桑白皮药材质量控制研究

Study on the Process of Inclusion Volatile OiI of Herba Schizonepetae with IS-cyclodextrin from Xiao’er Ganmaoshu Granule ZH A()Kai-jun．PIf Cun—hai．GUAN Zhi—yu (Najing Zhongshan Pharmaceutical Factory，Najing 210012，China) Abstact Objective： ro study optimum inclusion【JrI)ecss conditi()ll fol’volatile oil with 3-eyeh)dextrio(p·CD)．Methods：The optimum preparation condition were investigated 1)y orthogonal(1esign．The inlluenee 0f．utlllzalhm 3-CD aflIt oil．inclusion temperature and time were studied to determin the utilization ratio of volatile oil and oil—beat ing rate． Resuhs：．rhe optimum prcpm。atioo conditions were es+ tablished as：volatile oil：3-CD was 1：10，the inclusion temperatmc WHS 60 and inclusion time was 3h．Conclusion：The method is convenient and can be used fm。nl~tSS production。 Key words Volatile oil of tterba Schizonepelae；B—eyelodextrin inclusion complex；Orthogonal design 桑白皮药材质量控制研究 徐世义，张国刚，张洪霞 (沈阳药科大学，辽宁沈阳 1】0016) 摘要 同的：研究桑白皮药材质鞋控制 。法 法：用紫外分光光度法测 量总~／-酮的含量。结果：回收毕为 98．20％，相对偏差为 2．1％，相关系数为0．9999。该法洲定桑自皮中总黄酬的禽毓，操作简便、结果稳定 、重复 性好，可作为质量检验的一个定量方法。 关键词 桑白皮；总黄酬；含晕测定 中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：10014454【2006)02 0l84—03 桑白皮是桑科桑属植物 Morus elba L 的干燥 根皮，有泻肺平喘、利水消肿之功效。民间常用于消 炎、利尿、解热、镇咳、祛痰等。现代药理试验表明： 桑白皮具有抗 HIV活性，抗呼吸道病毒、降压、抗肿 瘤等多种的药理作用⋯。常 的桑属植物有桑、华 桑、鸡桑 、蒙桑 、黑桑等，其枝、叶、根等均可入药。桑 属植物的化学成分多类似，主要含有黄酮类化合物， 包括桑酮、桑酮醇、桑根酮、桑根酮醇、桑素、桑皮根 素等 。2005年药典中桑白皮药材没有确切的含 量控制方法，经文献检索也未发现有这方面的报道。 因此，为有效地开发和充分利用桑白皮药材，同时也 为能控制桑白皮药材及含有桑白皮药材制剂的质 量，有必要对桑白皮的质阜控制方法进行研究。由 于桑白皮含有较多的黄酮类化合物，同时此类化合 物也是有效成分，因此，本文对桑白皮中总黄酮类成 分的含量测定方法进行了系统研究。试验表明该方 法控制桑白皮药材及制剂的质量较快速、简单、方 便、易行。 1 材料与仪器 桑酮 G对照品，自制。经熔点测定，TLC、 H． NMR、 ’C—NMR 、MS和 HPLC检查，均为单一组分。 HPI (：归一化法测定纯度为 99．7l％，符合定量要 求。粟白皮药材购自沈阳博康大药房，经罄定为桑 科桑属植物Morus alba L．的干燥根皮。uV一2000紫 外町见分光光度计(尤 三^柯(上海)有限公司)；1／10 万电子天平(日本岛津公司)；超声振荡仪(中 航 匕院七二六所超声仪器厂)。 2 试验条件与方法的建立 2。1 对照品的选择 很多文献报道中药制剂中总 黄酮的含量测定多数采用芦丁作为对照品。采用芦 丁作为埘照品解决了部分中药或中药制剂中本身缺 少黄酮对照品的问题，在没有合适的对照品情况下 也不失一种测量总黄酮的可行的方法。桑色醇是桑 白皮中含量较高的黄酮类化合物，抗病毒筛选试验 汪明其具有较强的抗流感 、副流感、呼吸道合胞病毒 的和腺病毒作用。因此，用桑白皮中含量较高且具 有抗病毒作用的々属件活性成分作为对照品来测定 桑自皮总黄酮的含量更加有意义。 2．