消化链球菌生化反应相似，可借形态来区分，前者菌体大，后者小。消化球菌和消化链球菌生化特性见表6-7-67。 三、厌氧革兰阴性球菌 (一)生物学特性 韦荣球菌属(Veillonella)为革兰阴性球菌，细小韦荣球菌，直径0.3μm～0.5μm，成双、成簇或短链，菌落细小、圆形整齐、浅黄或粉红，不溶血。初次分离时可能为革兰阳性，过夜后即变为阴性。新鲜培养物置紫外线下照射，菌落发红色荧光，接触空气后荧光消失。无动力，专性厌氧，最适生长温度30℃～37℃，氧化酶阴性，触酶大多为阴性。不分解糖类，还原硝酸盐。 (二)鉴定 临床标本中主要为细小韦荣球菌，由于韦荣球菌属内各菌种的生化反应基本一致，故无法利用生化反应试验将各个种鉴别。常规工作中，分离出韦荣球菌，常报告其代表性菌种或报告菌属便可。细小韦荣球菌与其相关菌的鉴别见表6-7-68。 表6-7-68 细小韦荣球菌与其相关菌的鉴别 菌 种 硝酸盐 触酶 葡萄糖发酵 菌体大小(μm) 细小韦荣球菌 + －/+ － 0.3～0.5 发酵氨基酸球菌 － － － 0.6～1.0 埃氏巨球菌 － － + 1.2～1.9 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；-/+ 表示多数菌株（90%以下）阴性，少数菌株阳性 四、厌氧革兰阳性芽胞杆菌 (一) 生物学特性 本属细菌是一群革兰阳性、厌氧或微需氧的粗大芽胞杆菌。但有些菌种，如多枝芽胞梭菌和梭形芽胞梭菌经过夜培养后往往为革兰阴性。芽胞圆形或椭圆形，直径大于菌体，位于菌体中央、次极端或顶端。多数菌具周鞭毛，部分菌种产生脂酶 ，卵磷脂酶，而触酶阴性。属内各菌在代谢上存在明显差异，对糖、蛋白、脂类分解各不相同。某些菌种能产生外毒素，可引起严重疾病。 (二)鉴定 首先确定待检菌有无芽胞和芽胞的位置，在鉴定上十分重要，一般在疱肉培养基中培养2天，才能产生芽胞，但某些菌种要在室温孵育5~7天。经芽胞染色仍不见芽胞者，可采用加温试验证实，于70℃水浴10min后，移入疱肉培养基中仍能生长，提示该菌确有芽胞存在。破伤风芽胞梭菌鉴定要点：幼稚细菌呈细丝状，在血平板上呈迁徙性生长，可被特异性抗毒素所抑制，涂片示多形性，芽胞位于菌体末端，使细菌呈鼓槌状。不分解糖和蛋白质，明胶酶阳性。 产气荚膜芽胞梭菌鉴定要点：革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽胞位于次极端，血平板上菌落有双溶血环，在牛乳培养基中产生汹涌发酵现象，卵磷脂酶阳性。 肉毒芽胞梭菌鉴定要点：革兰阳性粗大杆菌，芽胞位于菌体次极端，使菌体呈网球拍状，血平板上菌落发丝状，疱肉培养基表面有乳油状浮渣，脂肪酶阳性。难辨芽胞梭菌鉴定要点：革兰阳性粗长杆菌，芽胞位于菌体次极端。不凝固牛乳，发酵葡萄糖和果糖，水解七叶灵和液化明胶，不发酵乳糖、麦芽糖和蔗糖，不产生吲哚。 常见芽胞梭菌的生物学特性见表6-7-69。 表6-7-69 常见芽胞梭菌的生物学特性与鉴别 菌 种 芽 胞 卵 磷 脂 酶 脂 酶 明 胶 牛 乳 吲 哚 葡 萄 糖 乳 糖 麦 芽 糖 蔗 糖 甘 露 醇 水杨素 产气荚膜芽胞梭菌 OS + － + + － + + + + － V 肉毒芽胞梭菌 OS － + + + － + － + － － V 双酶芽胞梭菌 OS + － + + － + － + － － V 丁酸芽胞梭菌 OS － － － － － + + + + － + 尸毒芽胞梭菌 OT － － V － + + － － － － － 肖氏芽胞梭菌 OS － － +/－ － － + + + + － － 梭形芽胞梭菌 OS － － － － －/+ + V + + － V 难辨芽胞梭菌 OS － － V － － + － － － + V 溶组织芽胞梭菌 OS － － + + － － － － － － － 无害芽胞梭菌 OT － － － － － + － － V + + 泥渣芽胞梭菌 OS + － + + － － － － － － － 诺氏芽胞梭菌 OS + +/－ + －/+ － + － V － － － 副产气芽胞梭菌 OT － － － － － + + + + － + 多枝芽胞梭菌 R/ OT － － － － － + + + + V + 败毒芽胞梭菌 OS － － + － － + + + + － + 索氏芽胞梭菌 OS +/－ － + + + + + － － － 楔形芽胞梭菌 RS/ T － － －/+ － +/－ + V + +/－ + + 产芽胞芽胞梭菌 OS － + + + － + － + － － V 次端芽胞梭菌 OS － － + + － － － － － － － 第三芽胞梭菌 OT － － － － － + + + + + + 破伤风芽胞梭菌 RT － － + － V － － － － － － 注：+ 表示90%以上的菌株阳性；－ 表示90%以上的菌株阴性；+/－ 表示多数菌株(90%以下)阳性，少数菌株阴性；－/+表示多数菌株（90%以下）阴性，少数菌株阳性；V 表示不定；O 表示为卵圆形；R 表示为圆形；S 表示为次端；T表示为极端 1、​  五、 厌氧革兰阳性无芽胞杆菌 (一)生物学特性 本菌群共同的特点为革兰阳性，菌体类似白喉杆菌，两端可粗大，排列不规则，多呈X、Y、人、卅等形状，大小、长短不等，有的出现分枝或分叉状，尤其在含糖的PY培养液内，多形性更明显。除乳杆菌属、蛛网菌、放线菌属的某些种能在微氧或普通环境生长外，其余多为严格厌氧菌。pH6.5～7.8生长良好，但乳杆菌最适pH5.5左右，甚至pH3.0亦能生长。本群各菌生化反应不一，多数发酵葡萄糖，触酶、吲哚阴性。 (二)鉴定 本群中放线菌属、丙酸杆菌属和真杆菌属是最常检出的菌属，以痤疮丙酸杆菌在临床标本中最多见，其次为衣氏放线菌、迟缓真杆菌等。在染色形态上要特别注意与需氧的李斯特菌、奴卡菌、棒状杆菌及分枝杆菌属鉴别。本群细菌用常规方法鉴别相对较难，有些菌株需要借助气液相色谱分析仪，分析糖代谢终产物来鉴别。各属间生物学特性见表6-7