roche lightcycler 480 中文操作说明

roche lightcycler 480 中文操作说明 ? LightCycler 480 中文操作说明 罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门 February 2008 LightCycler 480 中文操作說明 目录 一. 启动机器与软件 3 5 二. 软件设定 --- 开启新实验 三. 样品编辑 9 12 四. 结果 18 五. 报告 六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输 19 入) 七. 使用者管理 19 2 LightCycler 480 中文操作說明 一( 启动机器与软件 , 启动机器 1. 机器主开关位于机器右后方。 2. 机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转 变成稳定橘色灯，警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟)，表 示机器已经启动完成。 左警示灯 右警示灯 机器状态 橘 *闪烁* 橘 *闪烁* 正在初始化 机器启动完成 绿 橘 96/384孔盘还未放入 绿 橘 *闪烁* 96/384 孔盘正在放入中 机器启动完成 绿 绿 96/384 孔盘已经放入 绿 *闪烁* 绿 *闪烁* 实验进行中 3 LightCycler 480 中文操作說明 3. 按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96 或 384 孔 盘。放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。 , 启动软件 1. 开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。 User name: OPERATOR Password: LC480 2. 开启 LightCycler 480 软件，并输入正确的使用者与密码。 4 LightCycler 480 中文操作說明 二(软件设定-- 开启新实验 , 设定新实验 1. 软件开启后，会进入主画面。点选 “New Experiment”。 2. 出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的 按钮。 5 LightCycler 480 中文操作說明 , 设定实验 , 若要套用设定好的实验步骤 (Template)，请跳至 6.。 1. 在实验设定画面上方，先选择适当的 Detection Format。选项包含: 另外可再点选 “Customize” 勾选所需的滤片组合。 2. 输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul，而 384 well plate 范围 为 5-20 ul。 6 LightCycler 480 中文操作說明 3. 设定实验步骤 (Program) , 设定 program，包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。利用 『+』与 『,』增加或 删除步骤。 , 设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR) program设定成 『Quantification』，而 Melting Curve program 设 定成『Melting Curve』。 4. 设定详细温度变化 (依照不同实验与设计而有所不同) , 点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明 书来设定，利用 『+』与 『,』增加或删除步骤。需要设定的参 数包含 Target (?) 目标温度，Acquisition Mode (荧光侦测模 式)，Hold (hh:mm:ss) 停留时间。Ramp Rate (?/s) 为升降温速 度，范围如下: Ramp Rate (?/s) Heating up Cooling down 96-well Block 1.0 – 4.4 ?/s 1.0 – 2.2 ?/s 384-well Block 1.0 – 4.8 ?/s 1.0 – 2.5 ?/s , 若设定温度低于 50?，请把 Ramp Rate 调整成 1.5?