赤丹丸的提取工艺及提取物的药效学研究（可编辑）

赤丹丸的提取工艺及提取物的药效学研究（可编辑） 中国医科大学 硕士学位论文 赤丹丸的提取工艺及提取物的药效学研究 姓名:阮国虎 申请学位级别:硕士 专业:药理学 指导教师:菅凌燕 20070401中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文 中不包含其他人已经发或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他 教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做 的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意. 申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。 论文作者签名:‘阻主虚。日期:垒:. 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻 读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学.本人保证毕业离校 后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通 讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关 部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公 布学位论文的全部或部分保密内容除外,以采用影印、缩印或其他 手段保存论文。 阮乏、 免 论文作者签名: ‘迄诬、 指导教师签名: 日?中文论著摘要? 赤丹丸的提取工艺及提取物的药效学研究 目 的 为了制备出疗效更好、服用更方便、更符合现代标准的中成药,我们对赤丹 丸 的提取工艺进行优化改进,并对应用优化工艺提取的物质 进行药效学研究,为赤丹丸的进一步研究提供理论依据。 方法 一、提取工艺 采用正交水平表进行试验,以提取物中芍药苷、丹参酮的含量 为考察指标,考察乙醇浓度六、溶剂乙醇、水用量倍数、提取时间 三种因素对提取结果的影响,从而筛选出最佳的工艺条件。 二、芍药苷、丹参酮?含量的测定一反相高效液相法 、芍药苷含量测定的方法 ?. ,柱,以乙腈一水磷酸 色谱柱为 ::.为流动相,流速为?,检测波长,柱温为。 、丹参酮的测定方法 色谱柱为 ?.柱,流动相组成为水甲 醇:,流速为?,检测波长为,柱温为。 三、药效学试验 对慢性盆腔炎模型大 赤丹丸提取物 鼠的作用。采用苯酚胶浆致炎剂诱导的慢性盆腔炎模型大鼠,将模型大鼠分 为 大剂量组、中剂量组、小剂量组、组、正常组、模型组、妇炎康组。 光镜下观察大鼠子宫的组织学形态,放免法测定血清中自细胞介素和 肿瘤坏死因子.的含量,测定全血的血液流变学,观察有关各项指标的变化。 初步探讨对的作用机制。 观察对小鼠耳廓肿胀和大鼠足肿胀炎症模型的影响,考察其抗炎作用;对小 鼠热板法和醋酸扭体法所致动物疼痛反应的抑制作用,考察其镇痛作用;通 过小 鼠耳廓毛细血管的变化,考察其对微循环的作用。 结果 一、建立了赤丹丸的最佳提取工艺 采用倍量的%乙醇回流.,然后用倍量的水再回流.。通过此工 艺得到的提取物中芍药苷、丹参酮含量最高。 二、药效学试验表明 该提取物能够降低小鼠的痛阈,减少小鼠的扭体次数;能减轻耳、足肿胀的 程度:能够增加小鼠耳廓毛细血管的开放数量,扩张末梢动静脉的口径;能改 善 模型大鼠的血液流变学,缓解宫腔粘连闭塞或扩张,减轻子宫组织中炎细胞 的浸 润,纤维结缔组织的增生,治疗组较模型组,水平显著升高,.水平有 所降低。 结论 、采用倍量的%乙醇回流.,然后用倍量的水再回流.。此工 艺得到的提取物中有效成分含量高、稳定、重现性好。 、有明显的抗炎、镇痛和改善微循环的作用;并对慢性盆腔炎有治 疗作用;的疗效强于。 关键词 ;正交试验;慢性盆腔炎;药效学 ?英文论著摘要 . , 啊 .., . ,. ? .西 ? “.,::., ? . ? . , :, . 船?., . . ; . 翻玎眦 . :%,. .. . :. .. .;.鹤: .%,. . ,. . ., ; .?.; ; ; ?英文缩略语论文一? 赤丹丸提取工艺的优化 刖 舌 近几十年来,中草药的生产实现了一定程度的机械化和半机械化。