格里斯试剂分光光度法

格里斯试剂分光光度法格里斯试剂分光光度法PAGE/NUMPAGES格里斯试剂分光光度法亚硝酸盐氮测定—格里斯试剂分光光度法1原理亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用，可生成不稳定的化合物，随即与α-萘胺作用，生成一种红色偶氮化合物，反应如下：此偶氮化合物在524nm处有最大吸收波长，因此可以通过此反应产生红色偶氮化合物的吸光值计算出NO2-的浓度，从而计算出亚硝态氮浓度。此方法的有效范围最大值为0.5mg/L。2实验用品2.1仪器：100ml容量瓶、10ml容量瓶、试管若干、最大量程分别为1ml、0.2ml的移液枪一支、分光光度计、水浴锅；2.2药品：对氨基代苯磺酸、冰醋酸、α-萘胺、亚硝酸钠；试剂配制（1）格里斯试剂A.对氨基代苯磺酸试剂:称取对氨基苯磺酸0.5g，溶于30mL冰醋酸和100mL蒸馏水的混合液中(过滤避光保存一个月内可用);B.α-萘胺试剂:称取0.1gα-萘胺试剂，溶解于100mL热蒸馏水中，冷却后加入30mL冰醋酸(过滤避光保存一个星期内可)；临用前将A和B两溶液等量混合。（2）NaNO2溶液（0.01mg/mL）：称取0.0150g分析纯亚硝酸钠溶于水中，定容至100mL；吸取1mL此溶液，再稀释定容至10mL，即为标准溶液。3实验步骤3.1标准曲线取7支10ml比色管，分别按加入试剂，在波长524nm处以蒸馏水作参比，依次测定吸光度A，各值减去空白试验（即0号管）绘制标准曲线。编号0123456NaNO2标准溶液（mL）00.0250.050.10.150.20.25加蒸馏水至5mL浓度（mg/L）00.050.10.20.30.40.5格里斯试剂（mL）0.20.20.20.20.20.20.2摇匀，沸水浴加热1min，冷却至室温吸光值A5240.0020.0390.0690.1310.1920.2410.311A=A524-A524(0)—0.0370.0670.1290.1900.2390.309以编号1~6的数据（红色字体的数据）作标准曲线，横坐标为配制成溶液亚硝酸盐氮浓度（mg/L），纵坐标为A；（此图为1月28日数据）3.2样品测定取0.4ml水样（必要时可以用稀释后水样代替，记下稀释的倍数D）用蒸馏水稀释至5ml后，加入0.2ml格里斯试剂，。在波长524nm处以蒸馏水作参比，依次测定吸光度A524，各值减去空白试验（即标准曲线0号管的吸光值）即为校正值A（此全过程应与标准曲线同时操作）；编号ABCDEF...水样/ml0.40.40.40.40.40.4...加蒸馏水至5mL格里斯试剂/ml0.20.20.20.20.20.2…摇匀，沸水浴加热1min，冷却至室温；A524…A=A524-A524(0)…浓度/（mg/L）…3.3水中亚硝酸盐氮浓度按下式计算：ρN（NO2-）=[5×(A-a)/(b×V)]×D式中：ρN（NO2-）——原水样中亚硝酸盐氮浓度，mg/L，以N计；A——试样校正后的吸光值；b——标准曲线的斜率；a——标准曲线的截距；V——所取试样的体积，ml；D——稀释倍数（水样未经稀释时此值为1）；4注意事项该方法最大有效范围比起原样品中亚硝酸盐氮浓度可能最大值有相当大差距，注意稀释但又不可过量稀释，避免测得的吸光值过小以致不准确；出于对所用蒸馏水可能含有亚硝酸根的缘故，会令标准曲线测试样及水样的测得值大于实际值，因此以0号管消去去蒸馏水可能含有亚硝酸根所造成的误差，所以标准曲线不过原点。