5-3血红蛋白的提取和分离

nullnullnullnullnull㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶：2、概念： 　　null㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶：　　一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）2、概念： 　　null1、凝胶：　　一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）2、概念： 　　根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：一基础知识null凝胶色谱法分离蛋白质的原理null3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null较长相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null较长较慢相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null较长较慢相对分子质量较大相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null较长较慢相对分子质量较大凝胶外部相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null4、具体过程较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快相对分子质量较小3、原理： 　　当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ 　）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。null㈡ 缓冲溶液：1、概念： 　　null1、概念： 　　在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：null2、作用： 　　能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。1、概念： 　　在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：null外界的酸或碱2、作用： 　　能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。1、概念： 　　在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：null外界的酸或碱PH值2、作用： 　　能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。1、概念： 　　在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：null3、缓冲溶液的配制　　通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ 　　　）就可以制得（ ）使用的缓冲液。null3、缓冲溶液的配制　　通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ 　　　）就可以制得（ ）使用的缓冲液。1－2null1－2使用比例3、缓冲溶液的配制　　通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ 　　　）就可以制得（ ）使用的缓冲液。null1－2使用比例在不同PH范围内3、缓冲溶液的配制　　通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ 　　　）就可以制得（ ）使用的缓冲液。null说出人体血液中缓冲对。思考nullNaH2PO4 / Na2HPO4H2CO3 / NaHCO3说出人体血液中缓冲对。思考null㈢电泳：1、概念： 　　null1、概念： 　　指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。㈢电泳：null2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸可解离的基团2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸可解离的基团一定的PH2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸可解离的基团正电或负电一定的PH2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极一定的PH2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异一定的PH2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小一定的PH2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。null多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小一定的PH2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。形状null多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小迁移速度一定的PH2、原理： 　　 许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。形状nullnullnull分类：null分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。null　　聚丙烯酰胺凝胶：是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N′-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂(过硫酸铵）和催化剂（四甲基已二胺）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶　　蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。null　　为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。nullSDS　　为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。nullSDS单条肽链的分子量　　为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。nullSDS分子的大小　　为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。单条肽链的分子量null　　测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙烯酰胺凝胶电泳null　　测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量null电泳PCR结果琼脂糖凝胶电泳null电泳检测PCR结果琼脂糖凝胶电泳null　　用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？二实验操作null　　鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。　　用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？null蛋白质的提取和分离一般分为四步：1. 样品处理样品处理——粗分离 ——纯化——纯度鉴定null血液有哪些成分？nullnull血液血 浆水分其他 物质血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血 细 胞白细胞血小板红细胞 (最多)血红蛋白 (90％)两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团血液有哪些成分？血红蛋白nullnull　　每个肽链环绕( ),此基团可携带( )。血红蛋白因含有( )而呈红色null一个亚铁血红素基团　　每个肽链环绕( ),此基团可携带( )。血红蛋白因含有( )而呈红色null一个亚铁血红素基团　　每个肽链环绕( ),此基团可携带( )。血红蛋白因含有( )而呈红色一分子氧或一分子CO2null一个亚铁血红素基团血红素　　每个肽链环绕( ),此基团可携带( )。血红蛋白因含有( )而呈红色一分子氧或一分子CO2null①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤null杂质蛋白①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤null杂质蛋白低速短时间①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤null杂质蛋白低速短时间黄色血浆①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤null杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤null杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色五倍体积①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤null杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色五倍体积生理盐水①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤null 重复洗涤( )次，直至上清液中已没有( )，明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。null三 重复洗涤( )次，直至上清液中已没有( )，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。null三黄色 重复洗涤( )次，直至上清液中已没有( )，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。null初次离心后的结果null初次离心后的结果null 　　加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放null 　　加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放蒸馏水null 　　加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放原血液蒸馏水null 　　加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放原血液甲苯蒸馏水null 　　加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放原血液甲苯磁力搅拌器蒸馏水null　　将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10min，试管中的溶液分为4层：(3)分离血红蛋白溶液null有机溶剂 无色透明的甲苯层脂类物质 白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液 红色透明液体红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物分离血红蛋白溶液null　　取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析null1　　取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析null透析袋1　　取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析null透析袋磷酸缓冲液1　　取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析null透析袋磷酸缓冲液7.01　　取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析null除去样品中分子量较小的杂质透析袋磷酸缓冲液7.01　　取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析null除去样品中分子量较小的杂质透析袋磷酸缓冲液7.0缓冲液1　　取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析null利用透析袋透析null2. 凝胶色谱制作1）凝胶色谱柱的制作 　　①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。null②底塞的制作： 　　null ②底塞的制作： 　　打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。 　　③顶塞的制作：④组装：⑤安装其他附属结构。null　　底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。注 意nullnull2）凝胶色谱柱填料的处理null2）凝胶色谱柱填料的处理null2）凝胶色谱柱填料的处理计算凝胶量配置凝胶悬浮液装填洗涤平衡null　　凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意null　　缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意null装配好的凝胶柱null　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？思考null　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？　　使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。思考null　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考null 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考null3）样品加入与洗脱50cm高null3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高null②加透析样品null注意正确的加样操作： ①不要触及破坏凝胶面 ②贴壁加样 ③使吸管管口沿管壁环绕移动注 意null3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高③样品渗入凝胶床：④洗脱： ⑤收集：②加透析样品null收集得到的纯化后的蛋白null　　1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？null　　观察你处理的血液样品离心后是否分层？如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。　　1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？null　　2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？null　　2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？　　由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 null　　3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？null　　如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。　　3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？null　　1.在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？思考null　　让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持结构和功能。　　1.在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？思考null　　2.与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？思考null　　2.与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？　　血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 思考null3.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？null3.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？　　血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即:样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。null　　1. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 　　A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 　　B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 　　C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 　　D.二者根本无法比较null　　1. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 　　A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 　　B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 　　C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 　　D.二者根本无法比较√null　　2. 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 　　A. 电荷的多少 　　B. 分子的大小 　　C. 肽链的多少 　　D. 分子形状的差异null　　2. 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 　　A. 电荷的多少 　　B. 分子的大小 　　C. 肽链的多少 　　D. 分子形状的差异√null　　3. 在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 　　A. 调节pH 　　B. 维持红细胞的能量供应 　　C. 防止微生物生长 　　D. 防止血液凝固null　　3. 在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 　　A. 调节pH 　　B. 维持红细胞的能量供应 　　C. 防止微生物生长 　　D. 防止血液凝固√null　　4. 一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是 　　A. 4、2 　　B. 4、4 　　C. 2、1 　　D. 1、1null　　4. 一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是 　　A. 4、2 　　B. 4、4 　　C. 2、1 　　D. 1、1√null　　5. 记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是：null　　5. 记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是：有机溶剂——脂类物质——血红蛋白溶液——红细胞破碎物沉淀