双黄连注射液家兔直肠给药的药代动力学和相对生物利用度研究

◇研究原著 ◇ · 525 · 中国临床药理学与治疗学 中国药理学会主办 CN 34-1206／R，I．RSN 1009．2501 E-mail：editorya@mal1． 1wilpn．net．en 2OO2Dee；7(6)：525—528 双黄连注射液家兔直肠给药的药代动力学 和相对生物利用度研究 黎烈荣，谭异伦2，郑 颂 湖北中医学院妇科教研室，武汉 430061；2武汉大学中南医院中医科 ，武汉 430061； 武汉市第一医院妇产科 ，武汉 430061 摘要 目的：研究双黄连注射液家兔直肠给 药的药 代动力学和相对生物利用度，对保 留灌肠和 12服给 药进行比较 ，为直肠给 药的科 学性提供理论依据。 方法：将双黄连注射液中主药金银花的有效成分绿 原酸作为血药浓度定量分析的检测指标 ，根据药物 由用药部位进入体循环的速度(即吸收速率 K )和 药物进入体循环的相对量 ，即吸收程度，通常用血药 浓度一时间(C—T)曲线下面积作指标 ，观察直肠给药 的吸收动力学变化。结果：药代动力学数据说 明保 留灌肠组与口服组间的 AUC存在显著性差异(P< 0．05)。灌肠剂的生物利用度为 100％，口服．剂的相 对生物利用度则为 80．78％；保 留灌肠剂和 口服 剂 的达峰时间(Tn值)分别是 0．75和 2．48 h，有显著 的统计学意义(P<0．05)，说 明保 留灌肠在吸收速 度方面优于口服 ；C一受吸收量和吸收时间的影响， 保留灌肠剂的血清浓度峰值与口服剂的峰值间存在 显著性差异(P<0．05)，说 明保 留灌肠剂的血 药浓 度明显高于口服剂。结论 ：双黄连注射液有效成分 的吸收 ，直肠比口服给药快，血药浓度高，其吸收总 量和生物利用度均高于口服给药。 关键词 慢性盆腔炎；中医药疗法；药代动力学；直 肠给 药 中图分类号：R969．1 文献标识码：A 文 章 编 号：1009．2501(2002)06．0525．04 2[112-07-22收稿 21102-08．13修 回 1湖北省教育厅研究项 目(Na98OT29) 黎烈荣，联系作者，女，硕士，主任医师，硕士生导师，湖北省中医药学 会妇产科专业委 员会主任委 员。 Tel：吻 柳 813粥 E-InailIⅡI2@ 163． 慢性盆腔炎是妇科临床常见多发且难愈的一种 疾病 ，临床多采用中药 口服或保留灌肠的方法治疗 ， 均有不同程度的疗效。尤其是 中药保 留灌肠 ，既可 避免苦寒药物久服败胃，又可使药物直达病灶，更快 地促进局部炎症吸收消失 ，使粘连的盆腔组织软化 分离 ，疗效满意。我们临床观察使用双黄连注射液 保留灌肠治疗慢性盆腔炎 68例，有效率达 97％，明 显高于口服治疗组。为 了验证临床疗效 ，为直肠给 药的科学性提供理论依据，我们将双黄连注射液中 的主要药物金银花的有效成分绿原酸作为血药浓度 定量分析的检测指标 ，对保留灌肠组和口服组进行 直肠吸收的药物动力学的比较研究。 1 与方法 1．1 仪器 Waters高效液相色谱系统 ，994陈列检 测器，600E泵 ，U6K进样器，均由美国 Waters公 司生 产。振荡器 ，LD 5．10型离心机，北京医用离心机厂 生产 。 1．2 药品和对照品 双黄连注射剂(冻干剂)，哈尔 滨中药二厂生产 ，批号 ：d980532，6OO mg／支。绿原 酸标准品，武汉市药检所提供。甲醇 ，醋酸，乙腈均 为分析纯。 1．3 实验动物 家兔 ，2 kg左右，雌雄兼用 ，本院动 物室提供。 1．4 方法 1．4．1 样品、标准品液的配制 精密称取双黄连注 射剂粉末 20 ，置 10 rnl容量瓶。加甲醇至 4／5体 积 ，超声震荡 30 min，冷置，加 甲醇至刻度 ，摇匀，配 得浓度为 2 g·L 的样品供试液。精密称取绿原酸 标准品 10 mg，置于 100 ml容量瓶，如样本溶液的配 置方法 ，得浓度为 0．1 g·L 的标准品供试液。 1．4．2 色谱条件 色谱柱 I舢lvTM，CI8’3．9 into× 维普资讯 http://www.cqvip.com · 526 · 150 llln，流动相为水一甲醇。 1．4．