2 最大吸收波长的选择 NAN()，一A1(NO ) 一 NaOH比色法 测定总黄酮的原理是黄酮母核所含 有的游离羟荩在 NaNO，-A1(NO ) 存在的条件下与 金属铝离子形成络合物而显色，在波长500 nm左右 基金项目：国务院第三十 批博士后科学基金项 目(编号：2003033282)；ir宁省科技J丁博士科研启动基金项目(编号：20031034) 作者简介：徐世义(1962一)，男(满族)，沈阳市人，削教授，主要从事药用植物1=1l中药鉴定研究 ‘ 1 84‘ 孬 甭 丽)6年2月 维普资讯 http://www.cqvip.com 有最大吸收。另有文献报道，芦丁等黄酮类化合物 与NAN()!、A1(NO3)3、NaOH试剂反应产生红色物 质，其反应原理是发生 B环的3’、4’一邻二酚羟基部 位 本实验中所，}}j的对照品是从桑白皮中分离得到 的一个黄酮类化合物桑色醇做为对照品来进行桑白 皮总黄酮的含量测定 该化合物 B环的3’、4’一无 邻二酚羟基，且该化合物溶液在加入上述三种 色 剂后并不呈现红色。因此将桑色醇溶液及桑白皮总 黄酮提取液显色后在 200～600 nlll处用可见一紫外 分光光度计扫描。 显色后的桑色醇对照品溶液和桑白皮总黄酮提 取液均在 248 nm处有最大吸收。网此，测定波长选 择248 nnl。 2．3 显色剂 NaNO 、Al(NO ) 、NaOH用量的考察 中国药典2000年版槐花项下以芦丁为对照品，采 用 NaNO 一A1(NO3)3一NaOH 显色法进行禽量测定 时，当芦丁的最大用量为 1．2 mg时，各显色剂的用 量为：0．7 mol／I 的 NaNO2 l ml、0．5 ml／L的 A1 (NO ) 1 nl1、1 mol／L的 NaOH 10 nl1。而在本实验 中，显色后的桑色醇对照品溶液和卒白溶液在 248 nnl处的吸收较大，为了减小试验误差，可考虑减少 各显色剂的用量。现配制 0．07 mol／L的 NaNO2、 0．05 mol／L的 A1(NO ) 、0．1 mol／I 的 NaOH及 0．033 mg／ml的桑色醇对照品甲醇溶液，对各显色 剂的用量加以考察。 精密吸取 0．033 rag／ml的桑色醇对照品甲醇溶 液3 n 1置于 25 m1量瓶巾，分别加入不同用量的 NaNO 、A1(NO ) 、NaOH后，照紫外分光光度法在 248 nll[1处测定其吸收度。经预试，考察时三种显色 剂用量选择按倍数递增为原则进行考察。考察结果 见表 1。 表1 各种显色剂用量考察试验结果 显色利用带(m1) NaNO2 A1(NOj)3 Na()I{ I慢收度 0．07 ll10I／I )(0．05 mo]／L)(0．1 nll~l，I．) (A) ()．25 ()．5 l 1．5 0．25 0．5 l 1．5 2．5 0．305 5 0．572 l0 0．867 15 0．864 结果表明：当各显色剂的用量为：0．07 mol／I 的 NaNO，1 ml、0．05 mol／L 的 Al(NO1)1 1 ml、0．1 mol／ L的NaOH 10 ml时，吸收度居中，适合测定。 3 方法与结果 3．1 对照品溶液的制备 精密称取40℃真空恒温 干燥至恒重的桑色醇对照 3．3 mg，置于 100 ml量瓶 中药材第 29卷第 2期 2(X)6年2月 中，加甲醇 70 ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲 醇置刻度，摇匀，作为对照品溶液(每毫升含桑色醇 0．033 mg)。 3．2 标准曲线的制备 精密称取对照品溶液0．0、 0．5、1．0、2．0、2．5、3．0 ml，分别置于 25 m1量瓶中， 各加甲醇至 3 ml，加 0．07 mol／L的 NaNO，1 ml，摇 匀，放置6 rain，加0．05 mol／L的 A1(NO ) 1 ml，摇 匀，放置6 rain，加0．1 tool／[ 的NaOH l0 ml，加水至 刻度，摇匀，放置 15 rain，照紫外分光光度法(中国 药典 2000年版一部附录 VB)，在波K 248 nnl处测 定吸收度，重复操作 3次，结果见表2。 表2 标准曲线考察 其回归方程为：C=(46．28A一0．34)×10 ，r = 0．9999。 3 3 提取条件的选择 3．3．1 索氏提取法 ：精密称取桑白皮粗粉 1 g，置 索氏提取器中，加甲醇 50 n 1，回流提取 6 h，提取液 浓缩 ，滤过，定容于 100 ml量瓶巾，摇匀，精密吸取6 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为 供试品溶液(每毫升含桑白皮 1．2 mg)。 3．