硕士论文-喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究

硕士论文-喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 华中农业大学 硕士学位论文 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 姓名:胡桂敏 申请学位级别:硕士 专业:基础兽医学 指导教师:袁宗辉;黄玲利 20080601 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 在猪、鸡和鱼可食性组织中高效液相色谱法的国家标准，建立的,(甲基喹嗯啉(,(羧 酸在鲤的肌肉、鱼皮和肝脏中的方法的定量限分别为,,,,,,,、,,,,,,和 ,,,,,,,，当肌肉、鱼皮和鱼肝中分别添,,,,,,，,，,,,,,,,，,,，,,，,,,,,,，,,， ,,，,,,(,,,,,时，回收率为,,(,,,,,(,,,。一～叫变异系数为,,,,,(,,,。线性方程 分别为,,,(,,,,,,,,(,,,(,,(,,,,)，,,,(,,,,,，,(,,,,(,,(,,,)(,,,(,,,,, (,,(,,,(,,,(,,,,)(由此可见，准确度和精密度符合定量分析方法的要求，在所选 定的浓度范围内，线性较好。 将体重约,(,(,一,(,,,的健康鲤,,,尾按体重分成两组，每组,,,尾，一组单次静注 喹烯酮,(,,,,,,,(,(，另一组口服喹烯酮,,,,,,,,,(,(。给药后分别于不同时间采集 血样，样品处理后,,,,检测。两种给药方式下血浆中均只检出原形药物。鲤静注 ,(,,,,,,,(,(，药时数据符合无吸收二室开放模型。分布半衰期,,口为,(,,,，消除半 衰期,,,为,,(,,,，药时曲线下面积,,,为,(,,(,,,,,)?,，表明喹烯酮在鲤体内分 布迅速，消除较慢。鲤口灌,,,,,,,,,(,(，药时数据符合有吸收一室开放模型，吸 收半衰期,，,,为,(,,,，消除半衰期,‰为,(,,,，药时曲线下面积,,,为,(,,(,,,,,,)?,， 达峰浓度,,默为,(,,,(,,,,,，生物利用度,为,(,,,，表明鲤口灌喹烯酮后吸收较快， 消除较慢，生物利用度低。 将健康鲤,,,尾连续饲喂混有,,,,,,,喹烯酮的饲料,,周后，分别于停药后,,、 ,,,，,,,，,,,、,,,、,,、,,、,,,、,,,、,,,、,,,、,,,采样，各采集点随机取样 ,,尾。剖杀后立即采集皮、肌肉、肝脏，后样品处理用,,,,检测喹烯酮及其代谢产 物在肌肉、皮肤、肝脏中的残留量。结果表明，停药后,,、,,,和,,,，喹烯酮在鲤 的皮肤、肝脏和肌肉中的含量已低于定量限;停药后,,,、,,,和,,,，脱二氧喹烯酮 在鲤的肝脏、皮肤和肌肉中的含量即已低于定量限;停药,,,、,,和,,,后，,(甲基 喹嗯啉一,(羧酸在皮肤、肌肉和肝脏中的含量即已低于定量限。本研究结果表明，喹 烯酮及其主要代谢物在鲤所有可食性组织中的消除速度以,一甲基喹噫啉(,(羧酸在肝 脏中的半衰期最长，故确定喹烯酮在鲤体内的靶组织为肝脏，残留标识物为,(甲基 喹噫啉一,一羧酸。肝脏中，,,,,浓度在停药后,,为,(,,,，,,,,,，停药后,,,即降,,,, 以下，其消除半衰期为,(,,,。根据毒理学研究，计算,,,,在肝脏中的,,,为 ,(,,,,,,。本研究表明停药后,,肝脏中,,,,含量就低于,(,,,,,,，据此确定喹烯酮在 鲤体内的休药期为零天。 本文所建立的分析方法灵敏度高，检测周期较短，检测费用较低，同时可作为 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 检测其他动物的参考以及可作检测其它喹嗯啉类药物的参考。本课题首次阐明了在 口灌和静注两种给药方式下，喹烯酮在鲤体内的药动学特征。首次阐明在连续饲喂 ,,周下，喹烯酮在鲤体内的分布和残留消除规律，提出了喹烯酮在鲤的休药期标准， 并建立，喹烯蜊及其代谢物的残留监控技术，为喹烯酮在鲤的安全性评价及其合理 使用提供了科学依据(将进一步促进水产养殖和食品安全事、，旷的蓬勃发展。 关键词:喹烯酮;鲤;药代动力学;残留 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 ,,,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,, ,,, ,,,,(,,,,,,,,;,,, ,,,() ,,,,,,,,:,,,,、,,„,,?,,,,,,,,,,,:,,,,(,,,, ,,,,,,, (,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,(,,,,),,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,(,,,,,,,,;,,,,,,,,, ,,,,,,,,，,,(,,, ,,,,,,，,,(,,,,,) ,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,，,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,,,,,,,,，,,,,,,,, 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本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的，并表示了谢意。 研究生签名:胡枯做时间:口,年,月,多日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存，汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，并授权中国科学技术信息研究所和北京万方数据股份有限公司将本人 学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并进行信息服务(包括但不限于汇编、 复制、发行、信息网络传播等)，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注:保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文)在解密后适用于本授权书。 ……鲐帑柱敏…名:袁辑 签名日期:,,年占月“日签名日期:年月日 注:淆将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之问 华中农业大学,,,,届硕,学位论文 ,前言 随着药物在动物养殖业上的应用，药物在促进生产发展的同时，所引起的残留 问题也日益严重。围内外先后爆发的重人食品安全事件使人们产生了心理恐慌，如 “疯牛病”、“红心鸭蛋”和“多宝鱼”事件。凶此，对新兽药进行食品安全性研究逐渐 得到各困的重视。如,,,就要求新兽药进行审批之日,,『。必须存靶动物中进行有效性 和安全性研究。如用于食品动物，还必须进行动物可食性产品中兽药残留安全评估 (,,,，,,,,;,,，,，,,,,)。欧盟也制定了多种法规来加强兽药和药物添加剂的管 理(,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,)。我国农业部颁布的兽药管理文件也要求用于食品动 物的新兽药研制应进行兽药残留研究(农业部，,,,,)。 喹嗯啉类(,,,,,,,,,,,,)是人工合成的具有喹嗯啉(,，,(二氧化物基本结 构的动 物专用药，具有广谱抗菌和促进生长的双重功效。随着毒理学的发展和人们对饲料 添加剂的安全性评价的不断重视，喹乙醇和卡巴氧等老一代喹噫啉类药物因具有较 强的毒副作用而受到严格限制(,,,,,，,,,,;,,,,,,,，,,,,)，,,,,年我国农 业部也开始禁止在鱼配合饲料中添加喹乙醇(农业部，,,,,)。鉴于这种情况，有 必要尽快寻找其他安全高效的替代产品。 喹烯酮是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制的新型药物饲料添加剂， 属于喹嗯啉类不同侧链结构的衍生物，已作为国家一类新兽药被批准使用于猪的养 殖上(农业部，,,,,)。在水产养殖上，喹烯酮也能抗菌促生长，提高成活率，并 能澄清水体，改良水质(熊六凤等，,,,,)，因此其在水产养殖上具有巨大的应用 前景。药代动力学与残留研究是食品动物用新兽药研究的重要内容。药代动力学研 究歼展血药动力学试验、代谢试验，阐明药物在鲤体内的药动学特征及生物利用度， 从而有助于了解药物在体内的代谢过程，为临床合理用药提供科学依据。通过对药 物在动物组织中消除规律的研究为制定休药期和建立兽药残留监控标准提供重要依 据。因此，药物代谢动力学及消除规律研究是避免兽药残留的理论基础。 虽然对于喹烯酮在猪和鸡体内的药代动力学及残留已经进行了研究(李建勇等， ,,,,;,,,,)，但是考虑到鱼类是生活在水中的变温动物，药物在其体内的代谢规律 与恒温动物的差别很大。而且同种药物在不同种动物体内的代谢规律不尽相同:给 药途径的不同也会影响药物的代谢。此外，鱼的个体差异以及环境等各种因素对药 物的代谢也有很大的影响。因此，研究药物在鱼体内的药代动力学规律非常必要。 本实验旨在扩大喹烯酮的应用范围，为喹烯酮在水产养殖业的推广应用与食品安全 (,( 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 性控制提供理论依据。 ,。,喹烯酮药理学与毒理学特点 喹烯酮为淡黄色或黄绿色粉末，结构式见图,，分子式为,,,,,,,,,,，分子量为 ,,,(,，熔点为,,,(,,,,,(,?，不溶于水，微溶于二甲亚砜及氯仿等有机溶剂，对 光敏感，较易发生光化学反应。 喹烯酮(,,,,,;,,,,,) 图,喹烯酮结构式 ,,,,,,,,,,,;,,,,,,？,,,,; ,,,,, “喹烯酮”的体外抑菌试验表明，其对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有一定 的抑菌作用，其中对革兰氏阴性菌的抑制作用更强些。这有利于减少畜禽肠道致病 菌所造成的经济损失。 “喹烯酮”与“喹乙醇”对鸡增重效果比较试验的结果表明，在饲料中添加,,,,, 剂量已有明显的效果，在饲料中添加,,,,,剂量效果更为显著(王玉春等，,,,,)。 “喹烯酮”对猪增重效果试验表明，在饲料中添加,,,,,“喹烯酮”或添加,,,,,“喹乙 醇”均能促进猪的生长，提高饲料转化利用率。其结果表明“喹烯酮”与“喹乙醇”对猪 的增重作用，无显著差异(徐忠赞，,,,,)。 喹烯酮抗菌促生长作用的机理可能是其可选择性抑制肠道致病性大肠杆菌，但 不影响有益大肠杆菌和其它革兰氏阳性菌，故能有效地控制小猪腹泻和禽巴氏杆菌 病等。喹烯酮抑制肠道内的有害茵而保持其中有益菌群，可增加饲料营养的消化吸 收能力，有利于促进机体生长发育(李剑勇等，,,,,)。 上述对喹烯酮的有效性研究表明，喹烯酮能有效抑制肠道致病菌，降低腹泻率， 并能提高畜禽繁殖率和幼仔畜禽的成活率(李娟等，,,,,)。对喹烯酮在水产动物 的有效性研究表明，在水产养殖上，喹烯酮也能抗菌促生长，提高成活率，并能澄 清水体，改良水质(李金善等，,,,,;熊六凤等，,,,,)。因其在猪和鸡体内的生 物利用度极低(李剑勇等，,,,,)，而且吸收进入体内的药物大多以原形形式代谢， , 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 因此在综合养殖中其又能循环利用(李金善等，,,,,)。对其在猪、鸡体内的药动 学和残留研究发现其在动物体内的消除半衰期短，消除快，残留量低(李剑勇等， ,,,,;黄玲利等，,,,,)。因此，喹烯酮作为喹乙醇的替代产品在畜禽水产养殖业上 有着巨大的应用前景。 王禾春等进行的喹烯酮急性毒性试验表明，大白鼠,(,,,为,,,,(,,,,,,, ,体重， 小白鼠,,,,为,,,,,(,,,,,,,,体重，均属实际无毒(王玉春等，,,,,)。王玉春等 进行的喹烯酮蓄积毒性试验表明，喹烯酮对小白鼠无明显的蓄积毒性作用(工玉春 等，,,,,)。严相林等进行了喹烯酮对小白鼠精子的畸变试验表明，喹烯酮未引起 小白鼠精子畸变率的明显增加(严相林等，,,,,)。王玉春等进行了长期饲喂喹烯 酮对小白鼠的致癌试验，未发现喹烯酮有致癌作用(王玉春等，,,,,)。严相林等 用鼠伤寒沙门氏菌检测了喹烯酮的致突变性，结果表明喹烯酮无致突变性(严相林 等，,,,,)。张伟研究了新兽药喹烯酮对大鼠,,天喂养试验，结果表明喹烯酮对大 鼠的最大无作用剂量为,,,,,,,,饲料。喹烯酮对,,,,,,大鼠和昆明小鼠的经口,,,, 分别为,,,,(,,,,,,,,,,(,,,,,,,,(,(;喹乙醇、卡巴氧和痢菌净对,,,,,,大鼠经,,,,,, 分别为,,,,(,,、,,,(,,和,,,(,,,,,,,,(,(，对昆明小鼠经口,,,,分别为,,,,(,,、 ,,,,(,,,,,,,(,,,,,,,,(,(。结果表明，喹烯酮的毒性远远低于喹乙醇、卡巴氧和痢 菌净，在使用上是安全的(张伟，,,,,)。 ,(,喹烯酮药代动力学和残留研究进展 喹烯酮作为国家一类新兽药，在研制过程中已对其在猪和鸡体内的药物代谢动 力学进行了研究。中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所、华中农业大学和中国农 业科学院上海兽医研究所分别对喹烯酮在猪和鸡体内的药物代谢进行了研究，得出 了近似相同的结果。李建勇和黄玲利等对喹烯酮在猪和鸡体内的药代动力学研究均 表明，喹烯酮在猪和鸡体内主要以原形的形式排出(李剑勇等，,,,,;黄玲利等， ,,,,)。黄玲利等还对喹烯酮在猪和鸡体内的药物代谢进行了研究，并从猪鸡组织中 发现了两个代谢产物脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉一,(羧酸(,,,,,,,,,，,,,,)。上 海兽医研究所张丽芳对喹烯酮在鸡体内的代谢研究表明，喹烯酮在鸡体内的代谢主 要以原形形式排出，鸡粪中除存在喹烯酮原形和此前报道过的代谢物脱二氧喹烯酮 和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸外，还发现有两个新的代谢产物:,(单氧喹烯酮和,(单氧喹 烯酮(张丽芳;,,,,)。 对喹烯酮在猪和鸡体内的残留研究也有所开展。兰州畜牧与兽药研究所李剑勇 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 等对喹烯酮在猪和鸡体内的研究表明，猪和鸡多次内服喹烯酮后，肌肉和脂肪中均 未检出药物，而肝脏和肾脏中均检出了原形药物。其研究结果表明喹烯酮经体内吸 收后经肝脏代谢，主要从肾脏排出(王玉春等，,,,,:李剑勇等，,,,,)。黄玲利等 对喹烯酮在猪和鸡体内的残留研究表明，用约第,天在部分动物肝脏中检出少量喹 烯酮与脱二氧喹烯酮(停药后肌肉、脂肪、肾脏和肝脏四种组织中均未检测到喹烯 酮与脱二氧喹烯酮。,(甲基(喹嗯啉(,(羧酸主要存在于肝脏组织中，停药,天后即未 检出。研究结果表明，喹烯酮原形药在猪体内消除很快，而其代谢物,(甲基喹嗯啉 一,(羧酸在肝脏中残留的量最大、时间最长。其靶组织为肝脏，残留标识物为,(甲基 喹嗯啉(,(羧酸。 对生物基质中喹烯酮及其代谢产物的检测方法主要有同位素示踪法，高效液相 色谱法和质谱法。中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所李剑勇等采用,,标记喹烯 酮液闪计数法对喹烯酮在猪和鸡体内的代谢进行了研究，该方法的最低检测量为 ,(,,,，最低检测浓度为,(,,,“?,，方法的平均回收率为,,,(,,，,(,,,，精密度考察 表明喹烯酮日内、日间相对标准偏差小于,,。该方法采用向血浆样品中加入消化液， 然后用液体闪烁计数仪测定，在测定尿液中代谢物时，用乙酸乙酯提取，后经薄层 层析，再检测放射性(王玉春等，,,,,;李剑勇等，,,,,;,,,,)。本实验室黄玲利 等应用,,(,,,,也对喹烯酮在猪和鸡体内的药物代谢进行了研究。在她们的研究中 采用乙酸乙酯提取后浓缩上样，该方法对喹烯酮及其主要代谢物脱二氧喹烯酮和,( 甲基喹噫啉(,(羧酸在猪和鸡各种组织中的最低检出限均为,(,,,,,,,，组织中浓度为 ,(,,、,(,,、,(,,,,,,时，回收率均为,,,,,一,,,，且日间变异系数,,,,(,,,,,,,,,， ,,,,)。金录胜用,,(,,,,测定了喹烯酮及其制剂的含量，该方法的定量限为 ,(,,,,,,,，平均回收率为,,,，变异系数为,(,,,(金录胜，,,,,)。吴玉杰等建立 了饲料中喹噫啉类药物测定的高效液相色谱法，该方法使用甲醇,乙腈,水(,,:,,:,,， ,,,,,)提取饲料中的喹嗯啉类药物，该方法的检测限为,(,,,,,,,，对喹赛多的回收 率,,,,，对其他喹噫啉类药物的回收率为,,,:,,,,,(,,,,,,，,,,,)。