传统中药往 往被认为有效成分含量低、杂质多、质量不稳定,因此用药多建立在的基础 上,不能与现代医学接轨。为解决这个问题,中药必须走提取和纯化的道路。中 药的提取包括提取、澄清、过滤和蒸发等许多的单元操作。提取是其中很重要的 单元操作,是大多数中药生产的起点。提取工艺的好坏,直接关系到中药材的 利用 率和后续加工的难易。提取工艺可以视为中药生产现代化的重要环节,因此, 研 究并优化中药提取工艺十分必要。 本研究旨在对赤丹丸的提取工艺进行优化,考察乙醇和水的用量,提取时间, 乙醇的浓度对有效成分的影响,从中筛选出最佳的提取工艺。 材料 、仪器 电热恒温水浴箱上海亚荣生化仪器厂 赛多利斯分析天平德国赛多利斯公司 .型旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂 型真空泵上海亚荣生化仪器厂 液相色谱仪美国安捷伦公司,系列四元泵, 色谱工作站。 检测器, 超声清洗机天津奥德赛恩斯仪器有限公司 、药材及试剂 赤芍产地:辽宁批号北京京兴中药饮片厂 丹参产地:河北批号北京京兴中药饮片厂 黄芩产地:河北批号北京京兴中药饮片厂 三棱产地:山西批号北京京兴中药饮片厂 茯苓产地:四川批号北京京兴中药饮片厂 以上药材经鉴定检查,符合中国药典版一部相关药材项下规定。 甲醇色谱纯天津市四友精细化学品有限公司 乙醇化学纯盘锦天源药业有限公司 乙腈色谱纯天津市四友精细化学品有限公司 芍药苷对照品批号.中国药品生物制品检定所提供 丹参酮?批号中国药品生物制品检定所提供 方法与结果 一、正交实验设计 、提取溶媒的确定 本处方中的君药是赤芍和丹参,芍药苷是赤芍的主要成分,丹参的主要有效 部位是丹参酮和丹参素,既有脂溶性的也有水溶性的,所以采用水和不同浓 度的 醇作为溶剂,先醇提,再用水为溶剂进行提取。 、因素水平的确定 根据处方药物所含化学成分的性质,确保有效组分的提出。选择乙醇浓度 溶剂乙醇、水用量倍数、提取时间三个因素,每因素采用不同水平见表 。以芍药苷和丹参酮含量为考察指标,进行正交实验。其中醇提取和 水提取各进行次。 表,正交试验因素水平表,、实验安排 , 分别按处方取药材共,按正交实验表安排实验,将各提取液浓缩至 得供试品浓缩液。 二、样品溶液含量测定 、芍药苷含量的测定 ,.柱; 色谱条件色谱柱为西 . 流动相为乙腈一水.磷酸::.;流速为?;检测波长为;柱温 为?。 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品置于量瓶中,加适 量甲醇溶解,超声处理,放冷,然后加甲醇至刻度,摇匀,作为芍药苷对照品储 备液。精密量取,定容到的量瓶,作为对照品溶液。 供试品溶液的制备精取供试品浓缩液,。水浴蒸干,加入甲醇约 ,超声处理,定容到量瓶,摇匀,过滤,作为供试品储备液。精密量取 该溶液,定容到的量瓶。然后用..微孔滤膜滤过,作为供试品溶 液。 阴性对照液的制备按处方比例,取除赤芍其他味药材,按供试品溶液 制备方法的制备。 干扰试验照上述色谱条件,分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照 液,注入色谱仪,在以上色谱条件下检测,芍药苷的保留时间为.。空 白试验无干扰。 线性关系考察精密移取芍药苷对照品储备.、.、.、.、.,分别 加入甲醇定容至,依次迸样 .测定,测定峰面积见表。以峰面积值 对芍药苷浓度进行线性回归,得回归方程: .。. 表,芍药苷的标准曲线. . .. 盯 结果表明:在??。范围内,芍药苷的峰面积与进样量有良好 的线性关系标准曲线见图。 精密度试验将芍药苷对照品溶液./分别重复进样次,每次 ,芍药苷峰面积为.%见表。实验表明,精密度良好。 表,芍药苷的精密度 , . 稳定性实验取对照品溶液./于、、、、,进样 .。测得芍药苷对照品的面积值为.%见表。实验结果表明,对照 品溶液在内稳定性良好。 表,芍药苷的稳定性, 萨 样品测定结果按上述方法操作,测定供试品中芍药苷的含量见表。 、丹参酮含量的测定 对照品溶液的制备丹参酮对照品.,置棕色量瓶中,加 甲醇溶解,超声处理,放冷,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液。 取对照品储备液,定容到的量瓶,作为对照品溶液。 供试品溶液的制备精取浓缩液,水浴蒸干,加入甲醇约, 超声处理,定容到量瓶,摇匀,过滤,再取该溶液,定容到的量 瓶。然后过.微孔滤膜,作为供试品溶液。 ,性对照液的制备按处方比例,取除丹参外的其他味药材,按供试品 溶液的制备的方法的制备。 