人工合成偶氮类色素胭脂红的食品检测和毒性研究道

人工合成偶氮类色素胭脂红的食品和毒性研究道 同济大学预防医学院 硕士学位人工合成偶氮类色素胭脂红的食品检测和毒性研究 姓名:曾盈 申请学位级别:硕士 专业:预防医学 指导教师:蔡智鸣张欣文 20070501 摘要 摘要目的:了解部分上海市售食品中人工合成偶氮类色素胭脂红的含量水平，并探讨其对黑腹果蝇及体外培养,，,,,,细胞的毒性作用，为食品卫生学研究提供实验数据。方法:?采用紫外可见吸收光谱确定检测波长，运用高效液相色谱技术，结合溶剂提取的超声波震荡、摇床振摇、低温浓缩等前处理方法，对部分上海市售食品中的胭脂红进行定性、定量分析;?经口喂饲果蝇不同浓度胭脂红，通过急性毒性试验测定胭脂红,,,,，生存试验检测果蝇寿命，比色法测定不同时间果蝇体内总,,,活性及,,,含量;?通过,,,,,,检测不同组果蝇头部,,，,,,,,,、,,,,,,及,,;,, ,种抗氧化酶基因的,,,,表达差异;?在单层培养的,,,细胞中加入不同浓度胭脂红染毒培养，用,,,,检,贝～,,,,细胞,,,的损伤情况。结果:?根据现有国家，在随机采集的,,种市售被检测食物样品中，,种禁止添加人工色素的食品违规添加胭脂红，,种胭脂红含量超标，,种添加量接近国家标准允许的极限。?急性毒性试验中，胭脂红浓度与雌雄果蝇的死亡率呈剂量(反应关系。生存试验中各浓度组雌雄果蝇的半数死亡时间、平均寿命及平均最高寿命均较对照组缩短俨,,(,,,,自,’,,(,,)，且存在剂量(反应关系。随着胭脂红染毒时间的延长和染毒浓度的增加，雌雄果蝇体,,,活力明显下降、,,,含量明显升高,,,,(,,)，呈剂量(反应关系。胭脂红对雄性果蝇的损害大于雌性。?胭脂红染毒,,天后，雌雄果蝇体内,,,,,,的,,,,表达水平均较对照组降低。?各染毒组彗星细胞率、彗星细胞的尾长、尾部,,,含量及尾矩与胭脂红浓度正相关，呈剂量(反应关系。结论:部分上海市售食品中存在人工合成色素胭脂红滥用的情况。胭脂红可缩短果蝇寿命，促进果蝇体内脂质过氧化反应，降低,,,活性和,,,,,,的,,,,表达水平，破坏氧化和抗氧化系统的平衡。胭脂红对体外培养,,,细胞,,,有损伤作用，具遗传毒性。鉴于本研究中显示的胭脂红的毒性作用，建议降低食品卫生标准中胭脂红的最高允许添加量，进行安全性再。关键词:胭脂红，高效液相色谱，黑腹果蝇，半数致死浓度，生存试验，超氧化物岐化酶，丙二醛，逆转录聚合酶链反应，,，, ,,,细胞，碱性单细胞凝胶电泳 ,,,,,,;, ,,,,,,,,,,,,;,,,,:,,, ;,,,,,, ,, ,,,;,,, ,,，,,, ,,,,,,;,,, ,,,,,,,,; ,,, ,,,,,,,，,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,,,; ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,，,,,, ;,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,(,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,;,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,,:(堇),,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,;,,, ,,, 