3 标准曲线绘制 精密称取绿原酸标准品 10 Ing，置于 100 ml容量瓶中，用甲醇定容 ，即得浓度为 100 rag·LI1的标准 品溶液。精密吸取标准 品溶液 10，100，200，300，400 ，分别加 0．2 ml空白血浆 ，再 加人 1．5 ml乙腈 ，混合摇匀 10 min沉淀蛋 白，以 3 000 r·nfinI1的速度离心 10 min，取上清液，挥去溶 剂 ，残渣用 0．5 ml甲醇溶解 ，进样 50 行 HPLC测 M 1 A r__r—r_T—r1 2 10 B Chin J Clin Pharmacol nler 2002 Dee：7(6 定。其色谱图见图 1，以进样浓度作横坐标，以所测 峰面积作纵坐标作 标准 曲线 ，其 回归方程 为 l，= 24．9609X+0．005739，r=0．9998。绿原酸标准品溶 液在 0．002～0．08 g·L 之间与峰面积有 良好线性 关系。 1．4．4 样品测定 精密吸取样 品供试液 20 ，按 色谱条件进样测定(见图 1)。 0 图 1 绿原酸标准品、样 品及含药血清色谱图 A：绿原酸标准品 ；B：双黄连 注射荆；C：给药后的血清；1：绿原酸 根据所测样品溶液峰面积和对照品峰 面积之 比，用外标法公式计算双黄连注射剂中绿原酸的含 量⋯ ，计算公式为 ： ，1 A搓／A盟 ×M对×lOOO(g L一 ) 乙一 Vl样×1000 c为双黄连注射剂 中的绿原酸含量，A样为双 黄连注射剂样品峰面积 ，A对为绿原酸对照品峰 面 积，M对为绿原酸对照品进样量 ( )，V样为双黄连 注射剂样品进样量 ( )。 1．4．5 回收率实验 取 1 ml样品溶液 5份 ，各加入 血浆 0．2 ml，分别加 0．25 ml绿原酸标准品溶液 (c =0．1 g·LI1)，按标准曲线项下的方法进行处理 ，所 得供试液分别进行 HPLC测定 ，测得加样 回收率为 (96．5±1．0)％ ，CV=1．08％(n=5)。 1．4．6 稳定性试验 取 1 ml样品溶液，加入血浆 0．2 ml，再加人 0．25 ml绿原酸标准品溶液 ，按标准 曲线项下的方法进行处理 ，所得供试液按 即时、1、2、 3、4、5、6、7 h分别进样 ，分析峰面积的平均值 ，变异 系数 CV=1．8％。 1．4．7 精密度实验 对同一样 品同时进样 6次 ，分 析峰面积的平均值 ，变异系数 CV=2．3％。 10 C 10 1．4．8 操作方法 实验兔 10只，随机分为两组 ，每 组 5只，雌雄兼用。均禁食 12 h，每只分别给予双黄 连注射剂粉末 1．8克，用 37℃ 生理盐水溶解，溶于 10 IIll容量瓶 ，按组分别行 口服灌胃或直肠给药 ，给 药前心脏穿刺抽血 2 ml作为空 白对照，给药后各于 0．5、1、2,3、4⋯5 6 8 h共 8个时间点心脏穿刺取血， 每次 2 ml。直肠给药方法 ：取灌肠用的导尿管 ，管 头涂凡士林 ，使兔跨卧于桌上，轻按住兔头及前肢 ， 拉住兔尾 ，露出肛门，轻握后肢。将导尿管缓慢插入 家兔肛门内，深度 7～9 cm。与注射器套紧，灌注含 双黄连 1．8 g的药液 10 IIll，再吸取一定量生理盐水 缓慢灌入 ，保留导管 3 min。灌药前后，保持管 口向 上，并高于肛 门水平 ，以免药液漏出。灌胃方法：将 兔夹于两腿间，固定头部，抓住两前肢。将开口器横 放于兔口中，压在舌头上面 ，用导尿管从开口器中央 孔慢慢插入食道和 胃。导管外 口端放入清水 中，如 无气泡出现，在胃内，再灌入同等剂量的双黄连 药液。心脏穿刺取血方法 ：将兔仰卧固定于手术台， 左侧胸部相当心脏处的被毛剪去，碘酒、酒精消毒皮 肤 ，左手触摸胸骨左侧第 3～4肋间，选择心跳最明 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国临床药理学与治疗学 2O02 Dee；7(6 显处穿刺。将 注射器针头扎人心 室 内，每次采血 肠在吸收速度方面优于 口服。 2 IIll。 1．4．9 血药浓度 的测 定 血样品在室温静置 30 min后 ，离心分离血浆(3 000 r·min～，10 min)后 ，取 血清 0．5 ml，加人 乙腈 4．