盐酸坦洛新的手性分离与纯度检查

药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2007，27(11) 盐酸坦洛新的手性分离与纯度检查 祝仕清，牛长群 ，王娅莉，薛娜 (华北制药集团新药研究开发中心，石家庄 050015) 摘要 目的：建立手性分离盐酸坦洛新的高效液相色谱方法和毛细管电泳法，并检查光学纯度。方法：采用Chiral OD—R手 性色谱柱(250 mm x4．6 mill，5 m)，以0．5 mol·L 高氯酸钠缓冲液(用高氯酸调 pH 2．0)一乙腈(68：32)为流动相 ；流速 0．5 mL．min～；检测波长：210 am；柱温：30℃；样品浓度 0．1 mg·mL～，进样 10 L。采用未涂层石英毛细管 (67 cm×50 m，有效长度60 cm)，以 10 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 7．0，内含 16 mmol·L-lfl一环糊精硫酸钠盐)为缓冲液 ；检测波长为 214 nm；阳极压力进样2 s；电压为27 kV；温度为25℃。结果：HPLC法和HPCE法均基线分离盐酸坦洛新的2个对映体；其最 低检测限分别为0．1％和0．3％；2种方法光学纯度测定结果基本一致。结论：建立的高效液相色谱法和毛细管电泳法均可用 于该新药的质量控制和稳定性研究。 关键词：盐酸坦洛新；高效液相色谱法；高效毛细管电泳法；手性分离 中图分类号：R917 文献标识码 ：A 文章编号：0254—9173(2007)11—1701—03 Chiral separation and purity test of tamsulosin ZHU Shi—qing，NIU Chang—qun ，WANG Ya—li，XUE Na (R&D Drug Center，North China Pharmaceutical Corporation，Shijiazhuang 050015，China) Abstract 0bjective：To establish an HPLC and HPCE method for chiral separation and inspect the purity of ta— msulosin．Method：The separation of HPLC was performed on a Chira1 OD—R column of 1 00 mm×4．6 mm(5 m)，sodium perchlorate was used as mobile phase．The separation of HPCE was performed on a fused silica cap— iUary(67 cm×50 Ixm，60 cm effective length)．The 一cyclodextrin sulfated sodium salt in 10 mmol·L～sodi— um dihydrogen phosphate(pH 7．0)was used as running buffer．Results：The enantiomers of tamsulosin could be base—line—separated by HPLC and HPCE．The lower limits of detection of HPLC and HPCE were 0．1％ and 0．3％ respectively．The purity inspection resuhs of two methods were the same．Conclusion：The newly estab— lished methods of HPLC and HPCE may be used in the new drug development process for quality control and sta— bility study． Key words：tamsulosin；HPLC；HPCE；chira1 separation 光学纯度检查是控制手性药物质量的重要手 段，主要方法有高效液相色谱法和毛细管电泳法， 由于前者发展的比较早，已成为成熟的手性分离 的手段。而高效毛细管电泳技术作为近十几年发 展起来的新的分离技术 ，以其高选择性、分离时间 短、所需样品少、成本低等特点，成为手性药物拆 分的最有效的方法之一。