李剑勇等 建立的反相高效液相色谱法可测定猪和鸡可食性组织(肌肉、肝脏、肾脏和脂肪) 中的喹烯酮，该方法采用乙酸乙酯提取猪和鸡可食性组织中的喹烯酮，该方法对脂 肪和肝脏的检测限为,(,,,,,,,，对肾脏和肌肉的检测限为,(,,,,,,,，平均方法回收 率为,,(,,,:,,,,(,,,，精密度考察显示日内变异系数均小于,,,，日间变异系数均 小于,,(,,(李剑勇等，,,,,;,,,,)。袁宗辉等建立了高效液相色谱法测定动物组 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 织中喹烯酮的残留标识物,,,,的国家标准，该方法采用酸解的方式提取组织中的 ,,,,，其对猪肉的定量限为,,,,,,，对鸡和鱼肌肉的定量限为,,(,,,,，对猪和鸡 肝脏的定量限均为,,,,,,,(袁宗辉等，,,,,)。中国农科院上海兽医研究所张丽芳 应用高效液相色谱联用三重四极杆串联质谱技术分离鉴定鸡粪中喹烯酮及具代谢 物，运用串联质谱全扫捕、子离子扫描等多种数据采集模式来确证代谢物的结构。 结果发现鸡粪中除存在喹烯酮原形、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸，还存在 两个新的代谢产物:,(单氧喹烯酮和,(单氧喹烯酮(张丽芳，,,,,)。 ,(,研究内容、目标和目的意义 喹烯酮在畜禽动物体内的研究已得到广泛开展，对喹烯酮在水产动物的有效性 研究也表明，在水产养殖上喹烯酮也能抗菌促生长，提高成活率，并能澄清水体， 改良水质。同时，由于喹烯酮主要以原形药的形式排出体外，因此可使其在禽(畜( 渔之间综合利用。这样既可提高经济效益，又有利于保护环境，达到生态养殖的目 的。但是喹烯酮在水产动物中药物代谢动力学、残留检测及休药期等与其安全使用 相关的研究尚未开展。因此开展本研究，旨在以水生动物中较具代表性的鲤为对象 进行药代动力学及残留研究，从而为喹烯酮在水产养殖业上的安全使用和水产品中 的残留检测提供一定的依据。 本研究主要内容包括:?建立鲤血液、肌肉、肝脏和皮肤中喹烯酮及其主要代 ,身,(物定量分析方法;?研究喹烯酮在鲤体内的血药动力学与生物利用度，以阐明喹 烯酮在鲤体的血药动力学特征及生物利用度;?研究喹烯酮在鲤体内的残留消除规 律，阐明喹烯酮在鲤体的残留消除特征，确定靶组织和残留标识物，制定喹烯酮在 鲤的休药期标准。 本文所研究的药动学特征参数，可以用来确定药物准确疗程，如剂量、用药周 期和给药方式以及预测药物使用效果，有助于指导临床合理用药，同时对于减少和 监测药物残留，营造健康的养殖环境也具有十分重要的意义。本试验中的残留研究 阐明了喹烯酮在鲤体内的残留消除规律，确定了合理的休药期，为建立我国水产品 ,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,;,,;,,,,,,,,,,,)系统提供了理论基础，为水产品 卫生监督管理提供了理论依据和技术保证，从而确保食品卫生安全，避免药物残留 的发生。 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 ,材料与方法 ,(,药品与试剂 ,(,。,药品 喹烯酮标准品，由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所合成。批号,,,,,,， 纯度,,(,,;脱二氧喹烯酮标准品，华中农业大学兽药研究所合成。批号,,,,,,， 纯度,,(,,:,(甲摹喹嗯啉(,(羧酸标准品，华中农业大学兽药研究所合成，批号 ,,,,,,,,，纯度,,(,,。 ,(,(,试剂 甲醇，分析纯，批号,,,,,,,,,，国药集团化学试剂有限公司。 乙腈，分析纯，批号,,,,,,,,,，国药集团化学试剂有限公司。 偏磷酸，分析纯，批号,,,,,,,,,，国药集团化学试剂有限公司。 三氯甲烷，分析纯，批号,,,,,,,,,，国药集团化学试剂有限公司。 乙酸乙酯，分析纯，批号,,,,,,,,,，国药集团化学试剂有限公司。 磷酸二氢钟，分析纯，批号,,,,,,,,,，国药集团化学试剂有限公司。 ,(,(,溶液的配制 标准贮备液:精密称取喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸标准品各 ,,(,,,:,(,,,于棕色容量瓶，用二甲亚砜,,,溶解，后用甲醇稀释定容至,,,,，配 成,,,,,,的标准储备液，一,,。,保存备用。 标准工作液:用前分别用甲醇将标准贮备液稀释成浓度为,,,,,,、,(,,,,,,,、 ,(,,,,,,,、,(,,,,,,、,(,,,(,,,,,、,(,,,,,,,,、,(,,,(,,,,,，,?避光保存。 喹烯酮静脉注射液:准确称取喹烯酮,,(,,,，用二甲亚砜,,,溶解后，用灭菌 生理盐水稀释，加,,,表面活性剂吐温(,,助溶，用灭菌生理盐水定容至,,,,，即 可配得浓度为,(,,,,,,,的静脉注射液(现配现用)。 喹烯酮口灌药液:准确称取喹烯酮,,，二甲亚砜,,,溶解，加入,,羧甲基纤 维素钠悬液,,,,，配成,,,,,,,,具有一定粘度的,,灌药液。 偏磷酸甲醇溶液:称取偏磷酸,,,，加适量水，加热沸腾至溶解，冷却后加甲 醇,,,,,，然后加水定容至,,,,,,，混匀，配制成,,偏磷酸,,,甲醇水溶液， 常温保存，有效期,周。 氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠,(,,置于,,,,玻璃烧杯中，用蒸馏水溶解，冷 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 却后转入,,,,,容量瓶中，加水定容至刻线，混匀，配制成氢氧化钠溶液，浓度为 ,(,,,,,,,。 甲酸甲醇溶液:量取甲酸,,,于,,,,容量瓶中，加甲醇稀释并定容至,,,,， 混匀待用，现用现配。 ,(,,,,,,，。磷酸缓冲液:称取,水结晶磷酸氢二钾,(,,,，加入,,,,,。 水溶解， 磷酸调,,值至,(,，加水定容至,,,,,,，常温保存。 ,(,饲料 基础日粮配方设计参照鲤的营养标准，,粮组成及营养水平见表,(,。基础日粮 饲料均加工成直径为,,,的硬颗粒饲料，置于冰箱内保存。 表,(,试验饲料配方及营养组成 ～坐～旦至:～呈,望里旦～型,,里～坠皇～旦坐,,璺,～,壁 原料成分含量(,)饲料营养成分实测含量(,) 望,～曼茎旦曼堕坐旦翌～垒～堡丛生 垒,丝旦堕型,望,?堡垒,皇望～兰,旦～里曼望～垒,皇盥旦～堕～,,璺垒～里,里巳鱼粉,,,,,,,,,,粗蛋白,,,,,,,,,,,,,,(,, ,璺,～,,里旦竺～竺皇坐垒,曼 , 粗脂肪,,,,,,,,,, ,(,, 豆粕,,,,,,,,,,, , ,,(,, 干物质,,,,,,,,, 菜粕,,,,,,,,, ,,, 玉米粉,,,, , 灰分,,, ,(,, 如加, 面粉,,,,, ,, ,,,,,,, , 食盐,,,, ,。, 无机盐预混剂,?,,,,,,, ,(, ,,,,,, 维生素预混剂,?,,,,,,, ,(, ,,,,,, ,【(淀粉仅(,,,,;,(, , 注:,)无机盐预混料配方;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,):,,,，，,(,;,,,,,，,,(,; ,,,,,,,(,,,,， ,,(,,,，,,,:,,,,，,(,,:,,,,,,，,,(,;,,,(,,,),?,,,，,,(,;,,，,,,,,,,?,,,,,，,(,;,,(,,,,,,,,,,),:,,,,， ,(,;,,,,,,,,,,，,(,,,;,,,,,„,,,,，,(,,,;,,,,,„,,,,，,(,,,;,,,,,?,,,,，,(,,,;,,,,?,,,,，,(,,,; ,,,,,，,(,,: ,?维生素颅混料配方;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,):,,，，,,(,,,:,,,，,,,(, ,,;,,,，,,(,,,; ,;，,,(,,,;,,，,,,,(,,,;,,,，,,,(,,,;肌醇，,,,,(,,,:,,，,(,,,;胆碱，,,,,(,,,;,,,，,,,(, ,,;,,,,，,(,,,;,,，,,,,(,，,;,,，,,,(,，,;,,，,,(,,,; ,(,主要仪器 ,,,,,,,,,,,高效液相色谱仪，配紫外检测器，,,,,,,,公司。 分析天平，感量:,(,,,,,,，,,，,,,,,公司。 电子天平，感量:,(,,,，湖南仪器仪表总厂天平分厂。 (,,( 喹烯酮存鲤体内的药代动力学及残留研究 旋转蒸发仪，,,(,,,,，上海振捷实验设备有限公司。 氮吹仪，,(,,,,,,,,,型，路易公司。 ,,,,,,,,,,,,,,(固相萃取),,,真空固相萃取装置，,,,,,,,公司。 高速冷冻离心机，最高转速,,,,,,,,,,，,，?，,,,，,,,,,， 臼立公司。 ,，,。,，,,,,纯化水系统，,,,,,(,公司。 超声波清洗机，,,(,,,,，上海新芝生物技术研究所。 ,,,,,，，,,(,,,，,,,,)固相萃取小柱，,,,,,,公司。 ,,,,,,,,(,,,，,,,,)固相萃取小柱，,,,,,,公司。 ,(,鲤血浆和可食性组织中定量分析方法研究 ,(,(,色谱条件 将喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸标准溶液经紫外扫描，确定三 种化合物的吸收波长分别为,,,、,,,和,,,,,。选用乙腈和水作为流动相，调节配 比，使检测对象保留时间适宜，与杂质分离完全。其中喹烯酮和脱二氧喹烯酮同一 系统检测，,(甲基喹嗯啉(,(羧酸采用另一系统检测。两个检测系统流动相组成与检 测波长见,(,。喹烯酮和脱二氧喹烯酮分开检测时，流动相有所改变。喹烯酮:乙腈 ,水(,,:,,，,:,)。脱二氧喹烯酮:乙腈,水(,,:,,，,:,)。其余条件相同。流速 ,,,,,,,，,,,,,,,,,,—,,,色谱柱,,(,,，，,,(,,,,,,,，柱温,,,,，进样量分别为 ,,、,,和,,,,。 表,(,流动相组成及检测波长 旦坠～壑:至堡,坐巳,璺,～,,旦,,坐,坠,～旦巳堕 药物组成时间配比波长 曼垒盟～型皇～皇里壁垒,,垒皇～暨堕,坠 ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,),,,,,,(,,,),,,,,,,,,,(,,) ,(,(,样品处理方法 血浆中喹烯酮和脱二氧喹烯酮的提取与净化准确吸取血浆,(,,,，先后加入 乙腈,,,，乙酸乙酯,,,后漩涡,,,,，,,,,,,,,,离心,,,,,，重复上述操作,次， 合并,次上清液，,,?水浴蒸干。用乙腈,,,冲洗蒸发烧瓶两次，合并,次的洗液， 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 加正己烷,,,漩涡,,,,，弃正己烷层，,,?空气吹干，加水,,,混匀后经,,,小 柱净化。分别用甲醇,,,，水,,,依次活化小柱;水溶液过,,,小柱，水,,,淋 洗，乙腈,,,洗脱;收集洗脱液，,,?下氮气吹干后，,(,,,的流动相溶解残渣， 待泖,。 血浆中,(甲基喹嗯啉(,(羧酸的提取与净化参照本实验室袁宗辉等所制定的 农业部行业标准(袁宗辉，,,,,)，具体步骤如下:准确吸取血浆,(,,,置于具塞离 心管中，加,,偏磷酸,,,甲醇溶液,,,,，旋涡混合,,,,，在,,?下,,,,,,,,,离心 ,,,,,，取出上清液，然后再向组织样品中加,,偏磷酸,,,甲醇溶液,,,,重复提取 一次，合并,次上清液。于上清液中加乙酸乙酯,,,，旋涡混合,,,,，,,,,,,,,,离心 ,,,,,，取有机相层，再加乙酸乙酯,,,重复提取，合并,次有机相。有机相中，加 磷酸盐缓冲液,,,，旋涡混和,,,,，放置,,,,,，使下层清晰，收集水相。另用磷酸 盐缓冲液,,,提取乙酸乙酯相一次。使水相清晰，合并,次水提取液。 ,,,柱依次用甲醇,,,、水,,,活化。加样品提取液至,,,柱中，控制流速 小于,,,,,,,，先后用,(,,,,,,,氢氧化钠溶液,,,、甲醇,,,淋洗，抽干，,,甲酸 甲醇溶液,,,洗脱，洗脱液置,,。,,,,?水浴氮气吹干，加甲醇,,,,,溶解残渣。待 测。 组织中喹烯酮的提取与净化准确称取均质肌,,,(鱼皮,,)，加入乙腈,,,,， 氯仿,,,后漩涡,,,,，,,,,,,,,,离心,,,,,，重复上述操作,次，合并,次上清液， ,,?水浴蒸干。用乙腈,,,冲洗蒸发烧瓶两次，合并,次的洗液，加正己烷,,,漩涡 ,,,,，弃正己烷层，重复上述操作,次，,,?空气吹干，加水,,,混匀后经,,,,、柱 净化。分别用甲醇,,,，水,,,依次活化小柱;水溶液过,,,,，柱，用水,,,淋洗， 乙腈,,,洗脱;收集沈脱液，,,。,氮气吹干后，,(,,,的流动相定容。上,,,,检测。 准确称取均质鱼肝,,，加入乙腈,,,，氯仿,,,后漩涡,,,,，,,,,,,,, ,离心 ,,,,,,，重复上述操作,次，合并,次上清液，,,?水浴蒸干。用乙腈,,,冲洗蒸发 烧瓶两次，合并,次的沈液，加正己烷,,,漩涡,,,,，弃正己烷层，重复上述操作, 次，,,?空气吹干，加水,,,混匀后，加正己烷,,,漩涡,,,,，弃正己烷层，水溶 液经,,,小柱净化。分别用甲醇,,,，水,,,依次活化小柱;水溶液过,,,小柱， 水,,,淋洗，乙腈,,,洗脱;收集洗脱液，,,?氮气吹干后，,(,,,的流动相定容， 上,,,,检测。 组织中脱二氧喹烯酮的提取与净化准确称取均质肌肉,,(鱼皮,,)，加入乙 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 腈,,,，乙酸乙酯,,,,漩涡,,,,，,,,,,,,,,离心,,,,,，重复上述操作,次，合 并,次上清液，,,?水浴蒸干。用乙腈,,,冲洗蒸发烧瓶两次，合并,次的洗液， 加正己烷,,,漩涡,,,,，重复上述操作,次，弃正己烷层，,,?空气吹干，加水 ,,,混匀后经,,,小柱净化。分别用中醇,,,，水,,,依次活化小枉:水溶液过 ,,,小柱，水,,,淋洗，乙睛,,,(洗脱;收集洗脱液(,,?氮气吹干后，,(,,，。 的流动相定容，上,,,,检测。 准确称取均质鱼肝,,，加入乙腈,,,，乙酸乙酯,,,漩涡,,,,，,,,,,,,, ,离 心,,,,,，重复上述操作,次，合并,次上清液，,,?水浴蒸干。用乙腈,,,冲洗 蒸发烧瓶两次，合并,次的洗液，加正己烷,,,漩涡,,,,，重复上述操作,次， 弃正己烷层，,,?空气吹干，加水,,,混匀后，加正己烷,,,漩涡,,,,，弃正己 烷层，水溶液经,,,小柱净化。分别用甲醇,,,，水,,,依次活化小柱;水溶液 过,,,小柱，水,,,淋洗，乙腈,,,洗脱;收集洗脱液，,,?氮气吹干后，,(,,, 的流动相定容。上,,,,检测。 组织中,一甲基喹嗯啉(,(羧酸的提取与净化参照本实验室袁宗辉等所制定的 农业部行业标准(袁宗辉，,,,,)。提取:准确称取鱼肉,,置于具塞离一,,，管中，加, ,偏磷酸,,,甲醇溶液,,,，旋涡混合,,,,，在,,?下,,,,,,,,,离心,,,,,，取出 上清液，然后再向组织样品中加,,偏磷酸,,,甲醇溶液,,,重复提取一次，合并, 次上清液。于上清液中加乙酸乙酯,,,，旋涡混合,,,,，,,,,,,,,,离一，,(，,,,,,，取 有机相层，再加乙酸乙酯,,,重复提取，合并,次有机相。有机相中，加磷酸盐缓冲 液,,,，旋涡混和,,,,，放置,,,,,，使下层清晰，收集水相。另用磷酸盐缓冲液,,, 提取乙酸乙酯相一次。使水相清晰，合并,次水提取液。 准确称取肝脏样品,,(鱼皮,,)置于具塞离。,,，管中，加,,偏磷酸,,,甲醇溶 液,,,，旋涡混合,,,,，在,,?下,,,,,,,,,离心,,,,,，取出上清液，然后再向 组织样品中加,,偏磷酸,,,甲醇溶液,,,重复提取一次，合并,次上清液。于上 清液中加乙酸乙酯,,,，旋涡混合,,,,，,,,,,,,,,离心,,,,,，取有机相层，再 加乙酸乙酯,,,重复提取，合并,次有机相。其余步骤同肌肉样品处理方法。 净化:,,,柱依次用甲醇,,,、水,,,活化。加样品提取液 至,,,柱中， 控制流速小于,,,,,,,，先后用,(,,,,,,,氢氧化钠溶液,,,、甲醇,,,淋洗，抽 干，,,甲酸甲醇溶液,,,洗脱，洗脱液置于,,。,水浴氮气吹干，加甲醇,,,，(,,溶 解残渣，待测。 ,, 华中农业大学,,,,届硕,学位论文 ,(,(,检测限与定量限 将喹烯酮、脱?氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸标准品配制成浓度较低的一组 样品，对每种浓度样品测定,次，记录每次测得的信号强度,与背景信号强度,。 重复操作,次。取,,次测定结果均值,和,，以达到,,,,,时样品的最低浓度为 最低检,,,,限(,,,)。 取空白血浆、组织(肌肉、肝脏、鱼皮)，分别加入适量喹烯酮、脱二氧喹烯 酮和,一甲基喹嗯啉(,(羧酸标准溶液，按,(,(,中所述的样品制备方法制备样品后进 行,,,,检测，每个浓度重复,次，在不同时间重复操作,次，取,,次测定结果均 值,和,，以达到,,,,,时样品的最低浓度为方法的检测限(,,,)，回收率和变 异系数均达到定量分析要求时样品的最低浓度确定为方法的定量限(,,,)。 ,(,(,标准曲线和工作曲线 准确吸取喹烯酮和脱二氧喹烯酮标准贮备液适量，用甲醇稀释成浓度为,,,,、 ,,,、,,,、,,,、,,、,,和,,,,,,,的标准工作液。