色谱条件色谱柱为 ..,柱; 流动相为水.甲醇:;流速为?;检测波长为;柱温为?。 干扰试验照上述色谱条件,分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照 品溶液,注入色谱仪,空白试验无干扰。 线性关系考察精密移取丹参酮母液.,.,.,.,.置于 容量瓶中,分别加入甲醇定容至,依次进样.测定,记录色谱峰面 积见表。以峰面积对丹参酮?的浓度进行线性回归,得丹参酮? 回归方程: .。.表,丹参酮的标准曲线 : , .】『 . . . . . 一, ? 结果表明:丹参酮在.?.肛?范围内线性关系良好标 准曲线见图。 精密度试验将丹参酮对照品溶液.分别进样次,每次 此,丹参酮峰面积为.%见表。实验表明,精密度良好。 表,丹参酮精确度 ,稳定性实验取对照品溶液./于、、、、,进样山。测得丹参酮对照品的面积值 为.%见表。实验结果表明, 对照品溶液在内稳定性良好。 表,丹参酮的稳定性:,样品含量的测定按上述的方法操作,测定供试品中芍 药苷的含量见表 。 、结果分析 正交试验结果表明,乙醇的浓度对芍药苷、丹参酮?浓度的影响有显著性 差异见表、。经直观比较分析,芍药苷的最佳提取工艺为,丹参酮 ?最佳工艺条件为。综合分析比较,确定最佳的提取工艺为即 加倍量%的乙醇回流提取,提取次,每次.;再用倍量的水提取 次,每次.。 表,正交试验结果 ,翌璺 鱼虫茎 . . . .. .. . . . . .. .. .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ?憨玛?? . . . . 表,芍药苷的方差分析表, 堕塑 旦螋 ?. . . . . . . . . 表,丹参酮方差分析表 , 、最佳工艺的验证 按赤丹丸的处方,称取份样品,其中每份样品中含各味药材,根据优 选提取工艺提取,浓缩,按含量测定方法测定其中芍药苷、丹参酮含量见 表。验证试验结果表明芍药苷、丹参酮的含量均处于较高的水平,所选提 取工艺条件为最佳提取工艺路线,提取工艺稳定可靠。 表,最佳工艺验证结果 . 讨论 考虑到赤芍中主要化学成分为单萜及单萜甙类化合物【”,丹参中主要的成分 是脂溶性的二萜类化合物和水溶性的酚性酸类化合物闭,三棱中含有挥发油【】,黄 芩的主要化学成分是黄酮类】’茯苓主要化学成分为多糖和三萜网。考虑到各味药 材中的物质的化学性质不近相同,为了尽可能将化学成分提取完全,因此采用了 先醇提再水提的工艺。 赤芍、丹参为该方的君药,所以主要以这两味药材为考察对象。芍药苷为赤 芍的主要活性成分,丹参酮为丹参的主要活性成分,所以选择这两组成分的 含量作为优化工艺考察指标。芍药苷的含量测定过程中考察了甲醇一水:【、 :网结果芍药苷与其他成分没有完全分离,采用乙腈..%磷酸溶液:川 芍药苷也没分离完全,最后将流动相调至乙腈一.%磷酸溶液:,芍药苷得 到较好的分离。丹参酮的测定首先考察了甲醇.水:嘲,结果丹参酮 与其他成分完全分离,又考察了乙腈.水:【,啪,结果效果也很好,与乙醇. 水:的效果一样,考虑到乙腈的毒性较大,选用了第一种方案。 经过对各种条件下的提取物进行的检测,直观比较分析,芍药苷的最佳提取 工艺为,丹参酮最佳工艺条件为。因经方差分析可知提取时间 和溶剂的用量对芍药苷、丹参酮?含量的影响无显著意义,从节约和效率第 一 的角度出发, 选取作为最佳的提取工艺,验证试验结果表明按最佳工艺 进行提取,芍药苷、丹参酮?的含量均处于较高的水平,表明该提取工艺稳定 可靠。 结论 赤丹丸的最佳提取工艺:倍量%的乙醇回流提取,提取次,每次.; 再用倍量的水提取次,每次.。 ?论文二? 提取物的药效学研究 刖 罱 ,是指女性内生殖器官及 慢性盆腔炎 其周围的结缔组织、盆腔腹膜发生炎症。现代医学认为主要系病原体感染, 刺激机体免疫细胞产生炎症的临床表现,炎症导致缺血和炎症介质释放,引起组 织损伤。另外还有产后或流产后感染、宫腔内手术操作术后感染、经期卫生不良 引起的急性盆腔炎未能治愈而引发的慢性盆腔炎。目前西药对该病的治疗以抗生 素和皮质激素治疗为主,对于改善症状有一定的疗效,但是无法从根本上消除病 根。 中医学中无慢性盆腔炎的病名,根据历代文献的论述,结合其临床表现,归 属中医“妇人腹痛”、“带下病”、“痛经”、“不孕症”等疾病范畴。其发病主要与经期、 产后摄生不慎,湿热之邪乘虚入侵,湿热蕴结下焦,阻滞气机有关。此外,其发 病还与患者素体和用药有关,如素性抑郁,或素有寒湿,或治疗过用清湿攻伐之 品等。