盐酸坦洛新 (tamsulosin hydrochloride)作为一个单一对映体药物，由于高度 的立体选择性，特异性的阻断 1A肾上腺能受体， 近年来成为改善前列腺增生症状最好的药物之 一 ，在结构上有 1个手性中心(图 1)，存在 1对光 学对映体，由于左旋对映体(R—isomer)的作用强 度远远高于右旋对映体(S—isomer)及消旋体，为 了确保用药的安全有效，必须检查光学纯度。文 献报道了毛细管电泳法L1 和高效液相色谱法 J， 采用聚丙烯酰胺涂层的毛细管柱 ，反转 电极手性 拆分了该手性化合物，本文通过色谱条件的选择 与优化 ，建立了以 一环糊精硫酸钠盐作为手性拆 分剂的区带毛细管电泳法和以 Chiral OD—R为手 性色谱柱的分离方法，用 2种方法检查 了盐酸坦 通讯作者 Tel：(0311)86213084；E—mail：niuchangqun@ncpcrd．com．cn 维普资讯 http://www.cqvip.com ． - — — 1702．-—— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2007，27(11) 洛新的光学纯度，并对 2种方法进行了比较。 1 材料和方法 I．I 高效液相色谱法 高效液相色谱仪：Waters 公司2690型液相色谱仪、2487紫外检测器。分离 条件 ：流动相：0．5 mol·L 高氯酸钠缓冲液(用高 氯酸调 pH 2．0，)一乙睛(68：32)；流速 0．5 mL · min～；检测波长：210 nm；色谱柱：Chiral OD—R手 性色谱柱(250 mm x4．6 mm，5 m)；柱温：30 oC； 样品浓度0．1 mg·mL～，进样 10 L。 1．2 高效毛细管 电泳法 高效毛细管电泳仪： Beckman公司 P／ACE 5000型；毛细管：未涂层毛 细管67 cm(有效长度 60 cm)x 50 m(河北永年 光导纤维厂)。分离条件：缓冲液为 10 mmo]·L 磷酸盐缓冲液(pH 7．0，内含 16 mmol·L 一环 糊精硫酸钠盐)；检测波长为 214 nm；阳极压力进 样 2 S；电压为 27 kV；温度为25 cC。 高氯酸钠、高氯酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)、 磷酸氢二钠、磷酸二氢钠(分析纯)、 一环糊精、 一 环糊精、甲基 一 一环糊精、二 甲基 一卢一环糊 精、羟丙基 一 一环糊精、卢一环糊精硫酸钠盐(Sig— ma产品)、羧甲基 一 一环糊精(自制)、坦洛新由 市售盐酸坦洛新胶囊(哈乐)提取而得，坦洛新消 旋体由河北师范大学提供。 2 结果和讨论 2．1 高效液相色谱方法的建立 2．1．1 手性色谱柱对分离的影响 分别试验了 Chira|OD—R和 Chira|OD—RH 2种型号的色谱 柱，其手性固定相填料均为三取代 3，5一二甲基苯 基氨基甲酸酯纤维素，不同之处在于色谱柱的长 度，试验发现虽然 Chiral OD—RH为高效色谱柱， 但由于色谱柱的长度短，不能达到基线分离的目 的，改用 Chiral OD—R手性柱后，其分离度达到了 完全分离的要求(R>!．5)。 2．1．2 流动相对分离的影响 流动相中高氯酸 钠缓冲液浓度和 pH对分离的影响较大，在本实验 中，随高氯酸钠缓冲液浓度增加和 pH降低，分离 度变大，但缓冲液浓度太高或 pH太低，都会影响 色谱柱寿命，因此，选择缓冲液的浓度为 0．5 mol · L～、pH为2．0作为本试验的分离条件，该手性 分离系统的分离度为 1．85，保留时间约为30 min (图 2一A)。 10 A 图2 盐酸坦洛新消旋体 (A)及盐酸坦洛新样品(B)的高效液相 色谱图 Fig 2 HPLC chromatograms of racemic(A)and tamsulosin hydrochlo— ride(B) 1．盐酸坦洛新左旋异构体(R—isomer) 2．盐酸坦洛新右旋异构 体(S—isomer) 2．2 高效毛细管电泳方法的建立 2．2．1 环糊精种类及浓度对分离的影响 以环 糊精和其衍生物为手性选择剂，分别考察了 一环 糊精、卢一环糊精、甲基 一卢一环糊精、二甲基 一卢一 环糊精、羟丙基卢一环糊精、羧甲基 一卢一环糊精、卢 一 环糊精硫酸钠盐对分离的影响，只有带负电的 环糊精 的衍生物对坦洛新 的2个对映体有选择 性，羧甲基 一 一环糊精只能使 2个对映体部分分 离，而 一环糊精硫酸钠盐的分离效果最好，而其 他环糊精都没有或具有很低的手性选择性。