准确吸取,(甲基喹嗯啉。,(羧酸标准 贮备液适量，用甲醇稀释成浓度为,,,,,、,,,,、,,,,、,,,、,,,、,,,和,,,,,,,的 标准工作液，每个浓度样品测定,次，不同时间内重复上述操作,次，将所得峰面积 与对应药物浓度拟合，绘制标准曲线，求出标准曲线的线性回归方程和相关系数。 空白血浆中加入喹烯酮和脱二氧喹烯酮适量标准溶液，使其含药物浓度为,、 ,,、,,、,,、,,,、,,,和,,,,,,,,，加入,(甲基喹嗯啉(,(羧酸,、,,、,,、,,、,,, 和,,,，，,,,,，按照,(,(,中所述的样品制备方法制各样品后进行,,,,检测，每个浓 度样品测定,次，不同时间内重复上述操作,次，将所得峰面积与对应药物浓度拟 合，绘制工作曲线，求出血浆工作曲线回归方程和相关系数。 空白组织中分别加入适量标准溶液，使得喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹啉 一,,羧酸在鱼肉中的药物浓度分别为,、,、,,、,,、,,,和,,,“,,,(,，在鱼皮中的药物 浓度分别为,,、,,、,,、,,,、,,,和,,,,,,,,,;使得喹烯酮和脱二氧喹烯酮在鱼肝 中的药物浓度分别为,,、,,、,,,、,,,、,,,,和,,,,,,,,,,，,,甲基喹嗯啉(,(羧酸在 鱼肝中药物浓度分别为,,、,,、,,、,,,、,,,和,,,,“,,,,，按照,(,(,进行样品处理 后进行,,,,检测，每个浓度样品测定,次，不同时间内重复上述操作,次，将所得峰 面积与对应药物浓度拟合，绘制工作曲线，求出组织(肌肉、肝脏、鱼皮)工作曲 线回归方程和相关系数。 喹烯酮存鲤体内的药代动力学及残留研究 ,(,(,准确度和精密度测定 空白血浆中加入适量标准工作液，使得血浆样品中药物浓度分别为,、,,及 ,,,,,,。空白组织中加入适量标准工作液，使得喹烯酮和脱,氧喹烯酮在肌肉样品 中药物浓度分别为,、,及,,,,,,,(,，在鱼皮样品中药物浓度分别为,,、,,及,,,,,,,， 在鱼肝样品中药物浓度分别为,,、,,及,,,,，,,,;使得,,,,在肌肉样品中药物浓 度分别,、,及,,,,,～(,，在鱼皮和鱼肝样品中药物浓度分别为,,、,,及,,,,,,,，后按 照,(,(,所述的样品制备方法制各样品后进行,,,,检测，每个浓度样品测定,次，重 复,天，分别计算回收率与日间变异系数(,,)。回收率计算方法采用单点校准法计 算。公式如下: 片,，,,×,,,, ,,, 其中,:试样中待测物回收率:,:试样峰面积;,,:标准工作液的峰面积;,: 试样体积(,,);,:待测提取液的总体积(,,)。 ,(,(,稳定性研究 标准溶液稳定性:将喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,,甲基喹嗯啉,,,羧酸的,(,“?,, 的标准溶液分别储存于三个不同的条件:(,,。,，,。,和室温棕色容量瓶中避光保存， 平行,份样品，将不同时间测得的峰面积与首次测定的峰面积进行比较，求得比值， 绘制不同保存时间浓度的变化趋势图。(,,?条件下分别于,，,，,月考察目标化合 物的稳定性。,?下分别于,，,，,,，,,,考察目标化合物的稳定性;室温下分别于 ,，,，,，,,考察目标化合物的稳定性。 血浆中添加药物稳定性:在血浆中分别添加喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹 嗯啉(,(羧酸使血浆中的药物浓度为,,,,,,，混匀后分别储存于两个不同的条件:,。,， (,,?棕色容量瓶中避光保存，平行,份样品，在不同的时间按照,(,(,所述样品制备 方法处理后进行,,,,分析，将不同时间测得的峰面积与首次测定的峰面积进行比 较，求得比值，绘制不同保存时间浓度的变化趋势图。,。,下分别于,，,，,，,,考 察目标化合物的稳定性;(,,?条件下分别于,，,,，,,,考察稳定性。 组织中添加药物稳定性:在组织中分别添加喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹 噫啉(,一羧酸使喹烯酮和脱二氧喹烯酮在鱼肌肉、皮肤和肝脏中的药物浓度分别为,、 ,,、,,,,,,,，使,一甲基喹嗯啉,,,羧酸在鱼肌肉、皮肤和肝脏中的药物浓度分别为,、 ,,、,,,,,,混匀后分别储存于两个不同的条件，,。,年,一,,。,避光保存，平行,份样 ,, 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 品，在不同的时间按照,(,(,所述样品制备方法处理后进行,,,,分析，将不同时间 测得的峰面积与首次测定的峰面积进行比较，求得比值，绘制不同保存时间浓度的 变化趋势图。,。,下分别于,，,，,，,,考察目标化合物的稳定性;(,,?条件下分 别于,，,，,月考察稳定性。 ,(,药代动力学试验 将平均体重约,,,士,,,,，健康无病的鲤(,,,,,,,,;,,,,,)，按体重随机分为 ,组，每组,,,尾。试验鱼暂养在,,×,,×,,水泥池一周，用允分曝气的自来水进 行微流水充气饲养，每天投喂基础日粮,次，投饵量为鱼体重的,,(,,。试验期间 水温,,士,。,，,,,(,—,(,。一组尾静脉注射给药，每尾给药,(,,,,,,,(,(，另一组以 塑料软管从口腔插入鱼体前肠部给药，每尾给药,,,,,,,,,(,,。静脉注射采样时间 为给药后,,,,、,,,,,、,,,,,、,,，,,、,,、,,、,,,、,,,、,,,、,,,、,,,、,,,、 ,,,，口灌给药采样时间为给药后,,,,,、,(,,、,,、,,、,,、,,、,,,、,,,、,,,、 ,,,、,,,。从鱼体尾静脉采集仝血，每个时间点采样,,尾鱼。每次采血量,,,,,。 将采出的血样随后转入一次性塑料软管内(预先涂有肝素钠)，,,,,,,,,,离心,,,,,， 制备血浆，(,,?保存备用。 ,(,残留消除试验方案 将平均体重约,,,,,,,,，健康无病的鲤，随机分为,组(各组初始体重无显著差 异)。其中，一组为对照组(,,尾)，饲喂不含任何抗菌药物的基础日粮;另外一组 为喹烯酮试验组(,,,尾)，饲喂添力,,,,,,,,喹烯酮的基础日粮。试验鱼饲养在 ,,×,,×,,水泥池中，进行微流水充气饲养。每天投喂,次，投饵量为鱼体重的,,, ,,。试验时间,,周。试验期间水温维持在,,士,?，,,,(,,,(,。分别于停药后,,、 ,,,，,,,、,,,、,,,、,,、,,、,,,、,,,、,,,、,,,、,,,各采集点随机取样,,尾。 剖杀后立即采集鱼皮，肌肉、肝脏等组织，放入封口袋贴上标签，(,,?保存，备用。 ,(,数据处理 ,(,(,样品定量 分别根据不同药物在血浆和不同组织中药物添加浓度与峰面积的工作曲线计算 血浆和组织中的药物残留浓度，计算公式如下: 肛丝×旦 ,, 式中，尼样品中药物浓度(,,,,,，,,瓜,);彳:样品峰面积;,:工作曲线回 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 归方程的截距;,:工作曲线回归方程的斜率;,,样品最终定容的体积(,,);胍 样品的体积(,,)或质量(,)。 实测样品药物含量若超出线性范围，但高于最低定量限，则采用单点校正法计 算。公式为: 庐盟, ,,, 其中，正样品中药物的浓度(,,,,,):,:样品中药物的峰面积:,,:标准工 作液中药物的浓度(,,,,);儿样品最终定容的体积(,,);,,:标准工作液中药 物的峰面积;,,样品体积(,,)或质量(,)。 ,(,(,药动学数据处理 对静注和口服给药后血浆中药时数据采用,,;,,,绘制药时曲线:运用,,,,,,,,, 软件采用平均值法(,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,)计算各项药动学参数(,,,,,,,,， ,,,,)。主要公式如下: 有吸收一室模型: 消除半衰期,‰,,(,,,,,,(,:消除速率常数) 分布半衰期,,,,,(,,,,,,(,:吸收速率 常数) 表观分布容积,,,,,,,,,,。(,,,给药剂量) 总体清除率,,,,磁,,(,:消除速率常数，,,:表观分布容积) ,,,,,(,,,。一,, 心) 生物利用度,, ,,,(,,,,,(,。 ,毗) ,,,,,,,船„,? 无吸收二室模型: 号筹?絮 分布半衰期,,,,,(,,,,,,(,:分布速率 常数) 消除半衰期,,:,,,,(,,,,,,(,,:消除速率常数) 表观分布容积,,,,,,,,,,,, 总体清除率,,,,,,, (,,:药物在体内达到分布平衡的分布容积;,:分布平衡后的消除速率) ,,,,,,,，,,, , ,,,,埘，,,。瞰(,:任一点的血浆药物浓度;,【:吸收速率常数;,:吸收速率 ,， 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 常数) ,(,(,残留消除常数的计算 将药物浓度作对数转换后，与时间作回归分析，得到组织中药物浓度与时间消 除曲线方程,,,,,，,(,,,,,，,,,,,,) ,,,,,埘换成对数浓度,,,,(,,，,,,,(,,:初始浓度，,:任一点药 物浓度) ,,,,,,(,,,，,(,,,,:消除半衰期，,: 消除速率常数) ,(,(,休药期的确定 由于喹烯酮是国家一类新兽药，目前尚没有残留限量(,,,)的标准，故根据 毒理学研究结果得到最大无作用剂量,,,,推算出喹烯酮的同许量,,，，再根据日 许量,,，和食物消耗因子算出安全浓度及残留限量，并以此为基础确定喹烯酮在鲤 体内的休药期。具体计算方法如下: (,)日许量(,,，)的确定: ,,，,,,,,(,,,,,,(,)?安仝因子 式中,,,,表示大鼠最大无作用剂量，安全因子按,,,,计(,,,，,,,,)。根 据本实验室相关毒理学研究结果(张伟，,,,,)，大鼠,,天喂养试验的,,,,为 ,,,,,,,,饲料，实验大鼠平均体重按,,,,计，采食量约为体重的,,,。据此， ,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,(,,,,,,,,,,, ,(,(,(，则: ,,，,,,,,,(，,,,,,,(,)，,,,,,,,(,(, ,,,,(,、 (,)食物消耗因子的确定: ,,,及我国食耗因子为:肝,,,克;肾,,克;肌肉,,,克;脂肪,,克，合计,,, 克，故总的食耗因子为,,,克。 (,)组织总安全浓度(,,) ,,,,,，,人体重?食物消耗因子 ,,,,,,,,,,(,,,,,,， ,,,,,, ,,(,,,,,,, (,)靶组织中安全浓度(,,) ,,靶组织,,,，,人体重?靶组织消耗因子 (,)最大残留限量,,,靶组织 ,,,靶组织,,,靶组织×，乇, ,,:残留标识物占总残留的比例 (,,( 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 ,结果 ,(,喹烯酮在鲤血浆和组织中定量分析方法学结果 ,，,(,方法专属性 本试验条件下，喹烯酮与脱二氧喹烯酮分离完全，保留时间分别为,,,,,和 ,,,,,，,(甲基喹嗯啉(,(羧酸保留时间为,,,,，色谱图见图,(,。本试验建立的色谱 条件下，鲤血浆中喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸的样品峰与与其它 干扰杂质可有效分离，色谱图见图,(,。 图,—,喹烯酮与脱二氧喹烯酮(,)、,,甲基喹嗯啉一,?羧酸(,)标准溶液,(,,(,,,,, 色谱图 ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,(,),,,,,,,(,),,,,,,,,,, ,,,,,,, (,(,，,,,,, ,) 图,(,空白血浆(,)(,)与血浆中添加喹烯酮与脱二氧喹烯酮(,)和,(甲基喹嗯啉(,( 羧酸(,),肛,,,色谱图 ,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,)，(,),,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,(,),,, ,,,,(,),,,,,,,,,(,,, ,,,)( 华中农业大学,,,,届硕,学位论文 舢: ; ? ， ,,,,, ， ,, ? ,, 。 ? 叫,—,,,一 舶 , 由, 祁 ,,,柚 图,(,喹烯酮(,)、 脱二氧喹烯酮(,)和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸(,)的标准溶液色 谱图(,(,,,,,,) ,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,)，,,,,(,),,,,,,,(,),,,,,,,,,,,,,,,,, (,(,,,,,,) , 划 舢” 协 , ， :暑 帖 : ” 。 ， 舭 ? , , ,, 削 舢 : : 。 拍 ? : ， 似 ? ， ? , , 们 图,,,空白肌肉(,)、鱼皮(,)和肝脏(,)色谱图和肌肉(,)、鱼皮(,)和肝 脏(,)中分别添加喹烯酮,“,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,的色谱图 ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,(,)，,,,,(,)，,,,,,(,),,,,,,;,,(,,(,,,, (,),,,,,(,),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,， ,,,,,;,,,,, ,( (,,, 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 图,(,空白肌肉(,)、鱼皮(,)和肝脏(,)色谱图和肌肉(,)、鱼皮(,)和肝 脏(,)中分别添加脱二氧喹烯酮,，,,,,,,，,,?,,,,,,,,,(, ,,,的色谱图 ,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,(,)，,,,,(,)，,,,,,(,),,,,,,;,,(,)，,,,, (,),,,,,(,),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,“,,,,，,,?,,,,,,,,,,,,,,， ,,,,,;,,,,, ,( ,, ? 图,,,空白肌肉(,)、鱼皮(,)和肝脏(,)色谱图和肌肉(,)、鱼皮(,)和肝 脏(,)中分别添加,(甲基喹噫啉(,,羧酸,，(,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,的色谱图( ,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,(,)，,,,,(,)，,,,,,(,),,,,,,;,,(,)，,,,, (,),,,,,(,),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，(,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,， ,,,,,;,,,,, ,( 华中农业大学,,,,届硕,学位论文 喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,一甲基喹嗯啉(,(羧酸标准溶液色谱图见图,(,。喹烯 酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸的保留时间分别为,,,,,、,,,,,和,,,, 左右。按本试验所述样品处理方法处理样品，各组织中药物峰与干扰杂质分离完全。 组织色谱图见图,(,、,,,和,,,。 ,(,(,检测限与定量限 喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸标准溶液的定量限均为,,,,,,, 如图,(,。喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,一羧酸在鲤血浆中的最低检测限 均为,肛叽，最低定量限均为,“虮如图,—,。喹烯酮与脱二氧喹烯酮在鱼肉、鱼皮和 鱼肝中的最低定量限分别为,、,,、,,肛眺,如图,?,和,,,。,,甲基喹嗯啉(,(羧酸在 鱼肉、鱼皮和鱼肝中的最低定量限分别为,、,,、,,“,,,，见图,(,。 ,(,(,准确度和精密度 喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹噫啉(,(羧酸在鲤血浆中的准确度和精密度测 定结果见表,(,。 表,(,喹烯酮及其代谢物在鲤血浆中的准确度与精密度 旦坠～星～:～垦暨,?