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,,,,，,,,,,,,, ,,,,，,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,，,,,,,;,,,,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,,，,，, ,,,，,,,,,,,, ,,,,,,;,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,, ，，， 符号说明符号说明 学位论文版权使用授权书 本人完全了解同济大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，同意如下各项内容:按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并采用影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文;学校有权提供目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务; 学校有权按有关规定向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版;在不以赢利为目的的前提下，学校可以适当复制论文的部分或全部内容用于学术活动。 学位论文作者签名: 年 月 日 同济大学学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名: 年 月 日 第,章引言 第,章 引言 食品添加剂色素，可分为天然和人工合成两大类。前者一般较为安全，后者由于原料多来源于煤焦油，可能具有一定的毒性，但由于其成本低廉，色泽鲜艳，着色力强，配色方便，在食品生产加工行业中被广泛应用。胭脂红(,,,;,,,,,、;,;,,,,,, ,,, ,、,,, ;,;;,,,)，又叫丽春红,,，是目前我国褂米罟惴骸?昧孔畲蟮囊恢值ヅ嫉嗳斯ず铣缮兀糜谑称贰?稀??贰?逼贰?橇稀?滩荨?婢摺?称钒安牧系鹊淖派,淙玖纤鞴欤ǎ茫铮欤铮?，,,,,，,工)名称:,(，(,,,, ,,, ,，中国国家标准编号:,,,,,,，,,,,,,。北美(美国、加拿大)、北欧(丹麦、挪威)禁止在食品中添加胭脂红，欧盟、日本允许使用，但对其使用范围和最高使用量都有严格规定。,,,,,,,“食品添加剂联合专家委员会” (,,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,，,,,,,)制订出胭脂红等偶氮类人工色素的每日容许摄入量(,;;,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,，,,，)值为,”,,,,,,(,, ,,)，《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准,, ,,,,—,,,,》规定，胭脂红在食品中的使用量上限为,(,, ,,,,。我国目前允许使用的,种人工合成食用色素中有,种为偶氨类化合物(胭脂红、苋菜红、新红、诱惑红、柠檬黄和日落黄)，胭脂红等偶氮类色素用于食品着色一直存在争议。由于各种食用色素在人群中暴露量的流行病学数据很难准确估计，所以危险性评估主要依靠动物试验数据，但有关其研究大部分尚停留在整体和细胞水平，阴性与阳性结果并存，分子机理方面的研究报道很少，且近期的文献并不多，本文对胭脂红已有的安全性研究作一综述。,(, 结构与理化性质 胭脂红化学名称:,—,,一磺酸一,一萘偶氮),,一羟基(,，,(萘二磺酸三钠盐 (,,,,,,,,,?,,,,,,,,,—,一(,?,,,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,)一,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,)，为,(氨基萘,,一磺酸钠经重氮化后与,?