进一 步考察了 一环糊精硫酸钠盐的浓度(4，8，12，16， 20 mmol·L )对分离的影响，结果当环糊精浓度 增加时，迁移时间变长、分离度变大，最终选择 l6 mmol·L。。为适中的浓度。 2．2．2 缓冲液的pH及浓度对分离的影响 缓冲 液的 pH对手性分离影响较大，选择合适的pH才 能获得较好的手性分离效果。当pH较低时(pH <7．0)，其迁移时间较长；当pH值增大时，其迁移 时间变短，分离度变小。当pH为7．0，其分离度达 到最大(R=2．97)。缓冲液浓度对分离度也有影 响，随缓冲液浓度增加，迁移时间变长，分离度变 大，通过试验证明最佳缓冲液浓度为 10 mmol‘ L～。该手性分离系统的分离度为 2．97，保留时间 为 10．4 min。 2．2．3 温度及电压对分离的影响 实验结果 明：当温度升高时，手性分离效果变差 ，为了达到 满意的分离效果，应尽量选择较低的温度，本实验 选择的温度为25 cC，该温度下的分离度能满足实 维普资讯 http://www.cqvip.com 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2007，27(11) 验要求。电压对分离度的影响较小，但能改变分 离的速度，电压升高，迁移速度变快，分离所用时 间变短，实验中采用 27 kV电压 ，使分离所用的时 间在 15 rain之内(图3一A)。 2．3 方法的比较 2．3．1 灵敏度试验 以信噪比S／N=3为指标， 测得毛细管电泳法和高效液相色谱法的最低检出 限分别为0．1％、0．03％；以信噪比S／N=10为指 标，测得最低定量限为0．3％，0．1％。 2．3．2 光学纯度的检查 采用上述 2种分离方 法，按峰面积归一化法，分别对3批盐酸坦洛新样 品进行了光学纯度检查(图2一B、图3一B)，实验 结果(表 1)表明：2种方法的检测结果基本一致，3 批样品的光学纯度均不低于98．5％，符合单一对 映体药物的纯度要求。本实验所建立的 2种方法 测定准确、方便、实用，对控制该手性药物的质量， 保证产品的安全有效具有重要的意义。 一 J 表 l 3批样品的光学纯度检查结果 Tab 1 Results of the contents of inspect the purity of tamsulosins 2．3．3 方法的比较 虽然高效液相色谱法的灵 敏度高于毛细管电泳法 ，但需要特殊 的手性色谱 柱和大量的有机溶剂，不仅实验费用高，而且对环 境有污染。而毛细管电泳法在分离速度、分离效 果和实验费用等方面均优于高效液相色谱法。 3 结论 本文建立 了高效液相色谱及毛细管电泳分 离坦洛新光学对映体的 2种方法 ，成功地应用 了 2种不同机理 ，基线分离了盐酸坦洛新 的 2个对 映体。采用本实验所建立的方法，分别检查了盐 酸坦洛新样品的光学纯度，实验证明2种方法均 方便、准确，但毛细管电泳法优于高效液相色谱 法 。 参考文献 1 Kavalimva A，Pospisilova M，KarHcek R．Enanfiomefic pufi~ deter- ruination of tamsulosin by capillary electrophoresis using cyclodex- trins and a polyacrylamide—coated capillary．Farmaco，2005，Aug 30 Maier V，Horakova J。Pe缸J。et a1．Chiral separation of tamsulosin by capillary electrophoresis．J Pharm Biomed Anal，2005，39(3—4)： 691 Zhang Zhefeng，Yang Gengliang，Liang Guijian，et a1．Chiral separa- tion of tamsulosin isomers by HPLC using cellulose tri(3，5一dime- thhylphenylcarbamate)as a chiral stationary phase．J Pharm Biomed Anal，2004，34：689 (本文于2007年9月 19日修改回) 维普资讯 http://www.cqvip.com