堑曼兰塑鱼～坐旦～垒型垦墨旦, 样品药物浓度(肛,,,)回收率(,)日间相对标准偏差(,) ,,竺～塑垒坐里里～堡垒旦～迪璺垫,～塑垒 喹烯酮,,,,土:,,(,, ,,士, ,(,, ,,士, ,(,, ,,士, ,(,, ,?, 脱二氧喹烯酮 ,,士, ,,(,, ,,士, ,(,, ,,士, ,(,, ,(甲基喹嗯啉(,(羧酸 ,,士, ,(,, ,,土, ,柏,插? ,,(,, 由表,(,可知，血浆中药物添加浓度为,、,,和,,,,,,时，喹烯酮回收率为 ,,(,,,:,,,,(,,,，日间,,,为,(,,,:,,,,(,,,;脱二氧喹烯酮回收率为,,(,,,, ,,(,,,，日间,,,为,(,,,,,,(,,,;,(甲基喹噫啉(,(羧酸回收率为,,(,,,, ,,(,,,，日间,,,为,(,,,,,,(,,,。结果均符合定量分析方法学要求。 鲤可食性组织中喹烯酮及其代谢物的准确度和精密度测定结果见表,(,。由表可 知，鱼肉中喹烯酮添加浓度为,、,和,,“,,,,时，回收率为,,(,,,，,,(,，,,(,,,，日间 喹烯酮住鲤体内的药代动力学及残留研究 表,(,喹烯酮及其代谢物在不同样品中的准确度与精密度 药物样品药物浓度同收率,,间相对 (,?,,)(,)标准偏差 (,) ,,,为,(,,,,,,(,,,。鱼皮中喹烯酮添加浓度为,,、,,和,,,,,,,时，鱼皮 ,, 华中农业大学,,,,届硕,学位论文 的回收率分别为,,(,,,:,,,,(,,,，日间,,,分别为,(,,,,,,(,,,。鱼肝中喹烯 酮添加浓度为,,、,,和,,,(,,,,,时，鱼肝的回收率分别为,,(,,,,,,(,,,，日间,,, 分别为,(,,,,,,，,,(,,,。鱼肉中脱二氧喹烯酮添加浓度为,、,和,,,,,,,,时，回收率 为,,(,,,,,,,,,(,,,，日,日,,,,为,(,,,,,,(,,,。鱼皮中脱二氧喹烯酮添加浓度 为,,、,,和,,,,,,时，鱼皮的回收率分别为,,(,,,,,,,,(,,,(日间,,,分别为,(,, ,:,,,,,(,,,。鱼肝中脱二氧喹烯酮添加浓度为,,、,,和,,,(,,,,,时，鱼肝的回收率 分别为,,(,,,,,,(,,,，日问,,,分别为,(,,,,,(,,,。肌肉中,,,,添加浓 度为,、,和,,,,,,,,时，回收率为,,(,,,:,,,(,,,，日间,,,为,(,,,,,,(,,,。 鱼皮中,,,,添加浓度为,,、,,和,,,,,,,(,时，鱼皮的回收率分别为,,(,,,:,,,,(,, ,，日间,,,分别为,(,,,,,(,,,。鱼肝中,,,,添加浓度为,,、,,和,,，,,，(, 时，鱼肝的回收率分别为,,(,,,:,,,,,,(,,,，日间,,,分别为,(,,,,,,(,,,。 ,(,(,标准曲线 喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸标准溶液在,,(,,,,,,,,时，各 浓度与其响应值(峰面积)成线性相关，对浓度(,)与响应值(,)进行线性回归 分析，得标准曲线回归方程见表,—,，在这一浓度范围内各样品都表现较好的线性。 表,(,喹烯酮及其代谢物的标准曲线 ,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, 样品线性范围(,,,,)回归方程相关系数(,) ,(,(,工作曲线 血浆中喹烯酮和脱二氧喹烯酮药物浓度在,,(,,,,,,,,,,,,,浓度范围内，,,甲基 喹嗯啉(,,羧酸药物浓度在,,,,,,,一,,,,,,,浓度范围内各浓度与其响应值(峰面积) 成线性相关，对浓度(,)与相应响应值(,)进行线性回归分析，得工作曲线回归 方程表,(,，在这一浓度范围内各样品都表现较好的线性。 组织中喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸在不同的浓度范围内，各 浓度与其响应值(峰面积)成线性相关，对浓度(,)与响应值(,)进行线性回归 分析，得工作曲线回归方程表,(,。在这一浓度范围内各样品都表现较好的线性，符 合定量分析方法学的要求。 喹烯酮伍鲤体内的药代动力学及残留研究 表,(,喹烯酮及其代谢物在鲤血浆和不同组织样品中工作曲线 ～垒鱼～篁三:兰,皇～,鱼～型,,里呈竺竖竺兰旦,,竺～～坐垒,～璺里皇堕垒 ,～,～皇兰,望垒,垡兰堡垒～墨璺里垒,～皇兰 药物黼 竺灿性，,,冀,?睦烯酮,『,,浆,,,,,,,,,(,,,,,，,(,,,,,(,,,, ,—,,, ,(,,,, 肌肉 回归方程篓嚣)系(，,,,(,,,,,(,(,,,, ,,(,,,, ,,,(,,,,,，,(,,,,,(,,,, 肿脏 “?,)一一…数(,) ,,(,,,, ,(,,,, 鱼皮 ,,,(,,,,,(,(,,,, 血浆 ,(,,,, ,(,,,, ,,,(,,,,,，,,(,,, 脱二氧喹烯酮 ,(,,, ,(,,,, ,,,(,,,,,(,,(,,, 肌肉 肝脏 ,,(,,,, ,(,,,, ,,,(,,,,,(,(,,,, ,(,,,, 鱼皮 ,,(,,,, ,,,(,,,,,,,,(,,, ,(甲基喹嗯啉(,一羧酸 ,(,,, ,(,,,, 血浆 ,,,(,,,,,(,(,,,, ,(,,, ,(,,,, 肌肉 ,,,(,,,,,(,,(,,, ,,(,,,, ,(,,,, 肝脏 ,,,(,,,,,(,,(,,, 鱼皮,,—,,,,,,,(,,,,,，,(,,,,,(,,, ,(,(,喹烯酮及其主要代谢物的稳定性 ,(,(,(,标准溶液稳定性标准液(,(,,，,,,,)在不同条件下保存时的浓度变化如图 ,(,所示。结果显示上述三种物质的标准贮备液置于(,,?保存时，,个月内浓度变化 较小，即保存时间不少于,个月。置于,?下保存时，,,,内浓度变化较小，即保存 时间不小于,,,。喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸标准工作液置于室温下保存时，,, 内浓度变化较小，即保存时间为,,:脱二氧喹烯酮标准工作液置于室温下保存时， ,,内浓度变化较小，第,,测量时浓度即有明显的下降，即保存时间为,,。 ,,,,,,,,,,,,,,,,,忧,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,?盯。, ,,,,,,,,,,,:,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,吼扑,舭,,( ,, ,, ,, ,,,,,,, 爵 矗 爵,,, ,, 詈,,, ,砒,,,蓦 一, ,, 鼍 ,, 器,,厶 岂 ,,?,眦受,, ,, , , 佗,,,,, , ,(,(,,,,,,,,(,,,,砒,盎,(,,,),,) ,? , 图,(,喹烯酮及其代谢物标准溶液在(,,。,(,)、,:,(,)和室温(,)下保存时的 浓度变化曲线图 ,,,,,,,,,;,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,一,,。,(,)， ,。,(,),,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,(,) ,, 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 ,(,(,(,喹烯酮及其主要代谢物在组织样品中的稳定性 图,(,,:,保存条件下，喹烯酮及其代谢物在鲤血浆(,)、鱼肉(,)、鱼皮(,) 和鱼肝(,)中浓度变化曲线图 ,,,,,,,,,;,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,)，,,,;,,(,)， ,,,,(,),,,,,,,,(,) ,,,:, 图,(,(,,?保存条件下，喹烯酮及其代谢物在鲤血浆(,)、鱼肉(,)、鱼皮(,) 和鱼肝(,)中浓度变化曲线图 ,,,,,,,,,;,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,),,,;,,(,)， ,,,,(,),,,,,,,,(,),, 一,,? 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 血浆和组织中添加不同药物后浓度的变化如图,(,所示。结果表明喹烯酮和,(甲 基喹嗯啉(,(羧酸在鲤的血浆、肉、皮和肝中,?下保存,,浓度基本不变。表明喹烯 酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸在鲤的血浆、肉、皮和肝中,?下保存时间为,,。脱二氧喹 烯酮在鲤的血浆、肉、皮和肝中,:,下保存,,时，约物浓度变化较小，第,天时峰面 积即下降明显，表明脱二氧喹烯酮在鲤的咖浆、肉、皮和肝中,:,下的保存时间为,,。 将加有喹烯酮、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸的血浆、鱼肉、鱼皮和鱼 肝置于(,,?保存，于保存后不同时问按照,(,(,所述的样品处理方法处理后用，，,,, 检测，浓度的变化如图,,,所示。结果显示血浆、鱼肉、鱼皮和鱼肝置于(,,?保存 时，上述三种药物的浓度在各自的保存时间内药物浓度变化较小，表明喹烯酮、脱 二氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉(,(羧酸在血浆中(,,?下的保存时间均不低于,,,。,种 药物在鲤的肌肉、皮肤和肝脏中能稳定保存,个月。 ,(,喹烯酮在鲤体的药物动力学特征 ,(,(,静注喹烯酮后的药物动力学特征 表,,,鲤分别静注和口服喹烯酮,(,,,,,,和,,,,,,,,后血浆中喹烯酮浓度(，,,,,,) ,,,,,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,(，,,,,,),,？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,，,,,(,,,,,,,,,,,,,,, , 静注给药(,(,,,,,,)口服给药(,,,,,,,,) 时间(,)浓度(,(,,,,)时间(,)浓度(,,,,,,) 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 鲤静脉注射喹烯酮,(,,,,,,(,(,(后，各动物血浆中均未检出脱二氧喹烯酮和,? 甲基喹嗯啉(,(羧酸。静注给药后不同时间血浆中喹烯酮浓度见表,(,。由表可知，喹 烯酮静注后迅速达到峰浓度，之后逐渐下降。用,,,,,,,,,软件对血药浓度均值和 时问进行拟合，结果表明，喹烯酮在鲤体内的血浆约物浓度最佳约物动力学模型为 无吸收二室开放模型(即药物浓度,时间的关系可用下列方程式表达: ,,,,„,，,,。,„,,(,,?,?,,„，,(,, ,((,?,,, 式中,为分布相的零时截距，,为消除柏的零时截距，,【，,分别为分布和消除 速率常数。根据药时数据运用,,,方法计算得到的药动学参数见表,(,。相应得到 的药时曲线图见图,(,,，色谱图见图,—,,。 图,—,,鲤静注,,,,(,,,,,,(,(,药时曲线图(,)和口服,,,,,,,,,,,(,(,药时 曲线图(,) ,,,,,,,—,,,,,;,,,,,,,,,?,,,,;,,,,,,,,,,;,,,,,,,,，,(,) ,,,,,,,,,(,) ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,(,(,,,,,,,,,,, ,(,(,:,,,,,;,,,,,, 图,—,,鲤静注给药,,,,,后血浆(,)和口服给药,,后血浆(,)高效液相色谱 图,,,,,,,—,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,),,,,,,,,,, ,,,,(,),,,,,,,, ,,,,,, 由表,(,可知，静脉注射喹烯酮后，药物进入外周室的速率,,,大于外周室回到中 央室的速率,,,，表示药物一部分进入组织中贮存，一部分随排泄器官排出体外。,，, 为药物从中央室消除的速率常数。,‰为药物分布的半衰期，消除半衰期,,,,,,,,(,,, 表明药物在血液中衰减速率为慢速清除;,,为中央室分布容积，,,为外周室分布容 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 积，由,,,,(,,,，可推测药物可能在体内分布广泛，相当部分分布到细胞内液:也 可能药物在某一组织中浓度非常高，在某一特定部位蓄积。,,为清除率，,,,为药 时曲线下面积，,,,为最大驻留时间，,,,为稳态发布容积。 ,(,(,口服喹烯酮后的药物动力学特征 健康鲤口灌喹烯酮,,,,,,,(,(、,(后，血浆中仅检出喹烯酮原形药，未检出脱二 氧喹烯酮和,(甲基喹嗯啉一,(羧酸。口灌后不同时间血浆中喹烯酮浓度的实测值见表 ,(,。由表可知，喹烯酮口灌后逐渐上升达到峰浓度，之后逐渐下降。用,,,,,,,,, 软件对血药浓度均值和时间进行拟合。结果表明，喹烯酮在鲤体内的血浆药物浓度 最佳药物动力学模型为有吸收一室开放模型，即药物浓度(时间的关系可用下列方程 式表达:,,,(,一(,。,砒),,,(,,(, ,,(,,,(,。,?,,。)。 表,,,鲤静注喹烯酮,(,,,,,,(,(,和口服喹烯酮,,,,,,,,(,(,后血浆动力学参数 ,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, 堕三:～里型垦,:垒:～塑里婴望堕型坐～堂兰堕堂皇堡,型～ 静脉注射(,(,,,,,,(,(,)口服(,,,,,,,,(,(,) ,堂兰,,坐型垦,:垒:型～,鱼婴 ,,,法 髻剿 ,掣擎嚣室模囊计算翻计算 ,(,, , ,,(,, ,(,,,,,) 弗„辨描 ,(,, ,(,, ;;(,叫) ,,(,叫) ,(,, ,(,, ,(,叫) ,(“,,,,) ,(,, ,(,, ,,(,。,) ,，,，,(,) ,,(,, ,(,, ,‰(,) ,,:,,(,) ,(,, ,(,, ,,,(,) ,,,,(,) ,(,, ,(,, ,,(,) ,,默(,,,,) ,(,, ,,,(,, ,,(,) ,，(,,,,, ,(,, ,,,,(,, ,,,(,,,) ,(,) ,(,, ,,,(,,,) ,(,, ,,,(,“) ,(,, ,，(,,,) 羹羼室橇銎 张测 ,(,, ,(,, ,,,(,,掌,,,,, ,,,(,,木,,,,) ,(,, ,,,(,, ,,(,,,) ,，,,(,,,) ,,(,, ,,(,, ,,,(,) ,,,(,) ,(,, ,(,, ,,,(,) ,,缸(,,,,) , ,,麒(,) 口灌给药的吸收半衰期,‰为,(,,,，表明喹烯酮在鲤体内吸收较快。达峰时间,,,缸 为,(,,,，说明血液中药物浓度达到高峰的时间为,(,,,，峰浓度,,戤为,(,,,,,,。消 华中农业大学,,,,届硕七学位论文 除半衰期,‰为,(,,,，说明该药物消除速率较慢。,,，,分别为分布和消除速率常数。 ,,为清除率，,为表观分布容积，,,为清除率，,,,为药时曲线下面积，,,,为最 大驻留时间。生物利用度,,,(,,,说明该药物不易被吸收。 根据约时数据运用,,,方法计算得至,的药动学参数见表,,,，相应得全,的药时 曲线图见陶,,,，色谱图见图,—,,。 ,(,喹烯酮在鲤体的残留消除特征 鲤药饲喂养,,周后，不同时间点采集样品，分别测定肌肉、皮和肝脏中喹烯酮 及其代谢物的浓度，所测定的浓度数据见表,(,。 表,,,鲤连续混饲,,,,,,,喹烯酮,,周后组织中喹烯酮及其代谢物浓度(,(,,,,,) ,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ？,,,,;,,,,,,,, 型翌,垡璺～～堂皇堡～,里皱～垒～～竺鱼型～～坐 墨壁盟阊盟囱～些丛,～壁壁～些丛星～鏖～些丛,～ 型垦,鱼旦鱼鱼～～兰翌竺旦垦兰 喹烯酮,,,,，,,,，,,,,,, ,,, ,,士, ,,士,, ,, ,,, ,士, ,,士,, ,, ,,, ,，, ,, ,,,, ,,, ,, ,, ,,,, ,, ,(,士,(, ,,，,, ,,，, 脱二氧喹烯酮 ,,, ,士, ,,，, ,,,, ,,, ,士, ,,,, ,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,, ,,,, ,,,, ,,士, ,,，,, ,(甲基喹嗯啉(,(羧酸,, ,,，, ,,, ,,士, ,,士, ,,,, ,,, ,,士, ,,士, ,,,, ,,, ,,士, ,,士, ,,,, ,,, ,士, ,,士, ,,,, ,, ,士, ,,士, ,,,, ,, ,,，, ,, ,,,, ,,, ,, ,, ,,,, ,(,(,喹烯酮 鲤药饲喂养,,周后，不同时间点采集样品，测定组织中喹烯酮浓度，其中所测 (,,( 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 定的喹烯酮的浓度数据见表,(,，经时曲线图见图,(,,。色谱图见图,(,,。由表,(, 可知，鱼皮在停药后,,耳,,低于定量限，停药,,,后即已检测不到喹烯酮，肝脏在停 药后的的,,,即低于定量限，停药,,后即检测不到喹烯酮，肌肉中喹烯酮的含量在 停约后的,,,即已低于定量限，停约,,后臣，,已检测彳„到喹烯酮。将组织中药物浓度 对数与时间作同归分析，组织中药物浓度,((,,,,,,)与时阳,,(,)关系的消除曲线方 程可用下述数学表达式描述: ,肌肉,,,(,,,,,?,,,,;,肝脏,,,(,,,。