萘酚(,，,(二磺酸钠偶合而成的染料，属于单偶氨色素。胭脂红通常被描述为钠盐，钙盐和钾盐也允许使用【，】。分子式:,,,,,,,,,,,,，,,,,,(,,,,，相对分子质量:,,,(,,(按,,,,年国际相对原子质 第,章引言量)【,】。结构式: ,, ,,,章, 一,。盘, 尊,。,,,, ,,, ,, 。,, 胭脂红为红色至深红色粉末或颗粒，无臭。易溶于水、甘油，微溶于乙醇，不溶于油脂，水中溶解度约为,(,, ,,,,(,,?)。耐光性较好，热稳定性略差，高温处理时易被还原褪色，耐还原性、耐氧化性及耐细菌性较差，对柠檬酸和酒石酸稳定，遇碱变褐色。胭脂红对,,,，和,,,，基本稳定，对,,,，十分敏感，可结合生成新的黄色物质，,矿，对胭脂红有明显的增色效果，,,”可以和胭 脂红结合形成不溶物,,,。,(,,水溶液色调呈鲜艳的红色。,(,生物学效应,(,(, 吸收、代谢和排泄 在肠道，约有,,种细菌表达偶氮还原酶，哺乳动物肠壁细胞中也存在偶氮还原酶,】;在肝脏，偶氮还原酶存在于肝细胞微粒体和肝细胞胞质中。,,,,,等在用胭脂红、苋菜红等,种偶氮食用色素为底物对大鼠盲肠菌群和肝微粒体中的偶氮还原酶无氧状态下活性进行比较的研究中发现，,套偶氮还原系统中均以胭脂红的还原率最高，并且大鼠盲肠菌群对胭脂红的偶氮还原能力为肝微粒体的,,倍，说明胭脂红在肠道菌作用下可被还原为芳香胺进而从肠道吸收入血【,,，在偶氮色素代谢过程中，肠内还原酶的作用更为主要【,，,，,,。大、小鼠长期研究显示胭脂红在小鼠胃肠道中转化为黄色代谢物【,】。 ,,,,,,,,等给雌雄,,,,,,白化大鼠、雄性,,(,小鼠和,,,,,,(,,,,,,,豚鼠一次性喂饲,, ,,,(,, ,,),,,标记的胭脂红，, ,内在胆汁中可检测到,(,,,,(,, , 第,章引言的放射活性，,, ,内，,,,,,,从粪便和尿液中排泄出来，少于,,,,,以,,,,,形式释放，各组织中未发现放射性蓄积。用未标记,,,的胭脂红,, ,,,(,, ,,?,,,)喂养雄性大鼠,, ,后一次性喂饲标记,,,的胭脂红以确保胭脂红的代谢途径不变，在各组织中也未发现明显放射性蓄积。对怀孕母鼠口饲含有标记,,,的胭脂红后，虽然其体内清除率与未怀孕大鼠相同，但在胎鼠体内发现少量放射性物质残留(,(,(,(,,)。色谱法在,种动物尿液中均检出对氨基萘磺酸和,(羟基(,(氨基萘(,，,(二磺酸，在小鼠尿中发现未代谢的胭脂红。,种动物粪便中均检出上述,种化合物【,,,。,(,(,急性毒性 胭脂红对小鼠经口,,,,为, ,,, ,,,(,, ,,)，腹腔注射,,,,为,, ,,,,,,(,, ,,)【,,】;大鼠经口,,,,为,, ,,, ,,,(,, ,,)，腹腔注射,,,,雌性为, ,,,,,,(,, ,,)、雄性为,,, ,,,(,, ,,),,,,。,(,(,慢性毒性 一项用小鼠进行的长期毒理学研究显示在,, ,的试验期内，胭脂红不同剂量组(,、,(,,,、,(,,,、,(,,,和,(,,,)未观察到小鼠死亡、体重增加、器官增加和肿瘤，前,个月，,(,,,和,(,,,两个高剂量组小鼠出现轻度贫血，,(,,,组肝脏泡沫网状内皮细胞轻度增加。据此确定胭脂红的未观察到损害作用的剂量(,,,—,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;, ,,,,,，,,,,,)为,(,,,，相当于,, ,,,(,,,,?,,,),,,,。 给大鼠摄入,,,, ,,,(,, ,,?,,,)胭脂红，在,,, ,的观察中一只大鼠出现肝脏中肉瘤，两只死亡【,,,。,,,,,,,等的研究显示部分雌性大鼠长期口饲,,胭脂红后摄食量减少，体重减轻，心、肝、肾的相对重量增加，但组织学和血液学指标无明显改变【,,】。