因湿热致病缠绵,湿热郁久,影响气血运行,可致湿热瘀结;若素性抑郁 或因病致郁,则可致气滞血癖;若素有寒湿,或病情迁延治疗过用清湿之品,病 从寒化又可致寒凝血癖。若素体虚弱,或病久损伤正气,致正虚邪恋,则可出现 气虚血癖,或肾虚血癖之症。病变发展过程中,常有脏腑功能失调,以肝、脾、 肾功能失常多见,可致病变因果交织,虚实错杂;本病症常因体虚、劳累或情志 不畅而诱发,每逢经期盆腔郁血时加重,故病情常反复难愈。中医药根据不同的 辩证进行用药,可取得了较好的效果。中成药内服治疗具有使用方便、携带方便、 利于长期用药的优势。 赤丹丸是由芍药、丹参、黄芩、茯苓、三棱五味药材组成,主要功效为清热 利湿、解毒化瘀、散结止痛。赤芍的主要功能为清热?血,消肿止痛,用于温毒 发斑,肝郁胁痛,经闭痛经,痈肿疮疡等;丹参具有活血通经、祛瘀止痛、清心 除烦、?血消痈等作用,用于血瘀、虫热、血瘀兼热或矗热兼瘀所致的病症;茯 苓具有利水渗湿,健脾宁心的作用,用于水中尿少,痰饮眩悸的作用;黄芩具有 清热燥湿,泻火解毒,止血的功效,用于湿温,湿热痞满,血热;三棱具有破血 行气,消积止痛的功效,用于瘀血经闭,食积胀痛。方中的药材大部分都具有清 血热,解毒燥湿、活血化瘀、止痛的功效,并具用一定的抗炎抗菌的作用。诸药 合用,共达治疗盆腔炎的功效。 材料 、药品及试剂 提取物:按照“论文一”优化的提取方案提取 妇炎康片:吉林市中研药业有限公司批号 赤丹丸:中国医科大学附属盛京医院药厂批号 以上三种药物试验所用的剂量均指生药量,临用前用蒸馏水配制成所需浓 度 .、放免试剂盒:北京华英生物技术研究所批号 二甲苯: 国药集团化学试剂厂批号 苯酚:上海市试剂一厂批号 由辽宁省药检所提供 菌种:致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 冰醋酸:上海化学试剂一厂批号 西黄蓍胶:宏远化学试剂公司提供批号 角叉菜胶:公司批号 、动物 大鼠,昆明种小鼠,均由中国医科大学动物中心提供。 、主要仪器 型电子天平:上海天平仪器厂生产 电热恒温干燥箱:上海三星电热仪器厂生产 型显微镜:日本公司 血液粘度测定仪:上海医大医药科技总公司生产 电热恒温水浴锅:上海医疗器械五厂生产 .放射免疫计数器:中国科技大学实业公司 方法 一、抗炎实验 、二甲苯致小鼠耳肿胀实验【】 取昆明种小鼠只,雄性,体重:,随机分为组,其中一组为空白 组、赤丹丸 组,其余五组分别为妇炎康 高、中、低剂量组。其中 组、 各剂量组分别灌胃给于.、.、.?的,阳性组灌胃给予 .?和组给予.?的,空白组灌胃给予等容量的溶媒。连续 ,末次给药.后,小鼠右耳里外两面涂二甲苯.,致炎后小鼠脱颈 椎处死, 用内径的打孔器冲下双侧耳片的同一部位,分析天平称重,肿胀 度右耳重量.左耳重量。 、角叉菜胶致大鼠足肿胀实科】 取大鼠,雄性,体重.士.,随机分为组,分别为空白对照组、 ?汀组、组、低、中、高剂量组。各剂量组分别灌胃给于.、 拘,阳性组灌胃给 .、.? .?,组给予 .?的,空白组灌胃给予等容量的溶媒,连续。末次给药后,于每 只大鼠右后足跖皮下注入.%的角叉菜胶,分别于给药前及注射角叉菜胶后 .,,,,用毛细管放大器装置测大鼠足容积。 肿胀度致炎后足爪容积一致炎前足爪容积 二、镇痛实验 、醋酸致小鼠扭体实验【 取小鼠只,雄性,体重士,随机分组,即空白对照组、?玎组、 组、高、中、低剂量组。给药方法同耳肿胀实验,连续灌胃给药, 每天给药次,于第给药后,各鼠腹腔注射.%的冰乙酸.,观察药 后内小鼠扭体反应次数。 、小鼠热板致痛实验【 选取体重在~克的雌性小鼠,分别将其置于已放入恒温.?水浴 中的大烧杯里,实验室温度控制在~?,以舔后足的时间作为痛反应阈值, 选择痛阈大于,而小于的小鼠只,取两次的平均值作为给药前的正常值。 动物分组给药方法同上。连续给药,于末次给药后,,,测定各组小鼠 的痛反应阈值。 三、小鼠耳廓微循环实验 取体重在~克的昆明种小鼠,动物分组给药方法同上。末次给药,腹 腔注射%水和氯醛./,麻醉后以医用橡皮膏轻贴拉去耳廓毛,将小鼠腹 部向下固定在小鼠观察台上,调节高度使右耳廓平展贴于载玻片上,并在右 耳廓 表面滴加少量石蜡固定,在显微镜下,观察小鼠耳廓微循环情况,记录末次给 药 后,耳廓微循环细动脉第三分支、细静脉第三分支?血管口径和毛细血管 开放量网点计数法,以判断微循环改善情况。 四、对慢性盆腔炎模型的作用 、模型复制与考察 造模试剂制备液化苯酚,西黄蓍胶.改良:制备苯酚胶浆时,因 加.西黄蓍胶,溶液太稠。经反复试验,将西黄蓍胶量改为. ,溶液粘度 适中。