,? ,,,,; 其中肌肉和肝脏的消除速率常数分别为,(,,,，,(,,,,:,，消除半衰期分别为,(, ,， ,(,】,。 图,,,,鲤连续饲喂,,,,,,,的喹烯酮,,周后肉和肝中的喹烯酮经时曲线图 ,,,,,,,—,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,,,,, ？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, 图,,,,鲤混饲,,,,,,,,,,,,周后停药,,,肌肉(,)、皮肤(,)、肝脏(,)中,,, 色谱图 ,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,(,,,;,,(,)，,,,,(,),,,,,,,,(,)),, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, 华中农业大学,,,,届硕十学位论文 ,,,(,脱二氧喹烯酮 鲤药饲喂养,,周后，不同时间点采集样品，测定组织中脱,(氧喹烯酮，其中所测 定的脱,氧喹烯酮的浓度数据见表,(,，经时曲线图见图,(,,，色谱图见图,,,,。由表 ,(,可知，肝脏在停药后的,,,即己低于定量限，停药,,,后即已检测不到脱二氧喹烯 酮，鱼皮在停药后的,,,即己低于定量限，停药,,后即检测不到脱二氧喹烯酮，肌肉 在停药后的,,,即己低于定量限，停药,,后即检测不到脱二氧喹烯酮。将组织中药物 浓度对数与时间作回归分析，组织中药物浓度,(“,瓜,)与时间,(,)关系的消除曲线 方程可用下述数学表达式描述: ,肌肉,,,(,,,(,?,, ,„ 其中肌肉的消除速率常数分别为,(,,,,一，消除半衰期分别为,(,,,。 图,(,,鲤连续混饲,,,,,,,喹烯酮,,周后，肌肉和鱼皮中脱二氧喹烯酮经时曲线图 ,,,,,,,—,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,, ,;,,,,,,,,,,,,,, ？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, 图,(,,鲤混饲,,,,,,,,,,,,周后停药,,,肌肉(,)、皮肤(,)和肝脏(,)中,,,, 色谱图 ,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,(,,,;,,(,)，,,,,(,),,,,,,,, (,)),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,, 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 ,(,(,,(甲基喹嗯啉(,(羧酸 鲤药饲喂养,,周后，测定不同时间点组织中,(甲基喹噫啉(,(羧酸，其中所测定的,一 甲基喹噫啉(,(羧酸的浓度数据见表,(,，经时曲线图见图,—,,，色谱图见图,—,,。由表,—, 可知，鱼皮在停药后的,,,即已低于定量限，停药,,后即检测不到,(甲基喹噫啉一,(羧酸， 肌肉在停药,,后即已低于定量限，停药～,,后检测不到,(甲基喹嗯啉(,(羧酸，肝脏在停 药,,,后即低于定量限，停药,,,后即检测不到,(甲基喹嗯啉(,(羧酸。将组织中药物浓 度对数与时间作回归分析，组织中药物浓度,(,眺,)与时间,(,)关系的消除曲线方 程可用下述数学表达式描述: ,肌肉,,,(,,,(,(,,,„;,鱼肝,,,(,,,,, ?,,,„ 其中肌肉和鱼肝的消除速率常数分别为,(,,,，,(,,,,一，消除半衰期分别为 ,(,,,。,(,,,。 图,—,,鲤连续混饲,,,眺,喹烯酮,,周后，鱼肉和鱼肝中,?甲基喹 线图 嗯啉一,一羧酸经时曲 ,,,,,,,(,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, 图,(,,鲤混饲,,,,,,,,,,,,周后停药,,,肌肉(,)、皮肤(,)、肝脏(,)中 ,,,,色谱图 ,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,;,,(,)，,,,,(,),,,,,,,,(,)),, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,, 华中农业大学,,,,届硕,学位论文 ,(,(,休药期的计算 消除规律研究结果表明,,甲基喹嗯啉(,(羧酸为喹烯酮在鲤的残留标识物，靶组织 为肝脏。则,,靶组织,,,肝脏,,,,，×人体重?肝脏消耗因子 ,,,,(,,,,(,,,,,,，, ,,,,, ,,,斗,,, ,?甲基喹嗯啉一,一羧酸虽已确定为残留标识物，但是其在总残留中所占比例，尚 待进一步研究。为安全起见，暂假定,(甲基喹嗯啉(,(羧酸残留量仅占总残留的,,, (,,)，则靶组织肝脏中允许的,(甲基喹嗯啉(,(羧酸残留量(,,,)为: ,,,肝脏,,,肝脏×,, ,,,“,,,,,,, ,,(,“?, 本研究结果表明，鲤连续饲喂:,,,,,,,喹烯酮,,周后，停药,天时肝脏中,(甲基 喹嗯啉一,,羧酸的残留量为,。,,,,(,,,,，远低于,。,,,,,,，以此为标准，喹烯酮在鲤体内 应休药零天。 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 ,讨论 ,(,定量方法学 色谱柱的选择:本试验选用,,,,,,,,,,(,,,色谱柞。因为在中等,,，范围 内， 残留硅醇基活性较强，更易发生拖尾相互作用。为了消除这种相互作用，,,,(,,, 采用特殊方法进行超密集集合，然后双封端，尽可能掩蔽更多的活性硅醇基，从而 改善峰形。其适用于各种样品类型(酸性，碱性，中性)。而本试验中,(甲基喹嗯啉 (,(羧酸显弱酸性，最好要选用端基封闭的反相液相色谱柱，同时喹烯酮和脱二氧喹 烯酮也在中等,,范围内，因此确定选用适应范围较广的,,,,,,,,,,—,,,色谱柱。 结果表明，该色谱柱对三种目标化合物均有较好的分离效果，柱效满足定量分析的 要求。 柱温和流动相流速:通常情况下，提高柱温可使液相传质速率加快，有利于降 低塔板高度，改善柱效;但增加柱温同时又加剧纵向扩散，从而导致柱效下降。综 合考虑本试验在分析喹烯酮和脱二氧喹烯酮时选择的柱温为,,。,。主要是因为该温 度高于室温易于控温，并且能减少流动相的黏性，从而降低柱压。但如果温度过高 也可能会造成样品成分变化而影响分离。流动相流速过低则出峰时间太长影响检测 周期，过快则降低灵敏度，本实验在测三种药物时，流动相的流速均选用常规的 ,,,,,,,。主要是因为该流速下检测周期短灵敏度高。 波长的选择:在检测之前将待测物质用二极管阵列检测器(,,,)紫外光谱扫 描以寻找最大吸收波长。结果表明，喹烯酮在,,,,,处、脱二氧喹烯酮和,(甲基喹 嗯啉(,一羧酸在,,,,,处有最大吸收，且在最大吸收波长处干扰较小，故选上述波长 检测相应物质。 提取:根据“相似相溶”原理，应选择与待测药物极性相似的溶剂，并要求提 取溶剂既能溶解待测药物，又不能与待测药物发生反应。而本试验中待测物喹烯酮 及其两种主要代谢物均不溶于水，微溶于甲醇、乙腈等有机溶剂，易溶于氯仿和二 甲亚砜。考虑到与动物组织的相容性好，渗透力强，并且兼有沉淀蛋白和脱脂的作 用，而喹烯酮和脱二氧喹烯酮又较易溶解于乙酸乙酯，因此本试验选择乙睛和乙酸 乙酯的混合溶液来同时提取血浆中的喹烯酮和脱二氧喹烯酮。后通过不断优化乙睛 和乙酸乙酯的比例以取得最好的提取效果，最后确定乙睛和乙酸乙酯的比例为,:,， 这样既能通过乙睛有效沉淀血浆中的蛋白，又能用乙酸乙酯提取血浆中的喹烯酮和 ,, 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 脱二氧喹烯酮，从测定的结果来看，此种提取方案下的准确度和精密度的各项系数 均能满足农业部兽药残留试验技术的要求。 在提取组织中喹烯酮和脱二氧喹烯酮时，为了找到一种提取效率高而提取出的 杂质含量义低的提殴试刹，本试验先后尝试采用中醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、 三氯甲烷、乙腈与乙酸乙酯、乙腈与二氯甲烷的混合物、乙腈与,氯甲烷的混合物 等作为提取试剂，最后发现乙腈与三氯甲烷的混合物提取效率较高，后又不断优化 乙腈与三氯甲烷的比例，最终确定用乙腈:三氯甲烷为,:,作为喹烯酮的提取溶剂 (色谱图见附录,)。但是乙腈与三氯甲烷的混合物提取脱二氧喹烯酮的效率并不高， 因而尝试其他的提取溶剂，最后发现乙腈与乙酸乙酯的混合物提取脱二氧喹烯酮的 效率较高，后又不断优化它们之间的比例，最终确定用乙腈:乙酸乙酯为,:,作为 脱二氧喹烯酮的提取溶剂(色谱图见附录,)。在提取鲤可食性组织中,(甲基喹噫啉 (,(羧酸时，参照了本实验室袁宗辉等制定的国家标准，并略加修改而用于,(甲基喹 嗯啉(,(羧酸在鲤可食性组织中的提取。 净化:净化是将待测物与提取液中的杂质分离。净化是影响分离效果的关键步 骤，药物残留分析中常用的净化方法是液(液分配和固相萃取。考虑到传统的液(液 分配对回收率影响较大，且操作程序复杂，因此本试验选用最先进的固相萃取。在 本试验中，由于血浆和组织中的杂质较多，因此先后尝试了几种,,,,、柱，在选用 的,,,,;,,,,和,,,,,,,,,及,,,,,,,,柱中，,,,,,,,,柱除杂较为干净，且对喹 烯酮和脱二氧喹烯酮的平均回收率均高达,,,以上，而另外两种,,,,,柱对喹烯酮和 脱二氧喹烯酮的回收率均不高于,,,。这是因为,,,,,柱具有优良的特性，在使用 中即使小柱在固相提取过程中干涸，也能够吸附分析物质。同时其还具有亲水和亲 脂的特性:亲水性使填料具有水可浸润性质，从而降低与水的接触角。而亲脂性提 供对被分析物质的反相保留能力。此外，,,,,,柱能够在很宽的范围内保留酸性、 碱性及中性化合物，且能获得重现性好的高回收率。因此本试验最终确定使用,,, ,,,,、柱来净化。关于,一甲基喹嗯啉一,(羧酸的净化，同本实验室袁宗辉等制定的国 家标准。 从测定的结果来看，上述提取方案下的准确度和精密度等各项系数均能满足 ,,,相关文件的要求(,,,，,,,,)以及我国农业部兽药残留试验技术规范的要求 (农业部，,,,,)，而且该方法灵敏度较高，完全能满足日常分析，同时该方法可为 检测其他同类药物提供一定的参考。 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 ,(,药代动力学研究 剂量的确定:本试验确定的静脉注射剂量为,(,,,，傲,，是因为饲养鲤的推荐剂 量为,,,,,,,,晷,,,，按照日饲喂量的,,,,，故确定静脉注射剂量为,(,,晷,,,。口服 的剂量本也应确定为,(,,,,,，由于喹烯酮的生物利用度较低，所以无法检出血液 中喹烯酮的含量。故提高口灌的剂量。在预试验所选定的,,，,,,，,,,，,,,，,,,,,;“,, 剂量中，,,和,,,,,,,,剂量时，无法从血浆中检出任何药物。选用,,,,,,,,剂量 时，只有,个点能检测出,,,。选用,,,,,,,,时，,,,无法完全溶解。故选择 ,,,,,,,,作为口服的剂量。 影响水产动物药代动力学参数的因素包括种间的差异，种内生活环境的不同， 如盐度、温度、年龄、性别、性成熟度等。,,,,,,,,,等指出恶喹酸的生物利用度取 决于剂量、鱼的种类、盐度和水温，而土霉素的生物利用度取决于摄食、鱼的种类 和水质参数(,,,,,,,,,，,,,,)。在一定温度范围内，鱼体的代谢速率与水温成正比。 温度升高,?，鱼的代谢活力增加,,,。对变温动物的剂量和休药期的预测难于相 应的对恒温动物的预测，因为环境温度极大地影响了变温动物的生理状态。 喹烯酮作为国家一类新兽药，对其在猪、鸡体内的血药动力学特征国内已经进 行了研究。而在水产动物体内的血药动力学研究尚未见报道。本研究首次探讨喹烯 酮在鲤体内的血药动力学特征，结果表明喹烯酮在机体内分布较快，生物利用度低、 消除快，主要以原形药形式排出体外。鲤静注喹烯酮,(,,,,,,,(,(后的分布半衰期 和消除半衰期分别为,(,,,和,,(,,,，表观分布容积为,(,,,,,,,,(,(。殷居易研 究表明，鲤静注喹赛多,,,,,,,(,(后分布与消除半衰期分别为,(,,,,和,(,,,,，表 观分布容积为,,,(,,,,,,,,(,(殷居易，,,,,)。结果证明喹烯酮在鲤体的分布、 消除均比喹赛多慢。李剑勇等研究表明，猪静注喹烯酮,,,,,,,(,(后分布与消除半 衰期分别为,(,,,,,和,(,,,,,，鸡猪静注喹烯酮,,,,,,,(,(后分布与消除半衰期分 别为,(,,,,,和,(,,,,,(李剑勇，,,,,)。结果证明喹烯酮在鲤体内的分布和消除 均比猪和鸡慢。 艾晓辉等研究发现鲤口灌,,,,,,,喹乙醇后分布和消除半衰期分别为,(,,,,和 ,(,,,,，殷居易研究表明，鲤口灌喹赛多,,,,,,,(,(后吸收与消除半衰期分别为,(,,, 和,(,,,，生物利用度为,(,,(艾晓辉，,,,,;殷居易，,,,,)。本研究结果表明， 鲤灌服喹烯酮,,,,,,,,,(,,后，吸收与消除半衰期分别为,(,,,和,(,,,，表明鲤灌服 喹烯酮后吸收较慢，吸收速度比喹乙醇和喹赛多慢，消除比喹乙醇慢，与喹赛多相 ,, 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 当。峰浓度(,,,,)为,(,,,,,,,，且生物利用度仅为,(,,,，说明喹烯酮在鲤体内 吸收很少。本研究过程中，曾设计多个剂量组，但剂量低于,,,,,,,(,,(,(,时要么不 能检出，要么就只能在短时间内略高于,,,，无法采集药动学研究所需要的点，这 也说明喹烯喇在鲤体内的吸收较少。喹赛多在在鲤体内的生物利用度仪为,(,,(殷 居易，,,,,)(说明喹烯酮在鲤体内的吸收利用程度远不及喹赛多。李剑勇等研究表 明，鸡几服喹烯酮后的生物利用度为,,，猪几服喹烯酮后生物利用度为,(,,(李剑 勇，,,,,)。与本研究结果一致，表明喹烯酮在动物体内的吸收较低。 由于鱼类是变温动物，其生理特点完全不同于作为恒温动物的猪和鸡。即便在 水产动物内部，由于引起物种间药物动力学变化的来源包括物种间的变化、种间的 不同、生活环境的不同(如盐度)，温度、年龄、性别、性成熟度等等。因此对变温 动物的剂量和休药期的预测难于相应的对恒温动物的预测，因为环境温度极大地影 响了它们的生理学。这可能是喹烯酮在鲤体内的吸收和分布均较猪和鸡慢的原因， 同时这生理学上的不同可能也是导致喹烯酮在鲤体内生物利用度比猪和鸡低的原 因。 ,(,喹烯酮残留消除特点 残留消除研究主要是研究动物可食性组织中药物的消除规律，以期建立相应的 休药期标准。喹嗯啉类的残留研究国外研究的较多，其中以卡巴氧、喹乙醇为主， 研究对象主要是猪，在鸡和鱼体内的研究较少。不过喹嗯啉类残留的靶组织和残留 标识物，基本上都有规定。如规定卡巴氧的残留靶组织为肝脏，残留标识物为喹嗯 啉(,(羧酸。我国规定喹乙醇的残留靶组织也为肝脏，残留标识物为,(甲基喹嗯啉(,( 羧酸(农业部，,,,,)。喹赛多在猪体的残留研究结果也表明，该化合物在猪的残留 靶组织为肝脏，残留标识物为喹嗯啉(,(羧酸(邱银生，,,,,)。,,,,,,,,,等研究发 现，猪连续饲喂卡巴氧,(,,,,,,,三,(周，停药后,,食用组织中卡巴氧原药即消除到 检测限量以下，停药后,,,，组织中残留物主要为喹噫啉(,(羧酸(,,,,,,,,,,,,,， ,,,,)。仔猪连续饲喂卡巴氧,,,,,,,,,周，停药后,,,可食性组织中原药和脱二氧 代谢物浓度即降至,,,,,(,,;,,,,,,,,,,，,,,,)。未见卡巴氧在鸡和鱼的残留研究 报道。国内关于本类的残留研究开展较少，且主要集中于喹乙醇原形。在代谢物的 研究方面，仅李会涛、,,,;,,,,,,和,,等对其代谢物进行了研究，并先后建立了 ,,,,和,,,,,,,,同时检测的方法(李会涛，,,,,;,,,,,,，,,,,;,,,;,,,,,, ,,,,，,,,,)。艾晓辉等研究喹乙醇单次和多次口灌给药后鲤体内的药物代谓,动力学 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 及组织浓度。结果发现喹乙醇在给药后,,达到峰值,,(,,,,,,,，然后浓度迅速下降， 至,,,肌肉中还有,,(,,,,(,,,,(艾晓辉等，,,,,)。殷居易对喹赛多的研究显示喹赛 多原药在停药,,后，皮中即已不能检出，停药,,后肝脏中即检测不到药物。而其代 鲥物,,,在肝脏中的消除半衰期为,(,,,。本研究连续饲喂,,,,,,,喹烯酮,,周后， 停药,,后存鲤的肉、皮和肝中均能检测到,种药物的存在。肝脏中原药的消除速率 常数为,(,,,,一，消除半衰期为,(,,,。 残留消除规律主要目的是确定残留标识物和靶组织。对喹烯酮在猪和鸡体内的 研究结果表明，其残留标识物为,(甲基喹嗯啉一,一羧酸，靶组织是肝脏。通过本试验 对喹烯酮在鲤体内残留消除规律的研究，基本上也能确定喹烯酮在鲤体内的残留标 识物为,(甲基喹嗯啉(,(羧酸，靶组织为肝脏。本研究结果表明,(甲基喹嗯啉(,(羧酸 在肝脏中的半衰期最长，为,(,,,。而其他所有能测定的药物在组织中的半衰期均小 于它。