葡萄糖标准曲线

葡萄糖曲线 硫酸,苯酚法测定多糖含量标准曲线实验 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 试剂 葡萄糖标准液 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 蒸馏水 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 5%苯酚 1.0 振摇混匀 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 浓HSO 6.0 24 迅速振摇混匀，于室温放置30min后测定490处吸光度 葡萄糖浓度0.0 0.0125 0.025 0.0375 0.05 0.0625 0.075 0.0875 (横坐标) 吸光度A 调0 (纵坐标) 1、 葡萄糖标准液(0.1mg/mL):精密称取无水葡萄糖10 mg，用蒸馏水定容到100mL，混匀。 2、 5%苯酚:精密称取重结晶苯酚10 g，用蒸馏水定容到200mL，混匀棕色瓶保存。 硫酸,蒽酮法测定多糖含量标准曲线实验 序号 1 2 3 4 5 6 7 试剂 葡萄糖标准液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 蒽酮试剂 6.0 6.0 混匀，置于沸水中加热15 min，取出放冷水中15 min后测定625处吸光度 葡萄糖浓度(横0.0 0.025 0.05 0.075 0.1 0.125 0.15 坐标) 吸光度A (纵调0 坐标) 1、 葡萄糖标准液(0.1mg/mL):精密称取无水葡萄糖10 mg，用蒸馏水定容到100mL，混匀。 2、 蒽酮试剂:称取蒽酮0.2g，用浓HSO定容到100mL，混匀。临用时现配。 24 3、 苯酚,硫酸法测定葡萄糖标准曲线 试剂 序号 空白 1 2 3 4 5 6 7 8 9 标准G 0.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水 2.0 1.9 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 5%苯酚 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 混匀 浓硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 振摇5min,静置于10min，沸水20min冷却，490nm空白调出，比色 葡萄糖浓度 0(0 0(0125 0(025 0(05 0(075 0(1 0(125 0(15 0(175 0(20 吸光度A 0(0 4、 试剂: 5、 1、标准G(0.1mg/mL):精确称取105?干燥恒重的葡萄糖10 mg，加水定容到100mL。 6、 2、5%苯酚:精确称取10重结晶苯酚 5g，加水定容到100mL 7、 8、 9、 黄酮标准曲线的制备 试剂 序号 空白 1 2 3 4 5 6 芦 丁 0.0 0.5 1(0 2(0 3(0 4(0 5(0 5 ,亚硝酸 钠 0(3 0(3 0(3 0(3 0(3 0(3 0(3 静置于6min 1 0 , 硝 酸铝 0(3 0(3 0(3 0(3 0(3 0(3 0(3 静置于6min 4 , 氢氧化 钠 4 4 4 4 4 4 4 60 %乙醇(到10 ml) 5(4 4(9 4(4 3(4 2(4 1(4 0(4 摇匀 ，放 置1 5 m i n ，在 5 1 O nm处测 定其吸光度值 ; 样品浓度 0 0(01 0(02 0(04 0(06 0(08 0(1 吸光度A 10、 1、芦丁对照品溶液 精密称取 1 2 0?干燥至恒重的芦丁20m g，加入60 %乙醇(提取剂浓度一至)溶解 ， 定容至1 0 0 ml 容量瓶中 ，摇匀，制成0 .2 m g /ml 的芦丁对照品溶液。 11、 12、 13、 多酚测定 14、 1.1.3 试剂及溶液 没食子酸、 酒石酸钾钠、 硫酸亚铁、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钾、 石油醚、 乙醇等均为 国产分析纯。本试验用水均为双蒸水。 15、 各种溶液的配制: 16、 (1) 没食子酸母液: 精确称取没食子酸500 mg， 溶于蒸馏水中， 定容至100 mL作为母液， 分别吸取 2.5、 17、 5、 7.5、 10、 12.5、 15 mL于25 mL容量瓶中， 用蒸馏水定容， 制备成0.5、 1.0、 1.5、 2.0、 2.5、 3 mg/mL的标准液。 18、 (2) pH 7.5磷酸缓冲液1/15 mol/L的磷酸氢二钠溶液 (A液): 称取磷酸氢二钠 (GB1263) 23.877 g， 加 水溶解并定容至1 L。1/15 mol/L 的磷酸二氢钾溶液 (B 液): 称取经110?烘干2 h的磷酸二氢钾 (GB1274) 9.073 g， 加水溶解并定容至1 L。 19、 取A液85 mL和B液15 mL混匀， 即得pH 7.5的缓冲液。 20、 (3) 酒石酸铁溶液: 称取硫酸亚铁 (GB664) 0.1 g，酒石酸钾钠 (GB1288) 0.5 g， 加水溶解定容至 100 mL，此液可稳定10天。 21、 1.3 多酚的提取 22、 1.3.1 标准曲线的绘制 吸取不同浓度的标准液和对照品160 μL于5 mL离心管中， 加入酒石酸铁溶液800 μ L， 23、 加磷酸缓冲液至4 mL， 用水代替没食子酸作为对照，用1 cm的比色皿， 在540 nm处测定吸光度 (A)， 用 吸 24、 光度与对应的浓度进行线性回归， 得标准工作曲线， 如图1所示。 25、 实验结果表明 对于橄榄干粉多酚的提取， 其最优组合为A2B2C1D2， 即以50%乙醇溶液为提取剂， 在40? 条件下浸提2 h， 料液比为1:30， 提取2次， 此时的橄榄干粉多酚提取得率为32.13%。 多酚标准曲线的制备 试剂 序号 空白 1 2 3 4 5 6 0.0 0.1 0(2 0(3 0(4 0(5 0(6 没食子酸 0.16 蒸馏水 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 酒石酸铁溶液 1 1 1 1 1 1 1 磷酸缓冲液 摇匀 ，在540nm处测 定其吸光度值 样品浓度mg/mL 0 0(001 0(002 0(003 0(004 0(005 0(006 吸光度A