景天祛斑片对主要研究结果的总结及评价

景天祛斑片对主要研究结果的总结及 中药注册分类8 申报资料4 对主要研究结果的总结及评价 (景天祛斑片) 课名称 景天祛斑片 研究单位 xxxx制药有限公司 申报单位 xxxx制药有限公司 联 系 人 xxxx 联系方式 Tel: Fax: 对主要研究结果的总结及评价 一、工艺研究的试验资料及文献资料 (一)药材的分拣去杂质及质量验收 处方中各药材，分别分拣去杂，按《中国药典》xxxx年一部有关规定检验，符合规定的备用。 (二)配料与掺混 将符合规定的药材按处方量配料，分别掺混，备用。 (三)粉碎工艺考察 珍珠为贵重药材，应粉碎为极细粉，为减少损失，保证粉碎粒度，用WF-320A型吸尘微粉碎机组粉碎即可。 (三)提取工艺研究 根据处方中各药材有效成份的理化性质，采用不同的提取方法。红景天、制何首乌、当归用75%乙醇回流提取，红花、杜鹃花水蒸气蒸馏法提取挥发油，药渣与枸杞子、黄芪加水煎煮。 1.红景天、制何首乌、当归提取工艺考察 取红景天、制何首乌、当归适当破碎，作为正交试验样品，每正交试验样品重700g。按正交试验表设计加溶剂量、提取次数、提取时间，分别回流提取，滤过(200目筛)，滤液合并，静置，取上清液浓缩成稠膏，置烘箱内干燥至恒重。以干膏作为评价指标。 表3、正交试验结果分析表 试验号 因素 评价指标 A B C D 干膏量(g) 1 10 1 1 95% 120.44 2 10 2 1.5 75% 157.26 3 10 3 2 50% 176.94 4 8 1 1.5 50% 120.63 5 8 2 2 95% 149.45 6 8 3 1 75% 168.90 7 6 1 2 75% 111.84 8 6 2 1 50% 145.24 9 6 3 1.5 95% 154.91 K 454.64 352.91 434.58 424.80 1 K 438.99 451.96 432.80 438.00 2 K 411.99 500.75 438.23 442.82 3 k 151.55 117.64 144.86 141.60 1 k 146.33 150.65 144.27 146.00 2 k 137.33 166.92 146.08 147.61 3 R 14.22 49.28 1.22 6.01 由上表极差R值大小显示，各因素作用主次为B,A> D > C; 以A B CD组合为佳。由于提取1333 时间和乙醇浓度对提取结果影响不大，考虑到实际生产中能源问题，提取工艺拟定为用10倍量75%乙醇，加热回流提取三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时。合并提取液，滤过，回收乙醇得溶液。 由确证实验数据表明:加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时的提取方法与最优方法相当，且重复性良好。 2、红花、杜鹃花发油提取工艺研究 按10倍处方量取红花、杜鹃花药材，酌予碎断。鉴于水蒸气蒸馏法提取挥发油的时间是主要因素，提取之前浸泡1小时,然后进行挥发油提取试验。结果表明，提取之前浸泡1小时,然后进行挥发油提取，2小时可以提取完全，平均收率为 0.33% 3、药渣与枸杞子、黄芪提取工艺考察 将药材枸杞子、黄芪适当破碎，按处方量配伍，加入提取挥发油后药渣中，作为正交试验用样品。依正交实验设计表设计的加溶剂量、煎煮时间、煎煮次数，分别煎煮，放冷，滤过，合并煎液，静置，取上清液浓缩，干燥，以干膏量作为评价指标 表3正交实验结果评价表 因素 A B C 实验号 干膏量(g) 1 10 1 1 145.98 2 10 2 2 237.39 3 10 3 3 258.83 4 8 1 2 214.28 5 8 2 3 254.44 6 8 3 1 150.78 7 6 1 3 181.61 8 6 2 1 122.76 9 6 3 2 219.53 K 642.19 541.87 419.52 1 K 619.50 614.58 671.19 2 K 523.89 629.14 694.88 3 k 214.06 180.62 139.84 1 k 206.50 204.86 223.73 2 k 174.63 209.71 231.63 3 R 39.43 29.09 91.79 由上述极差分析数据表明:煎煮次数为显著因素，其次为溶剂的倍数，煎煮时间，因此最佳提取方法为CAB，由于B和B、C和C相差甚微，考虑到实际生产的能源问题，采用加10倍量31323 23 水，煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时。 由确证实验数据表明:加10倍量水，煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时的提取方法与最优方法相当，且重复性良好。 (四)成型工艺研究 1(制粒工艺选择:分别用70%乙醇、95%乙醇、水、10%淀粉浆作粘合剂，制粒压片，结果用70%乙醇作粘合剂，14目筛制粒能获得适宜的颗粒。采用60,80?常压干燥方法干燥即可。颗粒含水量控制在5,7%，16目筛整粒后能够得到理想的片芯。 2(压片工艺 为避免干燥时挥发油损失，应在颗粒干燥后将其喷入，再加入适量硬脂酸镁，混匀，压片，成型性好，片剂硬度适中。 3(包衣 为了获得外形美观及稳定性好的药片，经试验采用常规包薄膜衣的方法即可 以上八味，珍珠粉碎成极细粉，红景天、制何首乌、当归用10倍量75%乙醇，加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，合并提取液，滤过，回收乙醇得溶液，红花、杜鹃花水蒸汽蒸馏收集挥发油后，水溶液另器收集，药渣与枸杞子、黄芪合并，加10倍量水煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述溶液合并，浓缩至相对密度为1.30,1.35(50?)的稠膏;加入上述珍珠粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，制粒，喷入挥发油，混匀，压片，包薄膜衣，即得。 (五)三批中试生产考核工艺稳定性 取处方十倍量药材，在中试设备上试验，考核工艺稳定性，三批数据表明，工艺稳定，具可重复性和再现性。根据中试制成品量，确定本品每处方量制成1000片。 三批中试产品工艺数据 批 号 药材量(g) 干膏量(,) 细粉量(g) 成品量(片) 收率(%) xx0301 16800 4025.82 986.18 10020 100.2 xx0302 16800 4026.63 982.37 9920 99.2 xx0303 16800 4015.71 988.45 9870 98.7 二、质量研究的试验资料及文献资料 为了实施景天祛斑片的质量研究，按拟定工艺制备工作样品，批号定为xx0214。用于显微鉴别、薄层鉴别、含量测定的方法研究。 【名称】 景天祛斑片 与原剂型标准一致。 【处方】 与原剂型标准一致。 【制法】 除成型工艺外，与原剂型标准一致。 【性状】 以三批中试产品的实际性状描述。 【鉴别】,1,珍珠的显微鉴别，三批中试样品均检出珍珠。与原剂型标准一致。 (2)为本品中制何首乌的薄层鉴别，经与大黄素对照品,制何首乌对照药材;缺制何首乌阴性对照样品对照，斑点显色清晰，Rf值适宜，专属性强。予以采用。本鉴别项与原剂型标准一致。 (3)为本品中枸杞子的薄层鉴别，经与枸杞子对照药材、缺枸杞子阴性对照样品对照，斑点显色清晰，Rf值适宜，专属性强。予以采用。 与原剂型标准一致。 (4)为本品中当归的薄层鉴别，经与当归对照药材、缺当归阴性对照样品对照，斑点显色清晰，Rf值适宜，专属性强。予以采用。 与原剂型标准一致。 (5)为本品新增的黄芪的薄层鉴别，经与黄芪甲苷对照品、缺黄芪阴性对照样品对照，斑点显色清晰，Rf值适宜，专属性强，予以采用。 【检查】依照《中国药典》20xx年版一部附录(?D)的有关规定对三批中试产品检查，均符合药典有关规定。 此项与药典要求一致。 重金属 三批中试产品重金属均低于百万分之五，暂不设定重金属检查项。 砷盐 三批中试产品砷盐均低于百万分之二，暂不设定砷盐检查项。 【微生物限度】依《中国药典》20xx年版一部附录(?? C)的有关规定对三批中试产品检查，均符合药典有关规定。此项是根据《中国药典》20xx年版一部与历版药典的不同而增加的。 【含量测定】 原标准收载用薄层扫描法进行制何首乌中大黄酸含量测定的方法，制首乌中大黄酸含量不稳定，测定大黄酸不如测定首乌中2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷更质量控制意义。新剂型经试验采用高效液相色谱法，对样品中制何首乌实施质量控制,样品制备方法简便，稳定,重现性好。 【含量测定】采用高效液相色谱法(《中国药典》20xx年版一部附录VI D)。 根据本方药味及配伍,选制何首乌作为【含量测定】的评价指标,参考《中国药典》(xxxx年版一部)第139页的制何首乌药材含量测定项下高效液相色谱法的测定方法，配制流动相乙腈-水(25:75)试用，检测波长仍选320nm,结果发现保留时间5.5分钟左右,样品峰基线分离，峰形对称，样品峰与杂质峰分离良好，因此选择制何首乌中的2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷作为【含量测定】的评价指标。(见附后谱图) 标准曲线 精密称取2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量,加稀乙醇制 作为对照品溶液。稀释得30µg/ml、 20 µg/ml、10µg/ml、 5 µg/ml、2.5µg/ml成每1ml含40µg的溶液, 的对照品溶液。 分别精密吸取上述各对照品溶液10µl,注入液相色谱仪,测定,即得。 