如在鱼肉中的半衰期,,,,,,,,,,,,,，在鱼肝中的半衰期,,,,, ,,,，而,,,,在肝脏中的半衰期明显大于其在鱼肉中的半衰期。其他可能的代谢 物在组织中的浓度因方法的灵敏度所致，不能检出。由此可见，,,,,在鱼肝脏中 消除最慢，残留的持续时间最长。故确定喹烯酮在鲤体内的残留标识物为,(甲基喹 嗯啉(,(羧酸，靶组织为肝脏，与同类化合物残留特点相符，也与喹烯酮在猪和鸡体 内的研究结果一致。 休药期是指食品性动物停药后到允许屠宰上市的间隔时间。其研究对象主要是 动物的靶组织和残留标识物。鉴于喹烯酮为国家一类新药，尚无残留限量标准，根 据本实验室的毒理学研究结果初步确定喹烯酮在肝脏中的,,,为,(,“?,。而在本 试验中，停药当天肝脏中,一甲基喹嗯啉一,一羧酸的浓度即为,(,,,,，,,,，远低于,(,“,,,， 据此确定喹烯酮在鲤体内的休药期应为零天，与对其在猪和鸡体内的研究结果一致， 证明喹烯酮对鲤具有良好的食品安全性。 ,, 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 ,，,、结 本课题首次建立了喹烯酮及其丰要代谢物脱二氧喹烯酮和,(甲基喹嚼啉(,(羧酸 在鲤血(浆和可食性组织中的,,，，,分析方法。方法的准确度和精密度等各项参数均 符合定量分析方?法的要求。在此基础上研究了唪烯酮在鲤体内的药动学与残留消除 规律，结果表明，喹烯酮在鲤体内表现为不易吸收，消除较慢，生物利用度低等特 性。同时还发现喹烯酮在鲤的残留靶组织为肝脏，残留标识物为,(甲基喹嗯啉(,(羧 酸。按毒理学研究结果确定,一甲基喹嗯啉一,?羧酸在肝脏中的,,,为,(,,,,,，而长 期饲喂后停药当天肝脏中,,甲基喹嗯啉一,一羧酸的残留量为,(,,,,,,,，低于该,,,， 因此可确定喹烯酮在鲤应休药零天。 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 文献综述 国内外渔药使用与水产品安全 水产养殖业不仅能充分、合理地利用不同国家或地区的自然资源，而且对于国 家粮食安全、脱贫致富及发展高效农业产业等方面都做出了巨大贡献。此外水产养 殖、，,还能够以一种可持续的方式发展(创造食品和就、,,机会(增加围民牛产总值( 改善农村和城市居民的收入和生活，因此水产养殖业得到了迅速的发展。,,,发表 的数据显示，在,,,,年，全世界养殖产量(,,(,,百万吨)占水产品总量的,,(,,， 超过,,,,年的,(,,倍。同年，在中国养殖量发展为捕捞量的,(,倍，养殖水产品(,,(,, 百万吨)占中国整个水产品产量的,,,，占世界养殖水产品的,,,。就世界范围而 言，水产养殖的产量增长迅速(,,,，,,,,)。,,,,年水产养殖产量为,,,万吨， 占水产品总产量的,,，而,,,,年的养殖产量达,,,,万吨，占总产量的,,(,,，,,,, 年产量比,,,,年增加了,倍多。水产养殖业的发展充分利用了江河湖泊等不能发展 种植业等其他食品产业的地方，以水为田，促进了动物性蛋白质产量特别是不饱和 脂肪酸的增加，丰富了人们的生活，因此水产养殖业作为重要的食品生产行业正以 其独特的优势显得日益重要(,,,;,,,,,,，,,,,)。 水产养殖业在高速发展的同时，也引发了鱼病在全世界范围内的传播。使得世 界各地新病种、疑难病、暴发病不断发生，细菌性疾病引起严重的经济损失，因此 需要进行药物治疗，特别是抗菌剂，因此，需要进行药物防治(,,,,,,,,,,,，,,,,)。 药物防治是水产病害控制的三大技术支柱之一，也是我国水产动物病害防治中最直 接、最有效和最经济的方式，因此在我国病害防治体系中受到普遍重视。渔药在降 低发病率和死亡率、提高饵料利用率、促进生长和提高水产动物生产性能等方面起 了很大的作用，但是渔药的不规范或滥用和错用导致某些药物在水产品内的残留直 接关系到水产品的安全，并已经成为影响水产品安全的最重要因素。 本文拟在介绍当前国内外渔药使用现状及其对水产品安全影响的基础上，提出 增进水产品安全的对策，从而为我国的水产养殖安全合理用药及水产品安全提供一 些参考和借鉴。 ,国内渔药使用现状 ,(,我国渔药的发展 ,, 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 渔药或水产养殖用药，是指以预防、控制和治疗水产动、植物的病虫害，促进 养殖品种健康生长、增强机体抗病能力以及改善养殖水体质量的一切物质(农业部， ,,,,)。我国渔药的发展大致经历了以下三个阶段: ?第一阶段为,,,,年全,,,,年。利用工业用品、一些农昌,产品的加,,物，一些 在生产中靠经验摸索和积累的士、单验方。如清塘药物中的茶粕、巴豆(消毒杀菌 中常用的生石灰、漂白粉，杀虫用的硫酸铜、硫酸亚铁、硝酸亚汞，杀真菌消毒用 的孔雀石绿，治疗草鱼“三病”用的“四合剂”、“六合剂”、烟叶浸出物等。此一阶段 比较偏重于针对病原的药物，偏重于实际应用效果，大量的研究工作也集中在药物 筛选、药物的有效浓度、药物的安全浓度、药物的应用范围和给药方法等药效研究。 如中国科学院水生生物研究所对硫酸铜、硫酸亚铁、敌百虫、高锰酸钾、硝酸亚汞、 漂白粉等药物的应用范围、有效浓度、安全浓度以及给药方法进行了探讨，这是我 国最早渔药研究的纪录。?第二阶段为,,,,年至,,,,年。,,世纪,,年代后，抗生素 和中草药使用歼始大量出现。磺胺噻唑等消炎药、食盐、小苏打以及土霉素、金霉 素、链霉素等均被应用在鱼病防治上。大量的群众性中草药防治鱼病的经验，促使 科技人员开展药效研究。科技人员在总结群众中草药防治鱼病经验的同时，研究了 大黄、乌柏、地锦草、板兰根等中草药的药效和药理，开辟了我国渔药研究新思路。 ?第三阶段为,,,,年后。随着市场经济的发展，渔药的开发成为商品。一些人类用 药，畜禽类用药，植物保护用药，水环境治理中水处理用药等一些疗效好的筛选移 植到水产养殖业作为药品。我国目前生产上使用的药品大部分都是此阶段的产品。 同时，一批对目前水产养殖业危害严重的重大疾病和不良养殖环境有独特疗效和解 决方法的新药品问世，这也是我们当前研究开发渔药的发展方向。 ,(,水产动物用药的主要品种 白,,,,年磺胺药成功地应用于治疗鳟鱼疥疮病以来，氯霉素、土霉素、卡那霉 素、氟甲喹等相继在鱼类中得到应用，化学治疗也发展成为对付细菌性鱼病的重要 手段。根据作用对象，渔药可分为水产动物药和水产植物药:依其用途，渔药又可 分为抗微生物药、消毒杀菌药、环境改良药、抗寄生虫药、营养保健药、激素以及 生物制品;根据其化学组成，又可分为无机药、有机药及生物性药。我国目前批准 允许用于水产方面的兽药全部记录在《兽药国家标准(兽药地方标准上升国家标准 第一册》。具体见表, ,(,(,渔药的主要剂型 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 渔药因剂型的不同导致使用方法各异。而在渔药的剂型上，种类也较多，一般 可分为:粉剂、可湿性粉剂、乳油剂、晶体剂、片剂、油剂、水剂、软膏剂、乳粉 剂、颗粒剂、胶囊剂、烟剂等。因为渔药使用时作用的个体较多，因此在生产和临 床使用上以粉刺和水荆最为普遍。如将粉利与泥土直接混匀后直接遍洒和将水剂直 接遍洒。 表,我国批准允许用于水产养殖中的药物 药物种类代表药物 消毒剂 苯扎溴铵溶液、二氯异氰尿酸钠粉、高碘酸钠溶液、聚维酮碘溶液、 次氯酸钠溶液、三氯异氰尿酸、戊二醛溶液、溴氯海因等。 杀虫剂 阿苯达唑粉、吡喹酮预混剂、敌百虫辛硫磷粉、地克珠利预混剂、 复方阿苯达唑粉、甲苯咪唑溶液、硫酸锌粉、硫酸铜硫酸亚铁粉、 溴氰菊酯溶液、驱虫散、雷丸槟榔散、苦参末等 内服药 氟苯尼考、复方磺胺二甲嘧啶粉、复方磺胺甲嗯唑粉、维生素,、 诺氟沙星盐酸小檗碱、诺黄散、盐酸多西坏素、诺氟沙星、 甲砜霉素、盐酸沙拉沙星可溶性粉 中草药 三黄散、芳草促美、穿心莲散、五倍子末、地锦草末、南板蓝根末 大青叶末、鱼肝宝散、消食百虫清、芳草应激安、大黄末、水霉净 芳草鱼病康、芳草肠炎清、芳草纤灭、泼洒姜、舒平、四味穿心莲 清热散、驱虫散、三子散、黄连解毒散、白头翁散 ,(,(,渔药的使用方法及特点 抗菌药物几乎可用于所有水产养殖动物，包括虾、蟹、贝、蛙等。在给药方法 上，渔药也与其他动物用药有着明显的不同。渔药给药方法一般有下面的八种方法: 遍洒法、药液浸泡法、挂篓挂袋法、拌药饵投喂法、清塘法、注射法、涂抹法和浸 沤法。挂篓挂袋法、遍洒法、拌药饵投喂法和药液浸泡法比较适用于需要大批量处 理的治疗对象，药液浸泡法和拌药饵投喂法适用于预防及早期治疗，而注射法和涂 抹法则只适用于观赏鱼和繁殖用亲鱼等能实行个体管理的水产动物疾病的治疗。 ,(,渔药的使用对象 就我国的水产养殖现状来说，水产养殖对象品种很多，从甲壳类到爬行类共百 ,, 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 余种，但重点养殖对象却只有,,种左右。其中淡水鱼类如“四大家鱼”和鲫鱼因价 格较低，考虑到养殖成本，施药的频率和强度都较低。鲟鱼、海水螺类对水质的要 求较高，疾病发生的频率也就较低，所以使用的药物也很少。但是一些经济价值较 高的鱼类，渔药的使用量很大，且经常过量使用，自时甚全还使用建禁约物。如斑 点叉尾鲴、鲶鱼、虾、罗非鱼、牙鲆、鳖、中华绒螯蟹和鳗鱼等经济价值高的养殖 品种除了使用国家批准应用于水产上的药物外，还大量使用硝基呋喃、孔雀石绿、 氯霉素等违禁药物。 表,水产养殖中的禁用药物 药物种类代表药物 抗菌药物抗生素类红霉素、氯霉素、泰乐菌素、杆菌肽锌 硝基呋喃类呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃它酮、呋喃那斯 磺胺类磺胺噻唑、磺胺咪 喹诺酮类环丙沙星 抗寄生虫药类孔雀石绿、汞制剂杀虫剂、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、甲基唑、地美 硝唑、地虫硫磷、六六六、毒杀酚、滴滴涕,,,、呋哺丹、杀虫脒、 双甲脒 环境改良剂五氯酚钠 其它喹乙醇、甲基睾丸酮、丙酸睾酮 ,国外渔药使用情况 ,(,水产动物用药的主要品种 各国因经济发展水平的差异导致水产动物用药的水平也存在极大的差异。例如 在欠发达的非洲，大约,,个国家有水产养殖业，但是大部分国家没有关于药物使用 的管理规则(,;,,,;,,,,,，,,,,)。相比之下发达国家的水产用药水平就很高。具 体表现在疫苗等无危害的生物制剂使用较多，而抗生素等有一定残留危害的化学治 疗药使用却大幅减少，有的国家甚至在一定程度上禁止使用抗生素。如,,,,年瑞典 就第一个禁止使用任何抗生素作为饲料添加剂。挪威通过改革某些生产方式和增加 疫苗的使用，在短期内使得抗生素的使用量下降了,,,。 总体而言，发达国家对水产药物使用的管制非常严格，很多药物在水产养殖中 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 遭到禁用(见表,)。发达国家中以美国批准使用的药物最少，使用管理最为规范。 美国水产养殖业使用药物及化学品受到该国食品药品管理局(,,,)及环境保护局 (,,,)的严格规范。通过审批的药物也仅能合法使用于某些特殊的疾病和某些特 殊的品种。如磺胺荆是被许叮用于治疗鱼病的抗生素，但仪限于特定水产鱼种或特 定疾病上。另外还规定，批准用作治疗鱼病的抗生素不得作为生长激素(也不得用 于疾病预防。,,,,年美国,,,核准可用于水产养殖的药物为,种，分别是:绒毛膜促 性腺激素(，，,,)、福尔马林、,,(,,,、土霉素、氟本尼考、磺胺甲墓嘧啶以及磺 胺间二甲氧嘧啶(甲基嘧啶(,,,(,蹦)。,,,目前还有,,种未批准的药物被指定 为低管理关注实施管理。这些药物包括醋酸、氯化钙、氧化钙、二氧化碳气体、漂 洗土(,,,,,,?,,,,,,)、大蒜、过氧化氢、冰、硫酸镁、洋葱、木瓜蛋白酶、氯化钾、 聚维酮碘、碳酸氢钠、氯化钠、亚硫酸钠、尿素和鞣酸(,;,,,,,,,，,,,,)。在使 用量上，,,,,年，有超过,,,,,,磅抗生素被用于美国的水产业(,,,,,,,,,,,,，,,,,)。 ,,,禁止在动物源性食品中使用的药物有,,种，主要是氯霉素，盐酸克伦特罗，乙 烯雌酚，二甲基硝基咪唑，其他硝基咪唑类，异烟酰咪唑，呋喃西林，呋喃唑酮， 磺胺类要和糖肽(,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,)。 与美国相比，日本批准使用的水产药物就比较多。,,,,年,月日本农林水产省 修改了《水产养殖用药指南》，该指南认可的抗菌药和抗生素共有,,种、消毒剂两 种、驱(杀)虫剂,种、维生素制剂,,种、麻醉剂,种和疫苗,种。具体的药物包 括氧氨苄青霉素、培可霉素、氨苄青霉素、红霉素、烷基三甲基铵钙土霉素、盐酸 土霉素、噫喹酸、噫喹酸(水性悬浊剂)、嗯喹酸(药浴液)、柱晶白霉素、交沙 霉素、史霉素、磺胺间二甲氧嘧啶或其钠盐、磺胺间甲氧嘧啶或其钠盐、磺胺间甲 氧嘧啶或其钠盐(药浴剂)、磺胺间甲氧嘧啶或其钠盐配合剂、妥比西林、甲砜霉 素、盐酸强力霉素、呋喃苯稀酸钠(药浴剂)、新生霉素钠、氟喹酸、氟甲砜霉素、 盐酸林肯霉素和磷霉素钙，其中磺胺甲异噫唑或其钠盐、聚苯乙烯磺酸夹竹桃霉素、 嘧罗酸、敌百虫、吡喹酮等,种药物作为推荐药物列出。此外还有,种渔用疫苗得 到认定，分别是香鱼弧菌病灭活疫苗、鲑科鱼类弧菌病灭活疫苗、鲫鱼,溶血性链 球菌灭活疫苗、虹彩病毒感染症灭活疫苗、鲕鱼,溶血性链球菌和弧菌病灭活疫苗 (,;,,,;,,,,,,,，,,,,)。 与美日相比，欧盟是发达国家中最大的水产品产地，其中西班牙、丹麦、法国 和英国是欧盟主要的水产品生产国。因此欧盟批准使用于水产动物中的药物也较多。 ,, 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 阿莫西林，氟苯尼考，氟甲喹，噫喹酸，土霉素，青霉素一双氢链霉素，磺胺嘧啶 (,,,，磺胺甲基嘧啶，阿苯达唑，甲基吡啶磷，氯氰菊酯，溴氰菊酯，除虫脲，福 尔马林，,,(,,,，芬苯达唑，双氧水，吡喹酮，除虫菊，伏虫隆，碘伏(,;,,,;,, ,,,,,，,,,,)。在这些允许应用于水产动物的药物中，福尔马林和碘伏是在欧盟 水产,，,中最广泛使用的消毒剂(它们在大部分国家都有最大残留限量(,,,)和销 售许可(,,,,,,,,,，,,,,)。当然也有许多药物被欧盟限制使用于水产动物，如 氨苄西林，双环霉素苯甲酸盐，赛芬尼考，强力霉素，红霉素，交沙霉素，北里霉 素，林可霉素，米诺沙星，萘啶酸，新生霉素，竹桃霉素，磷霉素，吡咯嘧酸，螺 旋霉素，磺胺二甲嘧啶，磺胺间二甲氧嘧啶(甲黎嘧胺，磺胺间甲氧嘧啶，磺胺异恶 唑，甲砜霉素，敌敌畏，聚维酮碘，除虫菌一胡椒基丁醚，敌百虫，丁子香酚，美 托哌丙嗪，此外欧盟理事会规定下述物质也不可使用:马兜玲种，氯霉素，氯仿， 秋水仙素，氨苯砜，甲硝哒唑，硝基呋喃，(包括呋喃唑酮)，罗硝唑(,,,,,,,,,,,)。 总体而言，氧化剂，消毒剂，除草剂，产卵激素类，麻醉药物，抗寄生虫药通 常被使用于水产养殖业。疫苗的使用导致欧盟和北美抗菌剂使用的急剧减少(,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,， ,,,,)。 ,(,渔药的使用对象 欧盟水产药物主要是通过指令性文件管理。其水产药物主要应用于一些重要的 养殖品种上。欧盟养殖品种主要为鲶鱼、鳟鱼、龙虾、大菱鲆，金头鲷，小龙虾， 大西洋鲑鱼，大西洋鲱鱼，虹鳟，黑鲈，海鲷。,,,,年，西班牙的大菱鲆产量占欧 盟大菱鲆总产量的,,(,,，黑鲈占欧盟总产量的,,(,,(,,,,,,，,,,,)。,,,,年， 欧盟产量最高的前四种鱼为大西洋鲱鱼、黍鲱、大西洋鲭鱼和砂鳗(,,,,，,,,,) 美国水产养殖品种主要有,种，分别是鲶鱼，鲑鱼，大麻哈鱼，罗非鱼，混血柳 鲈。除此之外小龙虾的养殖业很重要(,,,,，,,,,)。而在日本，根据《水产养 殖用药指南》，其渔用药物仅允许使用于,,种养殖对象，包括鲫鱼、真鲷、银大麻哈 鱼、竹荚鱼、牙鲆、鲤鱼、鳗鱼、虹鳟、香鱼、罗非鱼和同本对虾;玫瑰大麻哈鱼、 鲫鱼和其他鲈形目、鲱形目、鲽形目、鳗鲡目、鲑科、鲤形目鱼类等。 总体而言，发达国家开展水产养殖的主要是经济价值高的海水鱼类。它们主要 是虹鳟、大西洋鲑和大麻哈鱼(如大鳞大马哈鱼和银大马哈鱼)，其次是斑点叉尾 鲴、庸鲽、舌齿鲈和金头鲷等。在淡水鱼类方面，主要有日本鳗鲡、鲤鱼和非洲胡 鲶等。对于甲壳类，主要有美洲螯龙虾、凡纳滨对虾和细角对虾(或蓝对虾)等。 喹烯酮在鲣体内的药代动力学及残留研究 因此，其渔药主要应用于上述经济价值高的鱼类。 ,水产品安全 水产品质量安全是指水产品中不应含有可能损害或威胁人体键康的有害物质或 因素，从而导致消费者急性或慢性毒害及感染疾病或产生危及消费者及其后代健康 的隐患。影响水产品安全的囚素众多，包括化学污染和生物污染两大类(林洪，,,,,)。 化学污染包括农药残留、渔药残留、金属和其他无机物、有机物及其他化学品。生 物污染包括微生物和病毒、寄生虫、毒素、转基因生物。其中，以渔药残留对水产 品安全的影响最大。其危害主要包括变态反应与过敏反应、细菌耐药性、二重感染、 致畸作用、致突变作用、致癌作用和激素样作用等(,,,,,,;,,,,,，,,,,;,,,,,, ,,,,，,,,,)。水产品安全问题引起了美国、欧盟和日本等发达国家消费者的关心， 并在某种程度上影响了消费者的购买行为。