13.CRISPER-cas9突变体鉴定方法13.CRISPER-cas9突变体鉴定方法2014-10-6SEL1酶切鉴定法原理:SEL1酶能识别由于碱基缺失所造成的突环。PCR体系:10xbuffer 2.5uldNTP 2ulp-F 1ulp-R 1ulrTag 0.2ddH2O 18.3总体积 25ul酶切体系:PCR产物 5ulddH2O 4ulSEL1 1ul总体积 10ul程序: 45℃ 15min普通酶切鉴定法 原理:Cas9载体设计位点中在PAM附近有相应的酶切位点,若目标基因在设计的位点处发生突变,则PCR产物用相...
13.CRISPER-cas9突变体鉴定方法2014-10-6SEL1酶切鉴定法原理:SEL1酶能识别由于碱基缺失所造成的突环。PCR体系:10xbuffer 2.5uldNTP 2ulp-F 1ulp-R 1ulrTag 0.2ddH2O 18.3总体积 25ul酶切体系:PCR产物 5ulddH2O 4ulSEL1 1ul总体积 10ul程序: 45℃ 15min普通酶切鉴定法 原理:Cas9载体
位点中在PAM附近有相应的酶切位点,若目标基因在设计的位点处发生突变,则PCR产物用相应的酶来切不起作用即切不开,反之则能切开。PCR体系同上,酶切体系同普通酶切一样。
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