甘油,蒸馏水,制成苯酚胶浆。 用肉汤培养基溶解金大肠杆菌,置?,使细菌复活增殖,接种在营养 琼脂上,置 ,进行菌液稀释,应用蒸馏水,分别取经培养的菌 株,用标准试管相当于亿个菌比浊,得数为所需要的菌液浓度个/。 模型的复制‘,川与筛选取只雌性大鼠,称重,腹腔注射%的 水合氯醛麻醉,剂量./。腹部剃毛备皮,常规消毒,下腹正中切口约, 因脂肪多,将切口扩至约,找到子宫,用号针头在子宫分叉处向卵巢方向 缓慢注射苯酚胶浆。注毕,分层关腹,消毒术区。次日发现其中一只大鼠死 亡,分析原因,可能是造模用苯酚胶浆剂量过大,导致动物死亡。故再模造时 将 苯酚胶浆减半,用量改为/只。另取只雌性大鼠,称重。除苯酚胶浆用量改为/ 只,其余处理同前,术后无一只死亡。 取只雌性大鼠,称重,分别为、。以混合菌液,代替 苯酚胶浆,其余同上,术后只大鼠全部死亡,死亡原因可能为急性感染。另取 只雌性大鼠,分别称重,混合菌液用量改为/只,其余同前。 上述造模成功大鼠的数量:苯酚胶浆组只,混合菌接种组只,造模的两 组大鼠常规饲料喂养,后观察其病理变化。 模型的验证【造模后,大鼠腹腔注射%的水合氯醛进行麻醉,剖 腹,摘取子宫,用%福尔马林溶液固定,石蜡包埋,常规切片,染色,光镜 下观察子宫及周围组织病理形态学变化。 在光镜下观察到,苯酚胶浆法模型大鼠子宫宫腔有粘连闭塞或扩张,腔壁粘 膜固有层腺体结构消失,肌层与粘膜层结构紊乱、分层不清;上皮细胞变性坏 死、 脱落,浆细胞及淋巴细胞浸润,内膜充血水肿。基本符合临床慢性盆腔炎的病 理 表现,提示模型符合要求见图。 在光镜下观察到,混合菌接种法模型大鼠子宫及周围组织水肿,大量白细胞 浸润,子宫内膜充血肿胀,部分脱落,个别部位各层之间分离,形成空腔,局部 观察到层次紊乱现象。基本呈急性炎症表现,提示模型不符合要求见图。 、对苯酚致慢性盆腔炎模型的作用 模型的制备选用体重为~的雌性大鼠只,随机分为 对照组假手术组、模型组、组、组、高、中、低剂量组, 除假手术组,其他各组按照筛选的方法复制模型,造模后第开始治疗,灌胃 给药,连续。 给约方案假手术组:未给予苯酚胶浆处理,给予蒸馏水;模型动物组: .、.、. 造模动物,给予蒸馏水;三个剂量组:分别给予 .一,组:给予. 。均为灌 ;组:给予. 胃给药,每日一次,连续。 造模动物血中细胞因子的测定 在连续给药日后,各大鼠眼眶后取血 .,血样经低温离心? ,分离血清,进行白细胞介素. .、肿瘤坏死因子 含量的 测定。 .:先在试管中加样品,再加.及兔抗几.抗体各肛摇 匀,?温育,待测。次日,将温育的一试管中,各管再加入 分离剂,混匀,室温放置分钟, 离心分钟,吸取上清,测各管 沉淀的放射性计数。 师.伍:先在试管中加样品,再加..及兔抗抗体各 摇匀,温育, 后加上标记物,摇匀,温育 ,待测。次日将‘ 温育 的.试管中,各管再加入分离剂,混匀,室温放置分钟, 离,分钟,吸取上清,测各管沉淀的放射性计数。 造模子宫组织取材及病理切片的制作 末次给药后,用水合氯醛 %腹腔注射麻醉大鼠.,腹部正中切开,摘取双侧子宫,称重后 剪除部分,固定、包埋、染色。光镜下观察组织形态学各组大鼠子宫组织形 态学 变化。 脾脏和胸腺指数测定 末次给药后,麻醉大鼠,摘取胸腺和脾脏,用 电子天平分别称重,计算脏器系数/体重。 末次给药后,将动物用%的水合氯醛 血液流变学指标的测定 ./腹腔麻醉,剖腹,腹主动脉取血,置于预先加入抗凝剂的试管中,用 血液粘度测定仪测定全血粘度 、血浆粘度 、红细胞压积 。 五、统计学处理 所有数据应用.统计软件处理,结果以表示,对各组检测变量 进行单因素方差分析,两两比较采用 检验,.,有统计学意 义。 结果 一、抗炎作用 、对由二甲苯致耳肿胀的影响 各剂量组、组、组与对照组相比,差异有显著性.;.、.?‘剂量组与组相比, 差异有显著性.;. ?茸剂量组与组相比,差异无显著性妒.见表。 表,对二甲苯所致的小鼠耳肿胀的影响叉士, , , % / 墅堡垫型堡 / .士. ? . .士.‘ . . . .啦蚪.‘ . . .士. . . . .. . . . ..‘ ‘.: ‘. 、对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 各剂量组、组、组与对照组比较,差异有显著性., 各药均能抑制由角叉菜胶引起的大鼠足肿胀,作用在给药后.开始,持续到给 药后。给药后作用最强;在、时,的.、.铲剂量组 与组比较,差异有显著性.,在.、时比较,差异无显著性见 表。 表,对角叉菜胶所致的大鼠足肿胀的影响士, , , 、 .; ?. 