,,,,年,月路透社的一项民意测验显示 ,,,,个美国消费者中，,,,的人表示将停止购买从中国进口的食品(,,,,,，,,,,)。 水产品安全问题已经从一个经济问题，上升成了一个政治问题。在,,,,年,,月，美 中经济对话就把食品安全列为首要问题。,,月美国众议院开展听证会讨沦了关于中 国食品安全的调查报告。很显然，水产品安全已经成为中美协商的重要问题(,,,,,， ,,,,)。 ,(,国内外水产品安全现状 ,(,(,我国的现状 我国是世界上水产品第一大出口国，第五大进口国，进出口总量,,,,年达到 ,,,(,万吨，进出口总额达到,,,(,亿美元。近几年我国水产品进出口贸易中，水产 品的出口量虽然逐年增加，女,,,,,年出口额,,亿美元、,,,,年出口额,,亿美元，但 出口产品在国外不时发生安全问题，产生许多不良后果。例如,,,,年在出口欧盟的 虾仁中检出氯霉素，随后欧盟通过决议，即,,,,,,,,,,,对从中国进口的虾采取自动 扣留并进行批检的保护性措施，造成欧盟对我国动物源性食品的全面封锁 (,,,,,,,,,,,)。 此类事件几乎每年都有，,,,,年，香港媒体报道大陆“大闸蟹??养殖中使用了 氯霉素、促生长剂、激素等;,,,,，欧盟从我国浙江出口对虾中检出氯霉素超标; ,,,,年，美国从我国养殖水产品中检出致癌药物呋喃哗酮，日本从我国福建出口的 鳗鱼中查出恩诺沙星。,,,,年，我国又在鳗鱼中检出禁用药物孔雀石绿;根据,,,, ,, 华中农业大学,,,,届硕七学位论文 年的普查数据结果，虽然水产品中药物残留的超标率,,,,,,年有所下降，但氯霉素、 呋喃唑酮代谢物等残留量超标以及孔雀石绿等违禁药物禁而不止的现象依然存在; ,,,,年香港食物安全中心抽取淡水鱼样本作化验，结果发现，,,个桂花鱼样本有,, 个样本发现含台孔雀石绿，但均没有古抗生素氯霉素。随后义出现“多宝鱼约残超 标”事件(孙建富和鹿丽，,,,,)。虽然这些事件仅仅是个别现象，并不代表整个 水产品的质量都存在问题，但是其给水产养殖业造成的负面影响是巨大的。 总体而言，我国的水产品质量基本上是安全的。虽然先后发生“桂花鱼有毒”， “多宝鱼药残超标??等事件，但是这些并不表示所有的水产品都存在质量安全问题。 以多宝鱼事件为例，在上海多宝鱼时间发生后，山东省海洋和渔业厅紧急组织了一 次监督抽查，分两批抽取了,,家企业的,,个样品。经检测，禁用药氯霉素的合格率 为,,(,,，孔雀石绿和无色孔雀石绿合格率为,,(,,。这意味着山东的大部分多宝鱼 是合格的。然而这种合格，却淹没在消费者的一片恐慌中，难以稳定消费者的安全 信心。由此导致陷入危机的不是一条鱼而是一个产业。 影响我国水产品安全的主要因素是违禁药物的使用。它们主要是氯霉素、呋喃 哗酮、甘汞、硝酸亚汞、醋酸汞和吡啶基醋酸汞、锥虫砷胺、五氯酚钠、孔雀石绿、 杀虫脒和双甲脒、林丹、毒杀芬、己烯雌酚、甲基睾丸酮、酒石酸锑钾、喹乙醇。 而其中氯霉素、孔雀石绿、呋喃唑酮因其优良的使用效果而具有最高的检出率。 产生水产品安全问题的水产动物品种主要是那些经济价值高而且发病率又高的 养殖品种。这些养殖品种由于经济价值高，经常是没病也预防，发病后更是加大用 药强度。这些品种具体见表,。 表,我国水产养殖对象中可能会出现药物残留的主要品种 ,(,(,欧、美、日的现状 欧盟为世界上最大的水产品进口国，美国第二，同本第三。在,,,,年，美日欧 的进口量占全世界总进口量的,,,。发达国家水产品养殖量相对较少，其主要水产 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 品的消费依赖于海外进口，如美国从,,,,年开始，,,,的美国水产品就依赖于进口， 因此他们对水产品的安全性极为关注。在产品检验和质量控制上的大量投入，使得 他们在全球,司行业中取得领先并占据着主导地位。美国食品药品管理局(,,,)和 美国海洋大气局(,,,,)对水产品的各柙危害实行严格控制，从养殖、捕捞、加 ,、销售各环节都提出实施,,,,,相麻的规则标准或模式(,,,肘,,,，,,,,)。 由于在技术和资金上具有优势，因此美国在水产品危害，如药残、化学物残留和微 生物等的研究和控制上都处于领先地位。欧盟针对欧盟国家内水产品生产和进口制 定了强制性法规与标准，这些法规与标准都有相应的执行机构和健全的实施程序， 多设在水产品或渔业的管理部门。日本是水产消费大国，,,,,年以来对进口水产品 中的兽药残留(抗生素、磺胺类药物)做了严格规定，多达几十项。,,,,年实施的 肯定列表制度对进口水产品提出了更高的要求。尽管有着严格的管理制度，但是来 自进口食品的食源性疾病还是不断增加，此举导致政府对进口的水产品施加了更为 严格的管制措施(,,;,,,,,,,,，,,,,)。 发达国家的水产品安全问题主要来源于国外。如在,,,,年，欧盟从越南和泰国 进口的虾中检测到硝基呋喃类药物的残留，而在欧美该药是被禁止使用的 (,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,)。从来自缅甸的虾中检出氯霉素，也是欧盟禁止使 用的药物(,,,,,,,，,,,)。,,,,年,月,,,，欧盟全面禁止了进口中国、越南和印 尼水产品，其中的主要原因就是药物残留问题(,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,)。,,,, 年,月，欧盟禁止进口菲律宾产养殖水产品。,,,,年,月日本以“恩诺沙星”残留超 标为由对中国产鳗鱼采取强制性检查，,,,,(,,,,(年日本又陆续提出“孔雀石绿”、 “硝基呋喃代谢物”、“氟苯尼考”、“敌百虫”、“硫丹:等药物残留的检测要 求。,,,,年日本从中国出口鳗鱼中检出孔雀石绿后，随即禁止中国鳗鱼出口到日本。 ,,,,年,月，欧盟禁止进口巴基斯坦产养殖水产品。,,,,年美国,,,以中国水产品受 到了药物和不安全的食品添加剂的污染为由禁止从中国进口养殖水产品，这些被警 告禁止进口的水产品包括斑点叉尾鲴、鲶鱼、虾和鳗鱼。其检出的药残范围主要是 孔雀石绿、氟喹诺酮、龙胆紫、恩诺沙星、硝基呋喃、氯霉素。 美国,,,拒绝进口的记录显示在,,,,年至,,,,,,年,月拒绝了,,,例，其中 硝基呋喃 的代谢物占大部分。在日本，,,,,年,,个进口拒绝案例中，其中,,例是因为药物残 留的问题。其中四环素类药物，氟喹诺酮类，孔雀石绿占大部分。,,,,年,月,,同， 美国,,,发布的“进口，,,,,,,号警报??中指出:从,,,,年,,月,日至,,,,年,月,, 华中农业大学,,,,届顾七学位论文 日，美国共检测从中国进口的鲶鱼、绀鱼、虾、鲮鱼、鳗鱼中的,,个货样，其中,, 个货样检出药残，药残范围是孔雀石绿、氟喹诺酮、龙胆紫、恩诺沙星、硝基呋喃、 氯霉素(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，, ,,,)。 由上述影响发达国家水产晶安全的实佣中，我们司„以发现影响发达国家水产品 安全的药物主要是孔雀石绿，氟喹诺酮(龙胆紫，恩诺沙星(硝基呋喃，氯霉素等。 而存在安全问题的水产品主要是斑点叉尾鲴、鲶鱼、虾、鳗鱼、鲶鱼和鲮鱼等经济 价值高、市场需求大的品种。 发达国家对产于国外的水产品实施严格监管的同时，对其国内的水产品养殖也 做了严格限制。但是在发达国家国中还是有部分水产养殖业者也并未严格遵循相关 的管制制度。如美国,,,调查报告:,,,,年美国,,,对造成兽药残留原因的调查结 果表明:未遵守休药期的占,,,，饲料加工或运输错误的占,,,，使用未经批准的 药物占,,。,,,,年美国兽医中心(,,,)的调查结果则是:不遵守休药期的占,, ,，使用未批准的药物占,,,，未作用药记录的占,,,。在欧盟一些禁用的药物也 被广泛使用。氯霉素，呋喃唑酮，二甲硝唑被禁止应用于所有的食品性动物，但是 在欧盟的部分地区却还在使用。而在批准的水产药物中，标签外使用的情况也很普 遍。鲑鱼是一个重要的食品性鱼类，其标签外用的情况也很广泛(,,,，,,,,)。 虽然发达国家生产的水产品质量也不完全合格，但是由于发达国家消费的水产 品主要来源于国外进口，因此发达国家的水产品安全问题主要来源于国外。 ,(,影响水产品安全的原因 由于渔药残留是对水产品安全影响最大的因素，因此影响水产品安全的主要因 素就在于渔药的残留。水产品药物残留通常是指在水产养殖动物的任何可食用部分 中药物的母体化合物及(或)其代谢产物，以及与药物有关的杂质的残留。要想获 得安全的水产品就必须保证渔药没有残留，或低于其最大残留限量。而在实际生产 中，由于渔药使用中存在的种种问题，使得水产品安全形势同益严峻。 各国为应对水产品质量安全先后采取了不少对策。,,,,年我国农业部出台了水 产品质量安全推进计划，其中以,,,,,体系较为著名。针对水产品养殖管理的现状， 农业部出台了《水产养殖质量安全管理规定》对水产品及制品生产全过程的用水、 生产、饲料、药物使用作了规定(农业部，,,,,)。其中水域环境要求符合《无公 害食品海水养殖用水水质》、《无公害食品淡水养殖用水水质》;渔用饲料应当符 合《混合饲料和饲料添加剂管理条例》、《无公害食品饲料安全限量》;禁止使用 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 无产品质量标准、无质量检验合格证的渔药;同时使用时必须遵循休药期;禁止使 用假、劣兽药及禁止使用的药品及其他化合物和生物制剂。这些规范用药对药物残 留起到防患于未然的作用。 水产品之所以小安全的就是因为渔约使用中普遍存在着卜?列,口,题: 养殖用药的盲目性由于水产养殖尤其是大规模的水产养殖产业刚刚兴起(从 事水产养殖的人员大多从捕捞转向养殖时间较短，尚处于摸索实践阶段，缺少养殖 经验，对水产养殖的病害防治更缺乏科学知识，很多人不会正确使用渔药，更不会 鉴别良莠。诊断不正确，用药不对症，配伍错误。既达不到治疗效果，又浪费药物， 同时又耽误治疗时机，造成生产损失。同时养殖户不了解哪些药可以用，哪些药不 能用，不了解哪些药是禁用药，更不清楚什么时候用药，怎样合理用药，更不知道 盲目用药在水产品中可导致药物在机体内积蓄。养殖户不了解休药期概念，不清楚 什么时候药物残留在水生动物体内消失可以起捕。因此无法保证生产的水产品药物 残留符合最高残留限量要求。盲目用药直接影响了水产品的质量。 药物的滥用现象非常普遍每种药物都有自己的使用范围，若水环境中的水 温、,,值、水中有机质含量不同，药效也会不同。施药者无视药物的使用条件、施 用范围及收获前休药期的规定，以至水产品药物残留超标。有的施药者随意提高使 用剂量或药物浓度，长期使用后诱发了耐药菌株的产生，形成药效下降，进而发生 更大量用药的恶性循环。 不遵守休药期的规定休药期是指水产品允许上市前或允许食用前的停药时 间。不少养殖业者对鱼药使用中的休药期规定意识淡薄，不遵守休药期的有关规定。 违禁药物的大量使用由于一些水产养殖品种具有巨大的经济效益，于是一 些不法分子就大量使用违禁药物。以至出现鱼儿在甲醛中“游泳”，鳗鱼在抗生素 中“茁壮”成长的现象。 存在轻“防:重“治:的观念一些养殖单位或养殖户对疾病预防的重视不 够，没有充分认识到预防的重要性。而一旦暴发疾病，又不会合理、科学用药，结 果导致疾病发生后无法控制，产生乱用药、乱投药的混乱局面。 ,(,水产品安全控制 各国消费者对水产品安全的需求越来越高，为了适应国际贸易环境和促进水产 养殖业的持续发展，水产品安全性的提高就显得尤为迫切重要。因此，需要采取一 定的措施来提高水产品的安全性。 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 ,(,(,合理正确的使用渔药 各级渔业主管部门要做好病害的测报工作，并做好合理使用渔药的宣传工作。 指导养殖者正确的选药、适时的用药，不使用禁药，并严格遵守渔药休药期的规定， 最大限度地减少水产品中的药物残留。 ,(,(,贯彻以综合预防为主的方针 减少渔药的使用量，有效地控制病害的发生，首先应贯彻以综合预防为主的方 针。由于渔药多数具有一定的毒性，一方面会直接影?向养殖动物的生理和生活，另 一方面可能杀灭水体和底泥中的有益微生物，扰乱了水体的生态平衡，如有大量浮 游生物存在时，浮游生物也会被杀死并腐烂分解，引起水质的突然恶化，可能会发 生全池动物死亡的事故。因此，采取有效的措施预防疾病的发生和发展，从而最大 程度的减少用药量，在水产养殖中更具有特殊的意义。 ,(,(,加强水产疫苗的开发与使用 不发疫苗，控制疾病，减少渔药使用是解决细菌耐药性和药物残留的最根本且 行之有效的办法。 ,(,(,重视生态养殖，加快生物渔药的研制 生态养殖不仅能充分利用水体，提高综合效益，而且可以改善养殖水体水质， 有效地预防水产病害的发生，从而减少渔药的使用量。另一方面，还要加快生物渔 药的研制，破坏水生病原生物的栖息条件，影响病原生物的繁衍，以及直接吞噬病 原生物或与其进行种间的生存竞争，来达到控制水产病害的目的。 ,(,(,加强水产品质量安全控制的基础性技术研究 用水产品质量安全的技术规范来保证水产品的质量，国家、省级水产研究单位 应开展优势水产品养殖过程中各关键控制点的研究，建立优势水产品的,,,,,规 范，研究渔药在优势水产品中代谢和残留消除规律，为批准使用的渔药制定合理的 休药期。 ,(,(,加强水产品质量检测方法的研究 主要研究一些使用频率较高的违禁药物如氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃、沙拉 沙星、单诺沙星、乙胺嘧啶呋喃丹、红霉素等违禁药物在水产品中残留的快速检测 方法; ,(,(,建立水产品质量安全管理体系 喹烯酮往鲤体内的药代动力学及残留研究 开展,,,,,原理在水产品的养殖加工过程中的应用研究与示范。将,,,,, 原理用到具体某一产品中，研究各种水产品从池塘到餐桌的全程质量安全关键控制 点，使产品达到质量安全限制的质量控制方法，研究制定具体产品的养殖、加工过 程良好操作规范、建立每种水产品的,,,,,质量控制体系。 ,(,(,加强执法力度，施行无公害养殖 虽然我国有关部门颁布了一些标准和准则，如,,,,,,(,,,,《无公害食品淡 水渔业水质标准》、,,,,,,(,,,,《无公害食品海水养殖水质标准》和,,,,,,( ,,,,《无公害食品渔药使用准则》等，但在实际生产中由于缺乏有效的监督和管 理，违法使用违禁渔药的现象屡禁不绝，这一点在散户养殖者中尤为突出。因此， 要加强行政执法力度，理顺管理体制，协调各部门联合执法，相互配合，形成合力， 共同查处，禁止有违禁药物残留的水产品进入流通市场。 ,(,(,严格执行水产品的出口追溯的管理制度 我国国家质检总局从,,,,年,,月,日起对所有出口水产品将实行“追溯管理”。 “追溯管理:是指对水产品从生产中使用的原料、加工过程到批发以及零售的各个 环节进行记录存档，在产品出现不合格时，通过产品识别代码，可以实现从成品到 原料每一环节的可追溯性。海捕原料可追溯到船，养殖原料可追溯到养殖场或养殖 塘，淡水捕捞原料可追溯到捕捞区域，进口原料可追溯到进口批次。通过追溯管理 制度，可用查阅该批产品的相关汜录等手段分析不合格的原因，采取有效整改措施。 国家质检总局己经出台了《出境水产品追溯规程(试行)》，要求出口的水产品及 其原料必需按照我国的规定标识。 ,(,(,,加强技术培训，提高从业者素质 大力开展宣传和培训工作，提高从业人员的质量意识和技术水平，同时要发挥 研究机构、高校和技术推广部门的技术培训、技术咨询和技术服务的人才一资源和 职能作用，共同促进从业者素质的提高和推进产业的发展。 ,(,(,,加大品牌意识。 争取创立一些名优品牌，从而避免因为一条鱼而损害整个产业的情况。 ,结语 水产品安全问题尤其是水产品药物残留问题已成为制约我国水产品国际贸易的 瓶颈，因此为了人类的健康和水产养殖业的可持续发展，我们应充分认识到药物残 ,, 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 留的危害性，加强这方面的研究，积极做好药物残留的监控工作，以促进我国水产 养殖业持续健康发展，保证水产品安全。为了应对国际市场的竞争，水产品的生产 标准应走向国际化。主要体现在水产标准、检验和质量控制的国际化;对水产品安 全卫生的认识与标准的统一;推行以,,,,,为基础的质量管理规范。 全球化及国际水产贸易的进一步发展，在提供了众多机会的同时，也在食品安 全与品质方面提出了挑战。水产品的安全性直接关系到消费者的身心健康。提高水 产品的安全性，防止水产品中出现威胁人类健康的有毒有害因素足必需的，也符合 现代食品发展的趋势。完善水产品安全与质量监督体系，全面提高水产品质量，对 于改善食品结构，满足国内人民生活需要，提高我国水产品的质量品牌，具有重要 的现实意义。只要高度重视水产品安全性，认真加强我国水产品的质量安全管理， 我国水产品的质量和效益必将会大大提高。 