乳酸菌检测方法乳酸菌检测方法
一、乳酸菌检测方法
植物乳杆菌的检验
1原理
植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下,于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落,根据长出的菌落数和稀释倍数,计算出活菌数。
2仪器与试药
2.1 仪器
超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱(60??1?)、恒温水浴锅、显微镜(10x—100x)、架盘天平(0—500g,精确至0.5g)、250ml锥形瓶、250ml盐水瓶、灭菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)、灭菌平皿(直径90mm)、灭...
乳酸菌检测方法
一、乳酸菌检测方法
植物乳杆菌的检验
1原理
植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下,于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落,根据长出的菌落数和稀释倍数,计算出活菌数。
2仪器与试药
2.1 仪器
超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱(60??1?)、恒温水浴锅、显微镜(10x—100x)、架盘天平(0—500g,精确至0.5g)、250ml锥形瓶、250ml盐水瓶、灭菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)、灭菌平皿(直径90mm)、灭菌试管(15mm×160mm)、灭菌L型玻璃棒等。
2.2 试药
酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂;无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯;水为双蒸馏水,其他化学试剂均为分析纯。
2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备
2.3.1培养基的组成
酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。
2.3.2培养基制备
将上述的各组分在80,90?加热使溶解,校正pH6.2,加蒸馏水至1000ml中,摇匀,分装于盐水瓶,每瓶100ml。在121?高压灭菌20分钟,冷却后备用。 2.4营养琼脂平板的制备
取冷至45?左右的MCA琼脂培养基,在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中,每平皿各约15ml,待冷却凝固后,备用。
2.5无菌生理盐水的制备
称取氯化钠9.0g,用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中,摇匀,分装于250ml三角瓶中,每瓶装90ml. 在121?高压灭菌20分钟,冷却后备用。
3供试品溶液的制备
以无菌操作法取检品10.0g,加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中,充分振荡10分钟,制成1:10样品悬液。再用无菌吸管吸取1:10的样品悬液1ml,注入盛有9ml无菌生理盐
-2-3-4水的试管中,充分振荡,制成1:10的稀释液。 按上述操作程序依次制成1:10、1:10、
-5-6-71:10、1:10、1:10等的稀释液,作为供试品溶液。
4 测定方法
-4-64.1 涂布分别吸取稀释级为10,10的样品稀释液各0.2ml,用无菌L形玻璃棒均匀涂布于固体培养基平板上,每稀释级重复2,3个平板。
4.2 培养 倒置,于35,37?厌氧培养24,48小时后,计算单个菌落。 5.3 计数 选取菌落数在30—300个平板进行有效活菌计数,并计算同一稀释级的平均数。 5 计算
计数后按下式进行样品中活菌的计算:
N×D×10
植物乳杆菌数(cfu/g)=————
0.2×W
N:平板中菌落数(同一稀释级数的平均值,cfu);
D:稀释倍数;
W:取样量(g)。
6结果
上述测定的植物乳杆菌含量为每1g样品中的活菌数量。
二、乳酸菌的作用
名称 含量 功能特点 使用方法
粪链球菌 200亿cfu/g 1、产生乳酸、维生素、酶及抑菌物将本品均匀混合于颗粒饲料或
质。 粉料中直接饲喂。每吨配合饲料
2、抑制大肠杆菌、沙门氏菌、金黄添加料参考如下:
色葡萄球菌的生长。 1、鸡、鸭、鹅:50克,全场全
3、饲料中添加,可大量减少抗生素期使用。(1-7日龄加倍使用效果