,,,,,,,等给不同组别两代,,,,,,大鼠喂饲,、,, ,,,(,,,,?,,,)、,,, ,,,(,, ,,?,,,)及,,,, ,,,(,, ,,?,,,),,,旨红，,,代喂饲,, ,，,,代雌雄分别观察,,, ,和,,, ,，所有动物皮毛呈粉红色，高剂量组体重减轻，饮食量正常，中、高剂量组饮水量增高，同时盲肠扩大，粪便软化黄染，高剂量组雌性大鼠尿液中蛋白含量升高，据此推测胭脂红的,,,,,为,,, ,,，,(埏,,?,,,),,,,。 , 第,章引言,(,(,致敏性 动物试验显示胭脂红对皮肤和粘膜无明显刺激作用【,,,。,,,,,,,,,等 调查的,,个过敏症患者中，,,,的患者对胭脂红有超敏反应，但这一比例并不高于其他合成色素和阿司匹林的致敏率【, ,,。，,,,,等给,,名,,(,,,月龄的儿童服用胭脂红、柠檬黄、日落黄、赤藓红四种人工合成食用色素，根据试验结果推测世界上,,(,,,的儿童对合成食用色素有超敏现象，,(,,,的儿童对阿司匹林有超敏反应【,,】。,,,,,等,,,,年在瑞士发放,,,,份调查问卷显示:,(,,被调查者有食用胭脂红而导致的哮喘、荨麻疹等超敏反应经历【,,,。,,,,,等报道一例因口服含,, ,,胭脂红的安慰剂而导致白细胞溶血性脉管炎的病例，停药,月后，症状消失【,羽。,(,(,致突变性 体外试验:胭脂红、日落黄、苋菜红等合成偶氮食用色素及其还原产物在,,,, ,,,,(,,,,、,,,,,，，,,,,)中均为阴性【,,捌，但,,,,,,,,,等发现偶氮食用色素的肠道菌还原产物在大肠埃希菌差异致死试验(,,;,,,,;,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,)和,,,, ,,,,(,,,,,，(,,)中阳性,,?。 体内试验:,,,,,,,等报道胭脂红即使在,,，值范围内使用也可在小鼠骨髓细胞中引起染色体畸变现象，具有遗传毒性，建议将胭脂红排除在食用色素名单之外【,,,。端礼荣等采用胭脂红与柠檬黄等质量混合的人工色素，按, ,,,(,,,,?,,,)、,, ,,,(,, ,,?,,,)及,,, ,,,(,, ,,?,,,)的剂量给不同组别, ,龄雄性小鼠灌胃法连续染毒, ,，第,, ,加强一次，第,, ,后取其双侧附睾丸做精子畸形试验，发现混合色素各剂量组诱发小鼠精子畸变率均高于蒸馏水组，呈剂量(反应关系，高剂量对精子的毒性己接近阳性对照环磷酰胺,, ,,,(,,,,?,,,)〔,,,。,,,,,等观察到喂饲小鼠,, ,,,(,, ,,),脂红, ,后即可用,,,,技术在结肠、胃腺和膀胱细胞中检测到,,,损伤，结肠和膀胱细胞中的,,,损伤可持续,, ,,,,,。,,,,,,等用胭脂红、苋菜红、诱惑红等偶氮食用色素分别喂饲雄性,,,小鼠，,,,,检测,,,损伤，发现喂饲, ,后它们均可在,, ,,,(,,,,)的较低剂量引起小鼠结肠细胞,,,损伤，接近各自,,，值，,,, ,,,(,, ,,)胭脂红可引起小鼠胃腺、膀胱细胞,,,损伤;,,,, ,,,(,, ,,)胭脂红喂饲小鼠,, ,后，肝、肾、膀胱、肺细胞,,,损伤与对照组均有显著性差异【,,,。 , 第,章引言,(,(,生殖与发育毒性 ,,,,,,,,用小鼠做传代试验，各剂量组(,、,(,,,、,(,,,和,(,,,)未发现生殖方面的不良反应，新生鼠大小、体重及性别方面无显著性差异，但仔鼠出生, ,和,, ,后,(,,,组雌雄平均体重均较对照组明显增加【,,,。 对,,,,,,大鼠的胚胎毒性研究显示，,,,,(,,,, ,,,(,, ,,?,,,)剂量下未发现畸形和胚胎死亡田,。,,胭脂红喂养大鼠，其后代出现肾盂扩张，但肾脏组织学研究未发现明显病理改变【,,,。