5 IIll，充分振摇 10 min，离 心 10 rain(4 000 r·min-1)。转移上清液 ，挥干溶剂， 加甲醇 0．5 ml，溶解溶质 ，每次取 25 l进样。以绿 原酸做为控制指标 ，用 HPLC法测 出家兔灌肠及灌 胃给药后不同时间的血药浓度。根据直肠给药组和 灌 胃给药组每组 5只家兔 的血药浓度平均数值 ，分 别描点，绘制两种不同途径给药 的血药浓度及时间 曲线(见图 2)。 7O 6O ∞ 50 、 40 30 糯 2O 目 1O O 图 2 两种途经给药血药浓度及 时间曲线(o．o ：灌肠给药 。 ◆．◆ ：灌胃给药 ) 采用梯形法计算 出曲线下面积 AUC E 。药时 曲线经计算机模拟 ，根据血药浓度的吸收曲线计算 各项药代动力学参数，求出达峰时间 Tp和峰值 c一 ，并作 t检验。以灌肠剂的生物利用度为 100％ 求出灌胃给药的相对生物利用度。 2 结果 在剂量相同，体清除率不变的条件下 c．T曲线 下面积 AUC反映药物进人人体的量 ，从 1药代动 力学数据得出保留灌肠组与口服组间的 AUC，存在 显著性差异(P<0．05)。以灌肠剂的生物利用度为 100％，口服剂的相对生物利用度则为 80．78％。 TD值反 映药物吸收速度 的快 慢，从 表 1中看 出，保留灌 肠剂 和 口服剂 的 TD值分 别是 0．75和 2．48，统计学上有显著差异(P<0．05)，说明保留灌 · 527 · 表 1 双黄连灌胃及灌肠的药动学参数(i-I-s。lit=5) 两组 比较 P<0．05 c一受吸收量和吸收时间的影响，保留灌肠剂 的血清浓度峰值与 口服剂的峰值间存在现著差异 (P<0．05)，说 明保留灌肠剂 的血药浓度明显高于 口服剂。 3 讨论 衡量药物吸收一般有两个指标，一是药物由用 药部位进人体循环 的速度 ，即吸收速率 ，二是药 物进人体循环的相对量 ，即吸收程度，通常用血药浓 度一时间(c．T)曲线下面积作指标。本研究围绕上述 两个指标探讨直肠给药的吸收动力学变化 ，目的在 于将临床用药与现代药理学研究相结合 ，通过实验 验证药物的治疗作用 ，为直肠给药的科学性提供理 论依据。绿原酸是金银花 中的主要成分，据 《中药 志》第五册记载 ：具有抗炎 、抗病毒、抑制溃疡、增强 免疫功能的作用。本实验将金银花的有效成分绿原 酸作为血药浓度定量分析的检测指标 ，进行直肠吸 收的药物动力学研究 ，结果证明，直肠对中药有效成 分的吸收比口服给药快，血药浓度高，其吸收总量和 生物利用度均高于 口服给药，这是 由于直肠静脉直 接与下腔静脉相连，有效成分吸收后可直接进人大 循环 ，避免了“肝首过消除效应”，防止或减少药物在 肝脏被破坏 ，也能防止 胃肠消化液对药物的破坏 ，使 药物的生物利用度得到充分发挥。亦证明直肠给药 不失为中医临床一种速捷高效的给药途径。 参 考 文 献 1 纪晓多 ．高效液相色谱法在药物动力学 中的应用[J]．药 物分析杂志 ，1986；6：236—7 2 孙瑞元 ．定量药理学 [M]．第 1版，北 京 ：人 民卫生 出版 社 。1987：371—4 3 赵淑杰 ．HPLC在 中成药分析中的应用[J]．中成药 ，1994； 16t45—6 维普资讯 http://www.cqvip.com · 528 · Chin J CAin Haammcol Ther 2002 Dee：7(6 Pharmacokinetics and relative bioavailability of shuanghuanglian injection in rabbits by rectal medication1 U Lie—Rong，TAN Yi—IAln2 ， ZHENG Song3 Department ofGynecology，Hubei College of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430061；~m,rtment of Traditional Chinese Medicine，Wuhan University，Wuhan 430061；3First People Hospital of Wuhan City，Wuhan 430061 ABSTRAC3r AiM ．