和酶的用量。 更佳)
4、提高免疫力,提高防病抗病能力,2、猪:50克,连续使用10-15
减少消化道、呼吸道疾病 。 天,全程使用效果更好。断奶前
5、降低粪便氨氮浓度,改善养殖环后一周连续使用,按每吨100-150
境。 克添加,可有效防止断奶腹泻。 嗜酸乳杆菌 200亿cfu/g 1、代谢产生乳酸、酶及抑菌物质。 在饮水中使用或混合于饲料中。
2、抑制大肠杆菌、沙门氏菌的生长,将本品均匀混合于颗粒料或粉
减少肠炎与腹泻。 料中直接饲喂,每吨配合饲料添
3、使消化道、呼吸道疾病减少,防加量参考如下:
病抗病能力提高。 1、鸡、鸭、鹅:50克,全场全
4、增强机体抗氧化能力,提高免疫期使用。(1-7日龄加倍使用效果
力 。 更佳)
5、降低粪便氨氮浓度,改善养殖环猪:50克,连续使用10-15天,
境。 全程使用效果更好。断奶前后一
周连续使用,按每吨100-150克
添加,可有效防止断奶腹泻 植物乳杆菌 200亿cfu/g 1、产生乳酸、维生素、酶及抑菌物将本品与其他益生菌混合均匀
质。 后,用于发酵饲料,每吨发酵饲
2、在发酵饲料中添加,既增加饲料料添加量参考如下:每吨发酵饲
的风味,促进动物的食欲,又有防腐料按1公斤添加。
作用。
3、抑制大肠杆菌、沙门氏菌的生长,
减少肠炎与腹泻。
4、提高免疫力,提高防病抗病能力,
减少消化道、呼吸道疾病 。
5、降低粪便氨氮浓度,改善养殖环
境。
四、乳酸菌的生产工艺
大多数乳酸菌属于兼性厌氧和异养菌,不像双歧杆菌那样要求严格厌氧条件,对营养要求也不如双歧杆菌高,许多菌可以在MRS培养基、牛乳、胡萝卜汁、番茄汁及其他蔬菜汁中良好地生长。对厌氧条件要求不高的乳酸菌,在小规模培养时可以采用静止培养或间歇搅拌的方式进行培养。
1、平板培养复壮:将在冰箱保藏的乳酸菌斜面种子采用划线的接种方法在乳酸菌平板
培养基上划线接种,于38?培养12h,使乳酸菌复壮,并形成单菌落;
培养基为按下述比例的混合物:酪蛋白胨1%、葡萄糖2%、酵母浸粉0.7%、牛肉
膏0.5%、柠檬酸三铵1.5%、磷酸氢二钾0.2%、无水乙酸钠0.5%、吐温-80 0.1%、
琼脂粉2%,pH自然,121?,灭菌20Min,备用。
2、制作摇瓶种子
将在平板中培养的乳酸菌菌落挑选典型的单菌落,接种到乳酸菌液体培养基中,采
用常规方法在1000ml三角瓶液体培养基上于37?培养8-12h,得到乳酸菌摇瓶种子;
所述培养基为按下述比例配置的混合液:大豆蛋白胨1%、葡萄糖1%、酵母浸粉
0.7%、牛肉膏0.5%、无水乙酸钠0.6%、磷酸氢二钾0.5%、柠檬酸三铵1.5%、吐
温-80 0.5%,pH自然,115?,灭菌20Min,备用。
(有条件可加入西红柿汁10%、 胡萝卜汁10%、蘑菇汁5%具体制法:将西红柿、
胡萝卜、蘑菇按照2:2:1比例加 入水中煮沸后,慢火煮20Min后 ,过滤去渣,最
后用自来水补齐所需要的溶液。)
3、生产一级种子液:按照以下配方配制一级种子培养基,经121?,灭菌45Min,pH
自然,冷却到40?以下,将上述步骤得到的摇瓶种子以8%(体积分数)的接种量,
接种于生产用的一级种子罐中,37?培养8-12小时,
原料 % 100mL/g 1L/g 1ooL/kg 1KL/Kg
豆粕粉(80目) 0.5 0.5g 5g 0.5kg 5kg
鱼粉(80目) 0.5 0.5g 5g 0.5kg 5kg
鱼蛋白胨 0.5 0.5g 5g 0.5kg 5kg
乳糖 0.2 0.2g 2g 0.2kg 2kg
玉米面(80目) 0.5 0.5g 5g 0.5kg 5kg
葡萄糖 1 1g 10g 1kg 10kg
氯化钠 0.1 0.1g 1g 0.1kg 1kg
磷酸氢二钠 0.15 0.15g 1.5g 0.15kg 1.5kg
增效剂 0.05 0.05g 0.5g 0.05kg 0.5kg
消泡剂 0.03 0.03g 0.3g 0.03kg 0.3kg
4、二级发酵(生产发酵):将得到的乳酸菌一级种子,以10%体积比例接种到生产发
酵培养液的发酵罐中,发酵液培养液的配方和控制条件同生产一级种子液,发酵
12h,得到发酵菌液。最后按照乳酸菌平板培养复壮所用的培养基和培养条件,对乳
酸菌发酵液的活菌含量进行常规平板计数检测。
5、三级发酵:
在工业生产时,当需要更大规模(20T以上发酵罐)的生产量时,还需要进行三级
发酵。
6、根据发酵活菌含量检测结果和目标菌数,计算出投料量。
7、投料搅拌:
8、喷雾干燥:
本文档为【乳酸菌检测方法】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑,
图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。