,,,,,,,等的三代,,,,,,雌、雄大鼠试验中，,,代断乳后即开始喂饲胭脂红，,,、,,代终生暴露于胭脂红，包括宫内、怀孕、哺乳各阶段，怀孕后期雌鼠的尸检未发现和处理有关的阳性结果，子代肝脏的重量略有下降，尿液中的成分没有明显变化，骨骼发育略提前。组织学检查与宫内发育未见异常。本试验确定胭脂红的,,,,,为,,,, ,,,(,, ,,?,,,)桫,。,(,(,神经行为毒性 ,,,,,,,,用含胭脂红,、,(,,,、,(,,,和,(,,,的饲料 喂养,,代小鼠, ,，,,代小鼠, ,，发现,(,,,组雄性,,代出生后第, ,平面翻正反射受到明显影响，,(,,,和,(,,,组雄性,,代在多重,型水迷宫试验中所需要的学习时间和学习次数显著高于对照组，并呈剂量(反应关系。据此试验结果推测胭脂红的,,,,,为,,, ,,,(,, ,,?,,,)〔,,,。,(,(,细胞毒性 胭脂红对体外培养的大鼠胚胎肝实质细胞有中等程度的细胞毒性作用，可抑制大鼠肝、肾线粒体呼吸链，并有剂量依赖性【,引。大鼠以,,，值半量摄入胭脂红等食用合成色素混合物,周后，分离培养肝细胞，“色氨酸热解物(,” (,(,,,,,,,，,(,,,,,,,,?,,,,,,,,,〔,，,,,】,,,,,,，,,,,,,,)染毒,, ,，细胞的糖异生和尿素合成量显著低于对照组，提示在,,，剂量下，胭脂红可削弱肝细胞在致癌物质中暴露时的糖异生和尿素合成能力，对,,,,,(,的毒性效应有加强或协同作用【,,,。,(,毒性机制研究 , 第,章引言 胭脂红等偶氮化合物在动物体内的活化过程非常复杂阱】，毒性机制主要围绕其产生亲电物和自由基来解释。 偶氮化合物在体内还原后可形成两种芳香胺衍生物，其经,(羟化(细胞色素,(,,,酶、黄素加单氧酶)、酯化(乙酰转移酶、磺基转移酶、葡糖醛酸转移酶)等反应后可自发裂解形成亲电物，攻击,,,、,,,和蛋白质【,，,,〕。 胭脂红还原产物中萘环上邻位的羟基、氨基并不稳定【,,,，邻位环羟基芳香胺在,,存在下可自发产生自由基，进而再与体内物质代谢产生一系列活性氧 (,,,;,,,, ,,,,,, ,,,;,,,，,,,)〔,,】。,,,,,,,,,等在偶氮食用色素的肠道菌还原产物中检测到过氧化阴离子的产生，此反应可被活化的超氧化物歧化酶(,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,，,,,抑制，而未活化的,,,对超氧阴离子的生成无影响【,?。也有人认为细胞色素,,,,系统和过氧化物酶介导的酶促反应可能参与芳香胺氧化产生自由基的过程,引。 此外，偶氮色素可不经还原过程，直接被过氧化物酶氧化。,,位的羟基基团在此代谢过程中扮演着中心的角色。氧化反应第一步的实质是羟基基团的单电子氧化，并产生萘自由基，此萘环的,,位的碳原子随后发生单电子氧化反应，水亲核攻击后，偶氮键破坏【,,,，产生重氮阳离子【,,】和,，,(二羟基萘醌，前者可损伤,,,〔,,,，后者进一步代谢生成,，,(萘醌、半醌自由基，产生,,,,,,,。 目前食品中偶氮人工色素滥用已成为危害食品安全的重要原因之一。,,,,,制定的胭脂红,,，值为叫,,,(,, ,,),,,,，而其评估引用的两篇文献中,,,,,分别为,, ,,,(,, ,,?,,,)和,,, ,,,(,, ,,?,,,)，按照安全系数,,,来计算，,,，值应为,(,, ,,,(,, ,,)，但,,,,,对此没有做出解释【,引，欧洲的食品添加剂安全评估报告对这一矛盾也提出质疑【,】。迄今为止各国对胭脂红的评估报告中均缺乏体内遗传毒理学试验数据【,,】。考虑到胭脂红等偶氮色素使用的广泛性，及其可在极低剂量引起,,,损伤，应进一步探索其毒理学意义，进行安全性再评价。,(,实验技术路线: ,第,章引言 , 第,章市售食品中胭脂红的,,,,测定 第,章 市售食品中胭脂红的,,,,测定 胭脂红(,,,;,,, ,,)是目前我国使用最广泛、用量最大的一种单偶氮类人工合成色素。