二、镇痛作用、对小鼠由醋酸引起的扭体反应的影响 各剂量组、组和?玎组与对照组比较,差异有显著性., 均减少小鼠的扭体次数;的.、. .剂量组与组比较,差异 有显著性.见表。 表,对小鼠扭体痛反应的影响夏士,, 士, /‘ / .士. . . .士.?‘ . . .士.‘ .士. . . . .士. . .士. ’.; ‘. 、对小鼠热板法致痛的影响 各剂量组、组和组与对照组比较比较,差异有显著性 .,能提高小鼠的痛阈;的各剂量组与比较,仅在.? 剂量时差异有显著性.,在同样的剂量下,无显著性差异.见 表。 表,对小鼠热板致痛的影响士, , 趸士,.; ?. 三、对小鼠耳廓微循环的影响 各剂量组、组和组与对照组比较比较,差异有显著性.;组与.、.剂量组比较, 差异有显著性. 见表。 表,对小鼠耳廓微循环的影响士,, 弛, 望婴 里竺型塑 垒 堑 翻咀蚰幽衄 / .. .在眨. .士. .士.?.士.? .士.? . ? .士. .士.宰? .士.? . .士. .士. .士. . .士. .:. .士. . .仕. .:. .士. 一.; ‘. 四、对苯酚致大鼠慢性盆腔炎模型的影响 、对模型大鼠血中细胞因子的影响 和阳性对照药物在各剂量水平下与模型组比较比较,差异有显著性 尸.;.、.铲剂量组与组比较,差异有显著性 .见表。 表,对模型大鼠血中细胞因子的影响士, , 趸士, / ?/ ?/ /.士. .土. . . .士.‘ .士.‘ . . .士.‘.士.‘ . . .士. .钍.. .士. .士.’ . .士..士.? / .士..士?‘.; ‘. 、对模型大鼠脾脏和胸腺指数的影响 对胸腺指数的影响,和阳性对照药物在各剂量水平下与模型组比较, 差异有显著性.:而对脾脏作用,各组与模型组比较,差异无显著性.:各剂量 组与组比较,对脾脏和胸腺指数的影响无显著性差 异.见表。 表,对模型大鼠胸腺、脾脏指数的影响, , 士, 丛盟 型盟 型虫 .牡. /.士. . . .士..士. . . .士.?.士. .士. . . .士. . ....士. . .钍..士. .:... ‘. ’.: 、对模型大鼠血液流变学指标的影响 造模后大鼠的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积等指标都有显著的升高,与 各给药组比较,差异有显著性.;组与组比较,仅.. 剂量时,全血粘度、血浆粘度、红细胞的压积的差异有显著性.见表。 表,对模型大鼠血液流变学指标的影响趸士, ,自士, /‘曲./ ./ ./】 , .士. .:. .士. . . .士. .:. .士. . .士.‘ .:.‘ .: .‘‘ . .钍. . . .士. .士. .士. . .士. .士. .士. . .士. .:. .士. / .. .士. /‘/ , .. .. .. . . .士. ..‘.士.? . . .士.‘ .士.?‘.士. . . .士. .士..土. . .土. .士...士. . .士. .土..士. ,.:. .士..士. 。.; ‘. 、对模型大鼠子宫病理变化的影响 苯酚胶浆复制的慢性盆腔炎模型大鼠,子宫组织病理具有宫腔粘连闭塞或扩 张、腔壁结构紊乱内膜腺上皮细胞变性坏死,炎细胞浸润及充血水肿等病变, 基 本符合临床慢性盆腔炎的病变,提示模型符合要求。肉眼见用药组大鼠的子 宫肿 胀程度、周围组织粘连情况都较模型对照组轻见图、。镜下观察显示,模 型对照组绝大多数子宫宫腔闭塞粘连,腔壁结构紊乱,上皮细胞变性、坏死、 脱 落,内膜可见大量炎细胞浸润和成纤维细胞增生,与组比较差异显著见 图、。图,苯酚胶浆造模大鼠子宫旺染色 图,混合菌液造模大鼠子宫染色图, 空白组大鼠子宫 图,治疗后大鼠子宫图,空白组大鼠子宫染色 图,治疗后大鼠子宫染色讨论 本实验结果显示,各剂量组均有明显的抗炎作用;其中.、.? 剂量组的抗炎效果强于组,表明在同等剂量下,的抗炎效果更好。 的抗炎的可能是抑制组织胺所致血管通透性增高;抑制炎性细胞的渗出; 的平 调整调节生理功能最重要的一对产物一血栓素及前列环素 衡,减少生成,增加含量,降低,,减轻炎症组织病理损害,从而达 到抗炎的作用。 本实验结果显示,各剂量组的镇痛效果明显;.、.?剂量组 的抗外周疼痛效果好于组,而对抗中枢性疼痛的效果,.?剂 量组的效果与组并无差异。镇痛作用在中枢可能是由于抑制丘脑后 核的放电而发挥作用‘ 】;在外周可能是阻滞神经肌肉传掣,减少致痛物质 的合 成或释放,加速了致痛物质的消散和灭活,从而达到了镇痛的作用。 