回归曲线为Y(峰面积)=237.621X(浓度)+362.375 r=0.9990 线性范围为2.5,40µg/ml,标准曲线,近似过圆点,采用外标一点法定量。 供试品溶液制备方法的选择 参考《中国药典》制何首乌含量测定项下的方法选用稀乙醇作溶剂超声30min,样品能够获到基线分离,峰形对称。因此不再作溶液制备方法选择。 精密度 同一样品连续进样测定5次，相对标准偏差为2.45%,小于3.0%。 稳定性 同一样品,制备后在30分钟、1小时、6小时、12小时、24小时后分别测定，相对标准偏差为2.2%，小于3.0%,样品放置24小时内稳定。 重现性 同一样品，取5份，各约0.1g,置100ml量瓶中，精密称定，加稀乙醇至近刻度，超声处理30分钟,放冷,用稀乙醇稀释至刻度,混匀,过滤,取续滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定。相对标准偏差为3.62%，小于5.0%。 加样回收率 取已知含量的样品5份(约0.15g),精密称定，分别置100ml量瓶中,各精密加入每1ml含360μg的2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液2ml,加稀乙醇至近刻度，超声处理30分钟,放冷,用稀乙醇稀释至刻度,混匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定,平均回收率为99.1% 样品测定 对三批中试产品，采用新制订的含量测定方法测定，其结果如下。 【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》20xx年版一部附录VI D)。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(25:75)作为流动相，检测波长为320nm，理论板数按2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算，应不低于xxxx。 对照品溶液的制备 取2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含5μg的溶液，作为对照品溶液。 取约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细, 加稀乙醇至近刻度，超声处理30分钟，放冷，加稀乙醇稀释至刻度，混匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 测定法 精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。 本品每片含制何首乌按2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(CHO)计，应不低20229于1.6mg 三批中试样品含量测定数据表 ????????????????????????????????? 批 号 取样量(g) 峰面积 含量(mg/片) ????????????????????????????????? xx0301 0.1033 1329.94 2.07 xx0302 0.1047 1344.995 2.07 xx0303 0.1068 1380.16 2.08 ????????????????????????????????? 根据三批中试样品含量测定数据和《中国药典》xxxx年版一部制何首乌项下含量限度，确定本品每片含制何首乌按2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(CHO)计，应不低于1.6mg 20229 三、稳定性试验研究 依据《中药新药质量稳定性研究的技术要求》，将拟上市铝塑包装的景天祛斑片用景天祛斑片质量标准(草案)及《中华人民共和国药典》20xx年版一部附录?? C微生物限度检查法对三批中试产品进行试验。经对拟上市铝塑包装的景天祛斑片置常温下放置考查三个月;又经对拟上市铝塑包装的景天祛斑片置温度37?2?，饱和食盐水条件下放置6个月(相当于常温下二年)，按稳定性重点考察项目(性状、鉴别、崩解时限、含量测定、微生物限度检查等)检测。实验结果都表明该品种放置过程中质量稳定，包装材料对质量无影响。 四、临床研究综述 景天祛斑片与景天祛斑胶囊工艺无质的改变，根据《药品注册管理办法》规定，现申请减免临床研究，并免报下列资料:药理毒理研究资料综述、主要药效学试验资料及文献资料、急性毒性试验资料驻文献资料、长期毒性试验资料及文献资料;依赖性试验资料及文献资料、临床研究资料综述、临床研究计划与研究、临床研究者手册、知情同意书样稿、伦理委员会批准件、临床研究报告。 主要参考文献 《中国药典》xxxx年版一部 国家药典委员会 《中国药典》xxxx年版二部 国家药典委员会 《中国药典》20xx年版一部 国家药典委员会 《现代实用中药鉴别技术》人民卫生出版社 《中成药中的药材薄层色谱鉴别》人民卫生出版社