切胶回收试剂盒说明书

切胶回收试剂盒说明Order:010-********Toll-free:800-990-6057/400-810-6057TIANGENBIOTECH(BEIJING)CO.,LTD本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。版本号:DP130419产品内容产品组成DP209-02DP209-03(50preps)(200preps)平衡液BL（BufferBL）30ml120ml溶胶液PN（BufferPN）25ml100ml漂洗液PW（BufferPW）15ml50ml洗脱缓冲液EB（BufferEB）15ml30ml吸附柱CA2（SpinColumnsCA2）50个200个收集管（2ml）（CollectionTubes2ml）50个200个储存条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。TIANgelMidiPurificationKit普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（离心柱型）目录号：DP209本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收100bp-30kbDNA片段，回收率高达80%，每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。产品特点快速：整个操作过程快速方便，几十分钟即可完成回收工作。多样：可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。高效：独特的离心柱和精心配制的缓冲液，保证最大量回收到高纯度的目的DNA。注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检查平衡液BL是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。2.电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。3.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。4.所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。5.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。6.如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30µl3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7之间。7.回收<100bp及>10kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。8.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，12,000rpm(~13,400×g)离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）2.将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。3.向胶块中加入等倍体积溶液PN（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100µl，则加入100µlPN溶液），50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可继续放置几分钟或再补加一些溶胶液，直至胶块完全溶解(若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块)。注意：对于回收<300bp的小片段可在加入PN完全溶胶后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。4.将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中），室温放置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。注意：吸附柱容积为800μl，若样品体积大于800μl可分批加入。5.向吸附柱CA2中加入600μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5min再离心。6.重复操作步骤5。7.将吸附柱CA2放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，尽量除尽漂洗液。将吸附柱CA2置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。8.将吸附柱CA2放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB，室温放置2min。12,000rpm(~13,400×g)离心2min收集DNA溶液。注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH很大影响。若后续做测序，需使用ddH2值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。DNA也可以用缓冲液(10mMTris-Cl,pH8.0)洗脱。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，将DNA溶液收集到离心管中。DNA浓度及纯度检测回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不示纯度低。