To investigate the pharmacokinetics and relative bioavailabihty of shuanghuanglian injection in rabbits by rectal medication in comparison with oral medi- cation．M ETIIODS：Chlorogenic aci from flos lonicerae d，a main component in shuanghuanglian injection，was used as a detection marker in blood drug．According to the velocity of drug entering into systemic circulation from medication site(that is，absorption rate Ka)and the rela- tive quan tity of drug entering into systemi c circulation from lnl~lication site(that is，absorption degree)，AUC was usually used as a marker to obsoi've ab sorption dy- namie chan of rectal medication．RESULTS：There was significant difference of AUC between clusis group and oral group(P<0．05)．Bioavailability of enema Was 100％ ，and oral dose 80．87％；The values of Tn of ene— ma and oral dose were 0．75 h an d 2．48 h．respectively (P <0．05)，showing that clusis Was superior to oral medication； C Was affected by ab sorption qu an tity an d time． There Was significan t difference of C be tween enema and oral dose(P<0．05)，showingthat the blood drug concentration of enema Was obviously higher than that of oral dose．C0NCI Js10N ：For the ehlorogenie acid from shuanghuanglian injection，the absorption in rectal med ication is faster than that in oral med ieation． and the blood concentration，total absorption quantity an d bioavailability of rectal medication are higher than ones of oral med ication． KEY W ORDS chronic pelvic inflammatory disease； traditional Chinese med icine； pharmacokineties； rectal med ication 本 刊 重 要 启 事 本刊自2003年起每期页码增至 120页(双月刊)，内容约增加 30％。同时已申请加入中国科技统计 源期刊。这样，本刊将进入国内所有大型科技文献检索系统，以及大型期刊数据库系统。目前本刊发行量已 攀升至每期 6O00余册；发行地域覆盖全国各地。本刊正在向精品和名牌刊物努力，着力成为从事药物治疗 学和临床药理学工作者不可或缺的工具。 维普资讯 http://www.cqvip.com