/s (96 well) 或 2.0?/s (384 well)。 7 LightCycler 480 中文操作說明 5. 将实验步骤储存成 『Template』以便下次进行套用。点选左下角 “Save As Template” 即可把此步骤储存起来。 6. 若要进行套用时，请直接点选窗口左下角 “Apply Template” ，选择欲套用之实验步骤 即可。 7. 设定完成后点选 “Start Run” 开始进行实验。 8. 跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。 , 实验进行中会进入另一个 Data窗口，窗口下方按键功能如下: , End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。 , + 10 Cycles : 实时增加循环数目。 , Abort Run: 马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结 果将不储存。 8 LightCycler 480 中文操作說明 三(样品编辑 , 将样品分群 1. 点选窗口左边的 “Subset Editor”。 2. 点选 “New” 新增新的群组，并将其命名。 3. 利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角 “Apply” ，此时 被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。 4. 以此方式依序将所有样品群组编辑完毕。 , 样品必须分群才能够独立分析，但是样品是否分群并不影响样品 的 Cp 值。 9 LightCycler 480 中文操作說明 , 编辑样品名称 1. 点选窗口左边的 “Sample Editor”。 2. 输入每个位置之样品名称 (Name)与重复 (Repl. Of)。 3. 若要更快速输入，可直接在左边的图上点选欲编辑之样品: , 若 A1, A2 与 A3 为三重复，在A2 与 A3 Repl. Of 字段上都填上A1 即为三重复。 , 在编辑过程中，可利用『Ctrl』+『C』复制文字，『Ctrl』+『V』 贴上文字。 10 LightCycler 480 中文操作說明 4. 根据实验分析模式，编辑 Abs Quant (绝对定量)，Rel Quant (相对定 量)，或 Genotyping 分页，设定 Sample Type。 绝对定量 (Abs Quant): 相对定量 (Rel Quant): 『Unknown』:未知浓度样品 『Standard』: 已知浓度品 『Target』: 目标基因 『Reference』: 参考基因 『Calibrator』: Control 样品 『Standard』: 已知浓度的样品 『Unknown』:未知浓度样品 , 其它分析模式之分页在此不赘述，请自行参考 LightCycler 480 Instrument Operator’s Manual。 5. 若设定成 『Standard』之样品请输入浓度。 6. 若想要将此样品编辑储存成 Template，可点选窗口左下角 “Save As Template” 即可，下次实验时可点选 “Apply Template” 进行套用。 11 LightCycler 480 中文操作說明 四(结果分析 , 点选左边的 “Analysis”，选取分析模式，并选择所需分析之 群组，如下图: 2. 1. 3. 分析模式 说明 ndAbs Quant / 2 Derivative Max 绝对定量 (自动法) Abs Quant / Fit Points 绝对定量 (手动法) Color Compensation 色差校正 (多色实验校正用) 基因扫描 (适用于High Resolution Gene Scanning Melting Curve, HRM 分析) 基因分型 (适用于 HybProbe 之基Genotyping 因分型实验) Relative Quantification 相对定量 Tm Calling Tm 分析 12 LightCycler 480 中文操作說明 , 绝对定量 (Absolute Quantification) 1. 点选下方的 “Calculate” 即可得到样品之 Cp 与标准曲线。 各個樣品之 Cp 值與濃度 重複樣品平均後之Cp值與濃度, 並自動計算標準差 2. 