本实验的结果显示,能增加末梢动静的口径,增加毛细血管的开放数 量,改善了局部的微循环;.、. 剂量组比组的小鼠耳廓 和的口径增大明显,耳廓毛细血管开放量增多,说明在改善局部的微循环 方面,强于。能改善外周血液循环、提高机体的耐缺氧能力、 加快微循环血液流通和增加毛细血管网等作用,于局部病灶的区域循环及组 织的 缺氧状态改善,促进局部水肿的消退和炎症的吸收,从而起到治疗作用【?。 参与炎症调控的重要细胞因子,几.产生减少或被清除可使免疫应答明 显下降口。能诱导产生,增强机体免疫功能可能是治疗盆腔炎的作 用机制之一”。是活化的单核巨噬细胞产生的一种重要的细胞因子圈。在感 染性疾病和炎症方面,通过刺激血管内皮细胞表达粘附分子。适度反应产生 适量的,增进机体的免疫功能,调节多种免疫细胞共同杀灭和消除入侵的致 病原;过度反应产生过量,则产生过于剧烈的免疫反应,呈现其毒性作用, 对机体造成损害田】。治疗慢性盆腔炎的机制可能是抑制外周血液中单核 细胞和巨噬细胞合成、分泌.,从而实现临床疗效的。 本实验、.浓度的检测显示,治疗组大鼠.浓度较模型组显著升 .、. 高,.伍的水平与较模型组显著升高。 ?剂量组的浓度 要高于组,而.的浓度低于组。表明对.、的调节作 用要强于。 胸腺、脾脏作为机体重要的免疫器官,两者在免疫应答的过程中起着重要作 用“,胸腺是淋巴细胞成熟的场所,脾脏是贮存淋巴细胞的场所,实验中模型 组大鼠的胸腺指数低于除 .?剂量组以外的其他组,这说明 在一定程度上能够调节淋巴细胞活化成熟,参与细胞免疫应答。 组明显降低大鼠的血粘度,没有呈现剂量依赖性;的治疗机 理可能为通过促毛细血管增生,改善局部病灶的血液循环及组织的低氧状态,促 进局部水肿的消退和炎症的吸收,纠正血液的“浓”、“粘”、“凝”、“聚”状态;从而 起到治疗慢性盆腔炎的作用.。 病理结果显示,对大鼠慢性子宫内膜炎性粘连具有较好的治疗效果。 疗效可能与其具有明显的抗炎和活血化瘀作用有关“。这些作用促使大鼠盆腔 血流速度相对加快,局部血流灌注量相对增加,从而减少了血细胞附壁,降低了 毛细血管的通透性,抑制炎区内炎细胞浸润和成纤维细胞的增生,以达到减轻子 宫炎变程度,促进炎症的吸收和组织的新陈代谢,缓解并治愈炎性粘连,使因炎 性粘连而阻塞的宫腔通畅。 结论 、能明显减轻实验动物的局部炎症反应,能降低模型大鼠血液流变 学的相关指标,具有活血化癖的作用,有镇痛作用。 、能明显减轻模型大鼠子宫内膜慢性炎症的损伤,减轻炎细胞的过 度浸润,减少纤维组织的增生。 、能调节实验动物的免疫功能,增强动物机体的抵抗力,具有免疫 调节作用。 、的疗效强于。本研究的创新性自我评价 、改进与完善了造模方法,该方法具有操作简便,可重复性好,安全经济的 特点。 、本实验考察药物对炎症、疼痛、微循环及慢性盆腔炎模型大鼠的影响,全 方位、多角度的对药物进行了评价。 参考文献 王文祥,蒋小岗,顾明,等.芍药的化学成分研究.天然产物研究与开发,,: . 胡小戎,曹风梅.丹参的药理、临床应用与制荆研究.中国新医药,,:?. 董学,姚庆强.中药三棱的化学成分及药理研究进展.齐鲁药事,。:. 温华珍,肖盛元,壬义明,等.黄芩化学成分及炮制学研究.天然产物研究与开 发., :?.. : .. :. 粱远园,祝晨蘸.法测定固精丸中芍药苷的含量.中药新药与临床药理,,: 一. 陈滴,任乔森,刘听.愈糖舒冲剂质量标准的研究.吉林大学学报医学版,,: . 张鹏,陈世虎,李巧如.高效液相色谱法测定乳核内消颗粒中芍药苷的含量.中国医院 药学杂志,,:.. 刘海青,吕东,陈岳蓉。等.全国中药材市场商品丹参中种丹参酮成分的.测定.药 物分析杂志,,:. 乔晋萍,侯佩玲,李亚伟,等..法测定大鼠血浆中丹参酮浓度及其药代动力 学研究.药学学报,,:?. 徐叔云?药理实验方法学?第版?北京:人民卫生出版社,?. 沃德尔?药理学实验指南?北京:科技出版社,?. 陈奇?中药药理研究方法学?第版?京:人民卫生出版社,? 苗明三?实验动物与动物实验技术?第版?北京:中医药出版杜,?. 陈杰,李甘地?病理学?第版?北京:人民卫生出版社,??, . . ,,:?. 刘春林,施文质。孙丽,等.丹参对猫丘脑后核内脏痛放电的影响.中国中药杂志,, :.王朝虹,闵知大.芍药化学成分及药理研究.时珍国医国药,,:. 徐新玉。康新,柴霞,等.中西医结合治疗类风湿关节炎及对甲襞微循环的影响.中国 中医急症,,:? 安云庆?医学免疫学?北京医科大学出版社,?.. 佟丽.三种植物多糖对小鼠..的影响.