3 2 回流提取法：精密称取桑白皮粗粉 1 g，置 100 ml圆底烧瓶中，加甲醇 50 ml，水浴回流提取 3 次，每次3 h，滤过，合并提取液、浓缩并定容于 1O0 ml量瓶中，摇匀，精密吸取6 ml，置50 m1量瓶中，加 甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(每毫升含 桑白皮 1．2 mg)。 3．3．3 超声提取法：精密称取桑白皮粗粉 1 g，置 100 ml圆底烧瓶【f1，加甲醇 50 ml，分别超声提取 3 次，每次 30 rain，滤过，合并提取液、浓缩并定溶于 lO0 ml量瓶中，摇匀，精密吸取 6 ml，置50 ml量瓶 中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(每 毫升含桑白皮 1．2 rng) 分别精密吸取 述三种供试品溶液2 ml，置于 25 m1量瓶 中，按标准 曲线项下 “加 甲醇至 3 ml ⋯ ⋯ ”起，依法操作，测定各供试品溶液的吸收度， 结果见表3。 · l R · 口Ⅲ 9 9 9 9 概 一㈣㈣哪㈣ 维普资讯 http://www.cqvip.com 表3 不同提取方法对桑白皮总黄酮含量的影响 提取方法 索氏提取法 同流提取法 超声提取法 A 0．583 ()．562 ()．594 结果表明：超声提取法Ⅱ及收度值最大， 超声提 取法的方法更方便、简单、快速。因此，选择超声法 提取桑白皮总黄酮。 3．4 供试品溶液的制备 精密称取桑白皮粗粉 1 g，置 100 ml圆底烧瓶l{I，加甲醇50 n11，分别超声提 取 3次，每次30 rain，滤过，合并提取液、浓缩并定容 于 100 ml量瓶中，摇匀，精密吸取 6 ml，置 50 ml量 瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液 (每毫升含桑白皮 1．2 mg)。 3．5 精密度试验 精密吸取同一供斌品溶液 2 ml，各 5份，同标准曲线的操作，测定吸收度，结果表 明供试品吸收度的RSD=0．96％(11=5)，精密度 良 好。 3．6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液2 ml，各5 份，同标准曲线的操作，分别在 0、5、10、15、20、25、 30 rain时测定其吸收度，结果表明：本法测定桑白皮 总黄酮类成分在30 rain内稳定，RSD=0．83％。 3．7 回收率试验 精密吸取已知含量的供试品溶 液3份，每份 1 ml，分别精密加入0．033 mg／ml的对 照品溶液0．5、1．0、2．0 ml，同标准曲线的操作，测定 吸收度，重复操作一次，并计算同收率，结果表明：平 均回收率为98．20％，RSD为2．18％(n=6) 3．8 重现性试验 精密称取桑白皮粗粉 1 g，各 5 份，照样品的测定方法进行试验，测定每份样品中总 黄酮的含量。结果 5次测得的总黄酬平均含量为 2．75％，RSD为2．36％(n=5)，即本试验 。法测得 的桑白皮药材中总黄酮的含量为2．75％。 3．9 样品总黄酮含量的测定 取 同批号的样品 5份，分别按照 3．4项下供试品溶液制备法来制备， 依法测定，测定结：果见表4。 表4 5批桑白皮药材中总黄酮含量测定结果 4 讨论 在研究桑 皮总黄酮含量测定方法时，最初选 用芦丁为对照品，但试验结果并不好，而且末见文献 报道桑n皮中含有芦丁。此外，本课题组在研究桑 白皮化学成分时，从桑白皮中分离得到抗病毒活性 较强的桑色醇成分。r}1于桑白皮 中黄酮类成分较 多，同时桑色醇是桑白皮中含量较高的一种黄酮类 化合物，因此用其作为桑白皮药材中总黄酮含量测 定的对照品更有意义同时也更能真实反应总黄酮的 含茸。该法测定桑白皮中总黄酮的含量，操作简便、 结果稳定、重复性好，可作为质量检验的一个定量方 法。 参 考 文 献 [1]黎琼红，张I 刚，董澈华．桑属植物化学成分及药理性 研究进展．沈 药科大学学报，2003，20(5)：386-390． [2]李洪玉，孙静芸，吴素香． 同来源桑白皮降压成分桑 根酮 c含量测定 ．中成药，2002，24(2)：104．106． [3]郭业健，范莉，上晓强，等 ．关 J NaNO：一A1(N(_】，) 一 NaOH比色法测定总黄酮方法的探讨 ．药物分析杂志， 2002，22(2)：97—99． (2005—06—30收稿) 本刊投稿须知 本刊从2006年第1期起gff-~,j登“作者简介”内容，请作者在文章首页下脚按“姓名、性别、职称、研究方向 和联系方式”等内容注明。 来稿应为打印稿，投稿时不必附软盘；实验性文章应附单位介绍信 本刊 目前一律不处理网上投稿，请作者务必以邮寄方式投稿。 投稿同时请从邮局汇寄处理费(50 JL／篇)，切勿在稿件中夹带现金；汇款时请注明文章第一作者姓名及 稿件题目。本刊将于收到稿件后的 1个月之内给予回执及发票。 中药材第 29卷第2期 2006年 2月 维普资讯 http://www.cqvip.com