近年来胭脂红毒理学试验显示其具有一定的致突变作用【,,刀】。美国、加拿大、挪威禁止在食品中添加胭脂红，中国、欧盟、日本等允许使用，但对其使用范围和最高使用量都 有严格规定。《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准,, ,,,,(,,,,》(以下简称《卫生标准》)规定，胭脂红可严格限量用于果汁饮料、配制酒、糖果、冰淇淋等食品的着色，而不能用于红肠肠衣外的肉制品【,,】。为保护食用者健康安全，了解市售食品中偶氮型人工合成色素胭脂红的含量水平，本文采用,,,,法，结合溶剂提取的超声波震荡、摇床振摇、低温浓缩等前处理方法，对部分饮料类、肉制品类、糖果类等市售食品中人工合成色素胭脂红的含量进行检测。,(,材料与方法,(,(,仪器与试剂 ,,，,,,,, ,,(,,,,,(,,)高效液相色谱(紫外检测器);,,,,,,,紫外(可见分光光度计;,，,,，,,,,纯水系统;,,(,高速组织捣碎机;,,,,,超声波发生器;,,,(,,,,变温摇床;,,,,, ,,,,,旋转蒸发浓缩装置;,,,(,(，，，)循环水式真空泵;,,,,,恒温水浴锅;,,,,(,离心机;,,,,,,电子天平。 甲醇(迪马公司,,,,色谱纯);试验用水经纯水系统处理;胭脂红(上海试剂商店);以甲醇,水(,:,，,?)混合物为溶剂配,,,, ,,, ,,,,胭脂红标准储备液。,(,(,采样与处理 ,,,,年,,从上海市杨浦区某农贸市场及某大型超市随机采购多种有色食品作为样品。饮料类样品经,(,,?,微孔滤膜过滤后进样【,,】。其余样品分别称取,, ,，经高速组织捣碎机粉碎后放入装有以甲醇,水(,:,，,,,)混合物为溶剂的 , 第,章市售食品中胭脂红的,,,,测定三角烧瓶内，超声波震荡,, ,,,，在,,?摇床振摇,, ,,,，减压抽滤并反复提取,次，合并滤液，用正己烷萃取分液，将水相低温浓缩，,,,, ,,,离心后以甲醇,水(,:,，,?)混合溶剂定容至,,(,, ,,，样品溶液经,(,, ,,滤膜过滤后进行色谱测定。每一种食品做三个平行样。,(,(,条件与方法,(,(,(,选择入,,,, 用,,,,,,,紫外可见分光光度计对,(,, ,,,,胭脂红标准溶液在,,, ,,,,,, ,,,,区间进行吸光度全扫描，其,,吸收光谱见图,(,。最大吸收波长,疆为,,, ,,,,，以此为,,,,检测波长。 图,(,胭脂红,,吸收光谱图,(,(,(, ,,,,分析条件 色谱柱:,,,,(,,;, ,,(,,,，,,,,,(, ,,,, ，(,(，, ,,,;柱温:,,。,;流动相:甲醇,水(,:,，,?);流量,(, ,,,,,,;进样方式:自动;进样量,, ，(,,;检测波长,,, ,,,,。,(,(,(,测定方法 以甲醇,水(,:,，,?)混合溶剂稀释胭脂红标准储备液配制,(,, ,,,,，,(,,,,,,，，,,(, ,,,,，,,(, ,,,,，,,, ,,,,的系列标准溶液，每个浓度重复,次后， , 第,章市售食品中胭脂红的,,,,测定对特征峰面积积分，以峰面积对浓度绘制标准曲线并计算线性回归方程为,,,,(,,×,,,,(,(,,,,,,，相关系数，(,,(,,,,。 选择各类食品样品分别进行加标回收试验，其回收率为,,(,,”,,,,(,,。重复测定,(,, ,,,,胭脂红标准溶液,次，检验方法的精密度，变异系数为,(,,,。,(,结果 标准品与样品中胭脂红的,,,,色谱图见图,(,、图,(,，其保留时间是,(,,,,。根据特征色谱峰保留时间定性，峰面积积分后对照标准曲线定量。每个样品重复测定,次，经计算样品中胭脂红含量见表,(,。 蛳 啪 响应位 。 图,(,标准品中胭脂红的,,,,色谱图 佃, 响 应,, 值 ,, ,, ,(, ,, ,(, ,(, ,, ,(, ,(, .