数值之数据输出: 在数值分析表上按鼠标右键，点选 “Export” 即可 输出成 .txt 档案格式。可直接以 Microsoft Excel 软件开启。 3. 图形输出: 在图形上按鼠标右键，点选 “Export” 即可输出成各种图 形档案格式。 4. 标准曲线储存: 点选窗口下方 Std Curve之 “Save as external” ，输入适合档名后即可储存在数据 库中。 13 LightCycler 480 中文操作說明 , 相对定量 (Relative Quantification) 1. 在选择相对定量分析后，出现下面窗口: , Reference Sample Location: 若 Reference (Housekeeping gene) 之样品 在同一盘上请选择 “In-Run”，否则请选择 “External” 可输入另一次 实验的数据一起分析。 , 建议将 Auto Pair 打勾让计算机自动将样品配对。 2. 进入 『Target』与 『Reference』分页，右下角显示 “Eff = 2” 表示将 目标基因与参考基因的 PCR 效率以 2.0 来计算。 3. 若需要校正目标基因与参考基因之 PCR 效率，则需要输入标准曲 线。在『Target』与 『Reference』分页之右下角，输入 (import) 标 准曲线。 14 LightCycler 480 中文操作說明 , Use in run:输入 (import) 同一盘上之标准曲线。 , Use external:输入 (import) 之前已储存于数据库中之标准曲线。 4. 点选 『Pairing』分页，检查计算机自动配对结果是否正确。其中， 红色表示 Unknown样品，绿色表示 Calibrator 样品。若欲外加配 对，则可直接以鼠标点选样品后按 “Add” 即可增加配对。 5. 点选 『Results』分页，点选 “Calculate” 即可得到计算结果。 6. 数值和图形输出与绝对定量相同。(请参考绝对定量) 15 LightCycler 480 中文操作說明 , 基因分型 (Genotyping) 1. 进入基因分型的窗口中。 2. 窗口右下角可设定分类方式 , Auto Group:自动分组 , In-run:标准品包含在本次实验中 , External:标准品在之前已储存之实验中 3. 点选 “Calculate” 即可得到分型结果。 16 LightCycler 480 中文操作說明 , Tm 分析 (Tm Calling) 1. 进入 Tm 分析窗口 2. 确认波峰数目 3. 选择模式 4. 点选 “Calculate:即可得到每个样品之 Tm 值。 17 LightCycler 480 中文操作說明 五(报告 (Report) 1. 将分析后结果储存后即可点选报告键。 数据储存 报告 2. 勾选想要呈现的报告内容。 3. 点选 “Generate” 即可产生报告。 4. 点选 “PDF” 即可将此报告储存成 .pdf 档案格式。 18 LightCycler 480 中文操作說明 六(数据转移至其它计算机 (数据输出与输入) , 数据输出 1. 点选 (navigator) 2. 点选所要输出的实验档案，点选 即可将档案输出成 .ixo 档案 3. 将此 ixo 档案以光盘或随身碟存到另一计算机 , 数据输入 1. 分析计算机上开启 LightCycler 480 软件，登入后点选 2. 点选 ，选取所要输入的 .ixo 档案并开启，即可开始 进行实验数据分析 3. 点选 将此实验档案储存至数据库中 七(使用者管理 1. 点选右方工具键。 2. 点选 “User and Groups”。 点选 “New” 即可新增使用者，并设定使用者名称、密码与权限。 19 LightCycler 480 中文操作說明 名句赏析,,,,, 不限 主 不限抒情四季山水天气人物人生生活节日动物植物食物 山有木兮木有枝,心悦君兮君不知。____佚名《越人歌》 人生若只如初见,何事秋风悲画扇。____纳兰性德《木兰词?拟古决绝词柬友》 十年生死两茫茫,不思量,自难忘。____苏轼《江城子?乙卯正月二十日夜记梦》 只愿君心似我心,定不负相思意。____李之仪《卜算子?我住长江头》 玲珑骰子安红豆,入骨相思知不知。____温庭筠《南歌子词二首 / 新添声杨柳枝词》 曾经沧海难为水,除却巫山不是云。____元稹《离思五首?其四》 愿得一心人,白头不相离。____卓文君《白头吟》 去年今日此门中,人面桃花相映红。____崔护《题都城南庄》 平生不会相思,才会相思,便害相思。