中国药理学通报,,:. . 嘶, , . :. .笛 . ,,:?. 郑晓宾,韩德五,许瑞龄,等.丹参防治实验性急性肝损伤机制的研究.中国免 疫学杂 志,,:?. 孔惠谨,江芹,吴德霞.急慢性盆腔炎患者治疗前后血液流变学变化的观察. 中国血液 流变学杂志,,:. . .咖,,:. 皮镇江,董正义,陈玉珍?简明临床血液流变学?辽宁科学技术出版社,?. 史云.盆炎方对肾虚血瘀型慢性盆腔炎免疫影响的临床与实验研究:【硕士论 文】.北京: 北京中医药大学,:. 唐晓华.结合辨证用药治疗慢性盆腔炎例.江苏中医,,:?. ?综述? 慢性盆腔炎的中医药治疗进展 慢性盆腔炎是妇科临床中的常见病、高发 病,且常常反复发作,缠绵难愈,易引起宫外孕、不孕、甚或神经官能症等并发 症,对患者生活、工作、心理造成一定的影响。近年来新一代的抗菌药物的不断 涌现,为临床医师提供了更有效的治疗方法,但新的病原体又不断被发现,甚至 更严重的影响着女性生殖系统,因此在妇产科领域中,生殖器炎症的防治仍是一 项重要的课题。同时,对于慢性盆腔炎来讲,病理过程以组织的变性、增生、粘 连为主,局部已无或极少病原体的存在,因此抗生素治疗无理论根据,从临床疗 效来看,单纯应用抗生素治疗效果不理想,大多配合分解组织粘连、增强免疫力 药物.糜蛋白酶、胎盘组织液等联合应用,有一定的效果。考虑抗生素的长期应 用,可引起机体耐药,菌群失调,肝肾功能损害等一系列副反应,从抗生素的合 理应用角度来讲,亦不宜采用。近年来在中医药治疗慢性盆腔炎方面报道颇多。 收效亦佳。兹将近年来中医治疗本病的进展综述如下: 一、临床研究 、辨证施治,体现中医特色 辨证论治是中医的思想基础,近代医家多在此指导下,与辨病相结合,应用 在本病的治疗领域,收到不错的效果。王氏将慢性盆腔炎分为湿热型及寒湿型两 种症型,认为本病的病机为:湿浊热毒内蕴胞宫,气滞血瘀,治法重在祛湿热, 清邪毒,调气机,祛血瘀。湿热型者治以加味四妙汤合金铃子散。寒湿型治以加 味四妙汤合失笑散。认为慢性盆腔炎以实热型居多,但辨证时仍应分清症候属虚 属实,为寒为热,在气在血,然后据症用方【。薛氏将本病分为湿热瘀结型,寒 凝气滞型两型。湿热型处方银花、连翘、生鳖甲、红臻、紫花地丁、元胡、木香、 丹参。寒湿型治以桂枝、当归、川芍、元胡、小茴香、五灵脂、生蒲黄、炮姜。 观察例,总有效率%【】。另有书中将慢性盆腔炎分为十余种症型论治,几乎囊括了所有临床可见症型:湿热型、寒湿型、暑热型、燥热型、虫积型、瘀血 型、痰浊聚积型、肝胆火盛型、生殖器火盛型、肺火积盛型、心火亢盛型、胃肠 积火型、膀肤火盛型、郁结型、阴虚型、阳虚型、气虚型、血虚型,临床应用可 作参考。王氏选用经方辨治慢性盆腔炎,湿热症用白头翁汤、虚寒症用当归 四 逆汤、热瘀症用桃仁承气汤。任氏将慢性盆腔炎分为湿热下注型、寒瘀互结型、 气滞血瘀型、肝肾亏慢性盆腔炎,湿热症用白头翁汤、虚寒症用当归四逆汤、热 瘀症用桃仁承气汤。任氏将慢性盆腔炎分为湿热下注型、寒瘀互结型、气滞血瘀 型、肝肾亏损型【。均配以个案分析,有理有据。总之,慢性盆腔炎患者由于感 邪不同,个人体质差异,体内病变机质各异病程长短不同而表现不同症候,临床 治疗应辨证论治区别对待。 、单方治疗,抓住疾病本质,辨病论治 从文献报道来看,现代医家多认为本病病机关键以瘀为主,其不同在于挟有 痰、湿、虚,偏寒瘀,或偏热瘀。据此各组以不同专方治疗本病,亦收到较好疗 效。 瘀热互结被普遍认为慢性盆腔炎乃湿热瘀互结为患,治疗以化瘀清热祛 湿。如唐氏认为本病当治以活血化瘀、消肿散解、理气止痛、清热解毒,自拟红 藤化瘀汤治疗例,总有效率%。张氏以活血化瘀解毒法合中药、灌肠治 疗慢性盆腔炎例,组方蒲公英、紫花地丁、白花蛇舌草、败酱草、紫草、贯 众、重楼、桃仁、苦参、甘草。总有效率%。尹氏亦认为慢性盆腔炎乃因平 素胞宫空虚,气血不足,湿热之邪乘虚内侵,客于胞宫,与气血相搏,瘀阻胞宫, 以致冲任失常,气机不利,脉络受阻,治宜清热利湿,活血祛瘀,补肾养血,调 经止痛,收敛止带,处方当归、白术、川芎、茯苓、椿白皮、风尾草、乌贼骨、 茜草、黄柏、车前子、鱼腥草,红藤,观察例,总有效率.%。 因寒致瘀持此观点者少于前一种,但其论点也有可取之处,如魏氏认为慢 性盆腔炎的病机应以寒湿凝滞为主,大量苦寒药的过用,每易损伤脾阳,脾失健 运,水湿内停,日久不愈每致肝郁,病久入络,而致血瘀。故治以温化寒湿,和 血通络为主。以附子败酱散合当归芍药散治疗本病例,总有效率.%。名 中医何少山根据几十年的临床经验,以“久病多虚,久病多痕”的理论为依据,提