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 参考文献 艾晓辉(陈正望(弓,春光，文华，刘长征(喹乙醇存鲤体内的药物代谢动力学及 组织浓度(水生生物学报，,,,,(,):,,,—,,, 黄玲利，范盛先，肖爱国，陈品，殷居易，刘琶才，邱银生，袁宗辉(唪烯酮在猪 体内的残留研究(中围畜牧兽医学会,,,,学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年 科技工作者学术研讨会论义集(下册)，,,,,:,,,,(,, ,, 金录胜(,,(,,,,测定喹烯酮及其制剂的含量(中国兽药杂志，,,,,(,):,,(,, 李会涛(饲料中有毒有害物质对鲈鱼和大黄鱼生长的影响及其在鱼体组织残留的研 究(【硕士论文】(青岛:中国海洋大学图书馆，,,,, 李娟，刘东升，许东宝，王晓刚，刘兆华(喹烯酮对仔猪生产性能影响的研究(中 国饲料，,,,,(,,):,, 李剑勇，赵荣材，李金善，徐忠赞，杜小丽，苗小楼，薛飞群(喹烯酮在猪体内的 药代动力学研究(中国兽医科技，,,,,(,):,, 李剑勇，李会善，徐忠赞，杜小丽，苗小楼，赵荣材，柳军席，薛飞群(喹烯酮在 猪、鸡体内的药代动力学研究(畜牧兽医学报，,,,,(,):,,(,, 李剑勇，李金善，徐忠赞，赵荣材，苗小楼(高效液相色谱仪检测猪组织器官喹烯 酮残留方法的建立(中国兽医科技，,,,,(,):,,(,, 李剑勇，赵荣材，李金善，徐思赞，杜小丽，苗小楼，薛飞群，柳军席(猪血液中 ,,,标记喹烯酮的测定及药代动力学研究(动物医学进展，,,,,(,):,,(,, 李剑勇，李金善，徐忠赞，赵荣材，苗小楼，张继瑜，鲁润华(高效液相色谱仪检测 鸡组织器官喹烯酮残留方法的建立(动物医学进展，,,,,(,):,,,(,,, 李金善，赵荣材，王玉春，徐忠赞，薛飞群，严相林，张继瑜，杜小丽，李剑勇， 苗小楼，柳军席，苏鹏(饲料添加新药喹烯酮预防鱼病效果的观察(中兽医医药 杂志，,,,,(,):,,—,, 林洪，水产品安全性(北京:中国轻工业出版社，,,,, 农业部(中华人民共和国农业部令第,,号(水产养殖质量安全管理规定，,,,, 农业部(中华人民共和国农业部令第,,号(新兽药研制管理办法，,,,, 农业部畜牧兽医局编印(中华人民共和国农业部公告第,,,号(北京:中国标准出版 社，,,,, 农业部畜牧兽医局编印(动物性食品中兽药最高残留限量(中华人民共和国农业部公 ,, 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 告第,,,号(北京:中国标准出版社，,,,, 农业部畜牧兽医局编印(中华人民共和国农业部公告第,,,号(北京:中国标准出版 社，,,,, 农业部办公厅文件(兽约残留试验技木规范(试行)(农牧发,号，,,,, 邱银生(喹赛多在猪体内的药动学与残留研究(,博十论文】(武汉:华中农、，,大学图 书馆，,,,, 孙建富，鹿丽(我国水产品质量安全问题探析(大连海事大学学报(社会科学版)， ,,,,(,):,,,(,,, 王玉春，严相林，赵荣材，李金善，杜健(新型药物饲料添加剂喹烯酮的一般毒性 研究，:急性毒性试验(中兽医医药杂志，,,,,(,):,,(,, 王玉春，严相林，赵荣材，李金善，薛飞群，梁建平，徐忠赞，杜小丽(新型药物 饲料添加剂喹烯酮的一般毒性研究，，:蓄积毒性试验(中兽医医药杂志，,,,, (,):,, 王玉春，赵荣材，严相林，李会善，杜小丽，张世珍，薛飞群，徐忠赞，梁建平， 张继瑜(喹烯酮对小白鼠的致癌试验(中国兽医科技，,,,,，,(,,):,,(, , 王玉春，赵荣材，严相林，李金善，徐忠赞，薛飞群，梁建平，姚拴林，王凤兰(喹 烯酮促进肉鸡生长的效果观察(中国兽医科技，,,,,，,,(,):,,(, , 王玉春，薛飞群，赵荣才，严相林，李金善，杜小丽，徐忠赞，张继瑜(喹烯酮在 鸡体内的吸收与分布(中国兽医科技，,,,,，,,(,):,,(,, 徐忠赞，李金善，赵荣材，王玉春，薛飞群，梁建平，严相林(“喹烯酮”对猪增重 作用的初步观察(中兽医医药杂志，,,,,(,):,,, 熊六凤，刘晓兰，伍海拔(喹烯酮对彭泽鲫生长性能的影响(水利渔业，,,,,，,, (,):,,(,, 严相林，李金善，王玉春，赵荣材，薛飞群(“喹烯酮”对小白鼠精子的畸变试验(中 兽医医药杂志，,,,,(,):,,(,, 严相林，李会善，王玉春，赵荣材，薛飞群(喹烯酮的,,,,试验(中兽医医药杂志， ,,,,(,):,,(,, 殷居易(喹赛多在鲤体内的药物动力学及残留的研究(【硕士论文】(武汉:华中农 业大学图书馆，,,,, 袁宗辉，吴玉杰，王玉莲，陶燕飞，陈冬梅(猪鸡鱼可食性组织中喹乙醇代谢残 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 留检测方法一高效液相色谱法(农业部行业标准，,,,, 张伟(喹烯酮临床前毒理学研究(,硕士论文】(武汉:华中农业大学图书馆，,,,, 张丽芳(饲料中喹烯酮的检测方法与鸡粪中喹烯酮及其代谢物的鉴定研究(,硕士论 文,(中国农业科学院，,,,, ,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,;,,,,,,,,,,,;,,(,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,;,,,,,,，,,, ,，，,,,,，,,,, ,,,,,,,(,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,: ,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,, ,,(,;,,,,,;,,,,,,;, ,,,,,;,(,,,,,,,,(,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,, ,,?,,,,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,( ,,,,,,,,;,,,,,;,,,,,,(,,,,(,,;,,, ,(,,,(,,, ,,,,,,,,，,,,,,,,,(,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,(,,？,,;,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,;,,,;, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,, ,,,,,，，,,,,，,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,,,，,,,,,,，,，,,;;,,,,,，,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,，,,,,,,,,,( ,,,;,,,,,,,,;,,,,;,,,,,,,,,,？,,;,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,, ，;,,,,,,,,,(,,,,(,):,, ,,,,, ,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,？,,;,,,,,,,,,,,,,(,？,,;,,,,,,,,,,,,,,,,(,,):,,, 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了极大的帮助～在试验过程中还得到了本实验室王大菊教授、王玉莲副教授、刘振 利老师、彭大鹏老师、戴梦红、陈品、王旭老师等老师的热心帮助，在此一并表示 感谢～ 衷心感谢华中农业大学水产学院陈孝煊老师在动物试验中所给予的支持和帮 助。感谢华中农业大学水产学院研究生祝东梅、杜海明、杨承泰、史则超等同学所 给予的支持和帮助。 感谢华中农业大学动物医学院程国富书记、伍晓雄院长、邓干臻老师、陈治国 老师以及其他领导、老师对我的鼓励和支持以及在生活和学习上的帮助。 在三年多的学习和生活中，实验室的同学也给予了我很大的支持和帮助，教会 了我许多做人做事的道理和方法，在此谨向各位师兄师姐和师弟师妹们表示我最诚 挚的谢意～特别感谢已经毕业的硕士研究生王伟、张志美等在试验操作和仪器使用 上提供的帮助～感谢博士研究生房可、郭乾吉在数据处理过程中给予的指导～感谢 博士研究生刘兆颖在仪器使用过程中给予的指导～感谢本实验室陈江涛、于刚、杨 柳、郑欢庆、董静、姚敏、卢俊杰、涂洪刚、张伟、王海蓝等同学在三年的研究生 生活中对我的帮助～感谢实验室的工作人员张咏菊、毛萍、王焕林、杨为为等在我 学习和生活上的帮助～ 衷心感谢各位答辩委员给予本文细心的评审及富有指导性的意见～ 胡桂敏 ,,,,年,月于武汉 ,, 华中农业大学,,,,届硕上学位论文 作者简介 胡桂敏，男，,,,,年出生，湖北省黄冈市人。 ,,,,年:一,,,,年，本科，就读于华中农业大学水产学院水产养殖专业。 ,,,,年:,,,,,,,年，硕士，就读于华中农业大学动物医学院基础兽医学专业。 硕士期间主要从事喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究。 发表论文 ,(拟投文章《,,？,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,，,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, (,,,,,,,,;,,,,,,() ,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,;,,,,; ,,,,))( ,(拟投文章((,,,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,;,,,(,,,,,,,, ;,,,,,,(,》 ,(拟投文章《,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,, ;,,,,,,(),,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,)) 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 附录 附录,:定量分析方法学原始数据 表,唪烯酮在鲤血浆中的准确度和精密度测定结果 ～垒鱼～竺～垒竺竺旦～翌里竺,塑垒仑堡～,璺,,翌,～,坠～肌肉添加批旦坚皇～墅,,，,(,又士,(,銮墨墨墼～丝, 垒垒竺篁～旦垒皇,垒垒～,竺垒 鉴塞【些型翌垦,达～兰～(兰(～一墼凼塾闻一 ,，,,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,。,,,,(,,，,,,,,，,,士,,,,(,,,，,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(?,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,:,,(,,,,(, ,(,,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,，(,,,,(,,,,:,(,,,,(,,,士,(,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,:,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,:,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,, ,(,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,,(，,，,(,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,，,,(,,,,:,(,，,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,,(,, 表,脱二氧喹烯酮在鲤血浆中的准确度和精密度测定结果 ～塾垒～皇三垒里里坠～翌里竺,～堕堡巳堡里,璺,,旦,～鱼皇兰,茎 肌肉添加批旦堕主～墅～,士,(,又士,(,銮量墨墼(丝, ,,旦,垒,～曼～,望皇,里垒～竺,垒 堕匡(丛型翌生,达～三～兰～丝凼地间 ,(,,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,，,(,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,,(,,,,(,, ,(,,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,,(,,,,(,,,,:,(,,,,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,:,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,:,(,,,,(,, ,(,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,(,,:,(,,,,(,,，,(,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,, 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 表,,,,,在鲤血浆中的准确度和精密度测定结果 ～垒鱼～皇～垒里～里～～,,曼,～堕垒芝～曼竺,兰,竺里,～ 肌肉添加批旦堕奎～堑～,土,(,又士,(,銮墨墨墼～型 坠,竺?,里垒～旦竺垒 盗皇～釜型堡,,盗～,～兰～地盘丝塑 ,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,士,(,,,(,,,(,, 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,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,，(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,(,, 华中农业大学,,,,届硕士学位论文 表,脱二氧喹烯酮在鲤肌肉中的准确度和精密度测定结果 ～垒垒～星～?里里旦～～坠兰?～～塑,堡竺～璺,壁垒旦～堡竺兰,茎～ 肌肉添加批旦堕奎,堑～,土,(,又士,(,銮墨墨垫～丝～ 旦竺,垒,竺兰～旦垒呈,垒里兰曼里～里 盗鳖～丛型丝,盗～三,兰～塾宣墼塑 ,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,士,，,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,(,,,,(,,,,(,士,(,,,,(,, ,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,士,(,,,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,士,(,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, 表,脱二氧喹烯酮在鲤皮中准确度与精密度测定结果 ～鱼竖～里璺垒～里旦～里里里羔～坚皇巳～旦里,兰～,里,～鱼竺兰,茎 鱼皮添加批旦堕垩～墅～,士,(,,一士,(,銮墨墨墼～墅, ,～世,望竺里篁～,里皇,坠～～璺坠璺垦,旦 堕鏖(丛,丛型(达～三～兰～地囱丝闽一 ,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,士,(,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,土,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,, ,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,土,(,,,,(,,士,(,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,士,(,,,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,(,,,(, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,士,,(,,,,(,, ,,,, 喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究 表,脱二氧喹烯酮在肝脏中准确度与精密度测定结果 ～垒垒～兰竺?兰里望三～翌竺,～垫垒,堡里～兰,旦里竺～垒兰墨,茎肝脏添加批旦堕奎～墅,,土,(,,一士,(,銮墨墨墼～丝～ ?旦竺～里旦兰兰～旦翌皇,垒～,?竺三 盗鉴～釜垒:垦越盗～～～兰～墼壹整圈 ,,,,,(,,,,(,,,,(,,,,。,,,,(,,,,(,,士,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,(,, ,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,,,(,,，,(,,,(,, 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