____徐再思《折桂令?春情》 入我相思门,知我相思苦。____李白《三五七言 / 秋风词》 山无陵,江水为竭。冬雷震震,夏雨雪。天地合,乃敢与君绝。____佚名《上邪》 人生自是有情痴,此恨不关风与月。____欧阳修《玉楼春?尊前拟把归期说》 一往情深深几许,深山夕照深秋雨。____纳兰性德《蝶恋花?出塞》 两情若是久长时,又岂在朝朝暮暮。____秦观《鹊桥以?纤云弄巧》 执子之手,与子偕老。____佚名《击鼓》 花自飘零水自流。一种相思,两处闲愁。____李清照《一剪梅?红藕香残玉簟秋》 问世间,情为何物,直教生死相许,____元好问《摸鱼儿?雁丘词 / 迈陂塘》 一日不见兮,思之如狂。____司马相如《凤求凰 / 琴歌》 人生如逆旅,我亦是行人。____苏轼《临江以?送钱穆父》 世间无限丹青手,一片伤心画不成。____高蟾《金陵晚望》 林花谢了春红,太匆匆。无奈朝来寒雨,晚来风。____李煜《相见欢?林花谢了春红》 独立寒秋,湘江北去,橘子洲头。____毛泽东《沁园春?长沙》 身无彩凤双飞翼,心有灵犀一点通。____李商隐《无题?昨夜星辰昨夜风》 滚滚长江东逝水,浪花淘尽英雄。____杨慎《临江以?滚滚长江东逝水》 怕相思,已相思,轮到相思没处辞,眉间露一丝。____俞彦《长相思?折花枝》 此情可待成追忆,只是当时已惘然。____李商隐《锦瑟》 思悠悠,恨悠悠,恨到归时方始休。____白居易《长相思?汴水流》 取次花丛懒回顾,半缘修道半缘君。____元稹《离思五首?其四》 若是前生未有缘,待重结、来生愿。____乐婉《卜算子?答施》 雨打梨花深闭门,忘了青春,误了青春。____唐寅《一剪梅?雨打梨花深闭门》 少年不识愁滋味,爱上层楼。爱上层楼。为赋新词强说愁。____辛弃疾《丑奴儿?书博山道中壁》 自在飞花轻似梦,无边丝雨细如愁。____秦观《浣溪沙?漠漠轻寒上小楼》 20 LightCycler 480 中文操作說明 近水楼台先得月,向阳花木易为春。____苏麟《断句》 一骑红尘妃子笑,无人知是荔枝来。____杜牧《过华清宫绝句三首》 抽刀断水水更流,举杯消愁愁更愁。____李白《宣州谢脁楼饯别校书叔云 / 陪侍御叔华登楼歌》 疏影横斜水清浅,暗香浮动月黄昏。____林逋《山园小梅?其一》 人面不知何处去,桃花依旧笑春风。____崔护《题都城南庄》 时光只解催人老,不信多情,长恨离亭,泪滴春衫酒易醒。____晏殊《采桑子?时光只解催人老》 一生大笑能几回,斗酒相逢须醉倒。____岑参《凉州馆中与诸判官夜集》 天涯地角有穷时,只有相思无尽处。____晏殊《玉楼春?春恨》 问君能有几多愁,恰似一江春水向东流。____李煜《虞美人?春花秋月何时了》 似此星辰非昨夜,为谁风露立中宵。____黄景仁《绮怀》 菩提本无树,明镜亦非台。____惠能《菩提偈》 溪云初起日沉阁,山雨欲来风满楼。____许浑《咸阳城东楼 / 咸阳城西楼晚眺 / 西门》 春风得意马蹄疾,一日看尽长安花。____孟郊《登科后》 枯藤老树昏鸦,小桥流水人家,古道西风瘦马。____马致远《天净沙?秋思》 空山新雨后,天气晚来秋。____王维《山居秋暝》 人到情多情转薄,而今真个悔多情。____纳兰性德《山花子?风絮飘残已化萍》 同是天涯沦落人,相逢何必曾相识,____马致远《杂剧?江州司马青衫泪》 浮云一别后,流水十年间。____韦应物《淮上喜会梁川故人 / 淮上喜会梁州故人》 名句赏析,,,,, 不限 主题不限抒情四季山水天气人物人生生活节日动物植物食物 山有木兮木有枝,心悦君兮君不知。____佚名《越人歌》 人生若只如初见,何事秋风悲画扇。____纳兰性德《木兰词?拟古决绝词柬友》 十年生死两茫茫,不思量,自难忘。____苏轼《江城子?乙卯正月二十日夜记梦》 只愿君心似我心,定不负相思意。____李之仪《卜算子?我住长江头》 玲珑骰子安红豆,入骨相思知不知。____温庭筠《南歌子词二首 / 新添声杨柳枝词》 曾经沧海难为水,除却巫山不是云。____元稹《离思五首?其四》 愿得一心人,白头不相离。____卓文君《白头吟》 去年今日此门中,人面桃花相映红。____崔护《题都城南庄》 平生不会相思,才会相思,便害相思。____徐再思《折桂令?春情》 入我相思门,知我相思苦。____李白《三五七言 / 秋风词》 山无陵,江水为竭。冬雷震震,夏雨雪。天地合,乃敢与君绝。____佚名《上邪》 人生自是有情痴,此恨不关风与月。____欧阳修《玉楼春?尊前拟把归期说》 21 LightCycler 480 中文操作說明 一往情深深几许,深山夕照深秋雨。____纳兰性德《蝶恋花?出塞》 两情若是久长时,又岂在朝朝暮暮。____秦观《鹊桥以?纤云弄巧》 执子之手,与子偕老。____佚名《击鼓》 花自飘零水自流。一种相思,两处闲愁。____李清照《一剪梅?红藕香残玉簟秋》 问世间,情为何物,直教生死相许,____元好问《摸鱼儿?雁丘词 / 迈陂塘》 一日不见兮,思之如狂。____司马相如《凤求凰 / 琴歌》 人生如逆旅,我亦是行人。____苏轼《临江以?送钱穆父》 世间无限丹青手,一片伤心画不成。____高蟾《金陵晚望》 林花谢了春红,太匆匆。无奈朝来寒雨,晚来风。____李煜《相见欢?林花谢了春红》 独立寒秋,湘江北去,橘子洲头。____毛泽东《沁园春?长沙》 身无彩凤双飞翼,心有灵犀一点通。____李商隐《无题?昨夜星辰昨夜风》 滚滚长江东逝水,浪花淘尽英雄。____杨慎《临江以?滚滚长江东逝水》 怕相思,已相思,轮到相思没处辞,眉间露一丝。____俞彦《长相思?折花枝》 此情可待成追忆,只是当时已惘然。____李商隐《锦瑟》 思悠悠,恨悠悠,恨到归时方始休。____白居易《长相思?汴水流》 取次花丛懒回顾,半缘修道半缘君。____元稹《离思五首?其四》 若是前生未有缘,待重结、来生愿。____乐婉《卜算子?答施》 雨打梨花深闭门,忘了青春,误了青春。____唐寅《一剪梅?雨打梨花深闭门》 少年不识愁滋味,爱上层楼。爱上层楼。为赋新词强说愁。____辛弃疾《丑奴儿?书博山道中壁》 自在飞花轻似梦,无边丝雨细如愁。____秦观《浣溪沙?漠漠轻寒上小楼》 近水楼台先得月,向阳花木易为春。____苏麟《断句》 一骑红尘妃子笑,无人知是荔枝来。____杜牧《过华清宫绝句三首》 抽刀断水水更流,举杯消愁愁更愁。____李白《宣州谢脁楼饯别校书叔云 / 陪侍御叔华登楼歌》 疏影横斜水清浅,暗香浮动月黄昏。____林逋《山园小梅?其一》 人面不知何处去,桃花依旧笑春风。____崔护《题都城南庄》 时光只解催人老,不信多情,长恨离亭,泪滴春衫酒易醒。____晏殊《采桑子?时光只解催人老》 一生大笑能几回,斗酒相逢须醉倒。____岑参《凉州馆中与诸判官夜集》 天涯地角有穷时,只有相思无尽处。____晏殊《玉楼春?春恨》 问君能有几多愁,恰似一江春水向东流。____李煜《虞美人?春花秋月何时了》 似此星辰非昨夜,为谁风露立中宵。____黄景仁《绮怀》 菩提本无树,明镜亦非台。____惠能《菩提偈》 溪云初起日沉阁,山雨欲来风满楼。____许浑《咸阳城东楼 / 咸阳城西楼晚眺 / 西门》 春风得意马蹄疾,一日看尽长安花。____孟郊《登科后》 枯藤老树昏鸦,小桥流水人家,古道西风瘦马。____马致远《天净沙?秋思》 空山新雨后,天气晚来秋。____王维《山居秋暝》 人到情多情转薄,而今真个悔多情。____纳兰性德《山花子?风絮飘残已化萍》 同是天涯沦落人,相逢何必曾相识,____马致远《杂剧?江州司马青衫泪》 浮云一别后,流水十年间。____韦应物《淮上喜会梁川故人 / 淮上喜会梁州故人》 22 LightCycler 480 中文操作說明 论诗三十首?其四 (53人评分) 8.7 朝代:金朝 作者:元好问 原文: 一语天然万古新,豪华落尽见真淳。 南窗白日羲皇上,未害渊明是晋人。 写翻译 写翻译写赏析 写赏析纠错 纠错收藏 收藏评分:很差较差还行推荐力荐 参考翻译 写翻译 写翻译 译文 陶渊明的诗语言平淡、自然天成,摒弃纤丽浮华的敷饰,露出真朴淳厚的美质,令人读来万古常新。陶渊明自谓自己是上古时代的人,但并未妨碍他仍然是个晋人。? 参考赏析 写赏析 写赏析 赏析 这首诗是元好问评晋代诗人陶渊明。出于对当时诗坛雕琢粉饰、矫揉造作诗风的反感,元好问评论晋代诗人陶渊明时前两句说:“一语天然万古新,豪华落尽见真淳。”元好问崇尚陶渊明诗歌自然天成而无人工痕迹,清新真淳而无雕琢之弊。陶渊明的诗句自然质朴不假修饰,剥尽铅华腻粉,独见真率之情志,具有真淳隽永、万古常新的永恒? 作者介绍 元好问 元好问 元好问,字裕之,号遗山,太原秀容:今山西忻州:人;系出北魏鲜卑族拓跋氏,元好问过继叔父元格;七岁能诗,十四岁从学郝天挺,六载而业成;兴定五年:1221:进士,不就选;正大元年:1224 :,中博学宏词科,授儒林郎,充国史院编修,历镇平、南阳、内乡县令。八年:1231:秋,受诏入都,除尚书省掾、左司都事,转员外郎;金亡不仕,元宪宗七年卒于获鹿寓舍;工诗文,在金元之际颇负重望;诗词风格沉郁,并多伤时感事之作。其《论诗》绝句三十首在中国文学批评史上颇有地位;作有《遗山集》又名《遗山先生文集》,编有《中州集》。... 3. 23