宫康素（宫康宝）的体外抑菌作用及安全性试验

4O Heilongjiang Journal of Animal Science and Veterinary Medicine 黑龙江畜牧兽医2003年第 7期 宫康素的体外抑茵作用及安全性试验 叶润全 ，刘德雄 ，洪泽武 ，顾万军 (佛山科学技术学院农牧分院，广东 南海 528321) 中图分类号：$859．79 文献标识码：B 文章编号 ：1OO4—7034(2003)O7一OO4O—O2 临床应用试验表明，黄引贤等研制出的微生态制剂宫康素， i．5．2 动物安全试验 防治母畜产道炎症效果显著。为探讨宫康素对母猪产道炎致病菌 i．5．2．i 小白鼠安全试验 试验一，取 30只健康昆明系小白 的抑生长作用及其安全性，我们对从母猪产道炎症分泌物中分离 鼠，腹腔注射宫康素0．5Ⅱ 只，观察 15 d，然后扑杀，剖检腹腔情 到的致病菌进行体外抑菌试验，并对小白鼠、家兔进行动物安全试 况；另取 10只小白鼠，腹腔注射肝肉汤 0．5 mL／只，对照观察。试 验，为宫康素的推广应用提供实验依据。 验二，取 30只健康昆明系小白鼠，皮下注射宫康素0．5 mL／只，观 1 材料与方法 察15 d，然后扑杀，观察接种部位情况；另取 1o只小白鼠，皮下注 1．1 药物 射肝肉汤0．5 mL／只，对照观察。 宫康 素，生产批号为 2001082825，为一种新型微生 态制 1．5．2．2 兔安全试验 试验一，取 1O只 1．O～1．5 kg健康家 剂，由华南农业大学动物医学系黄引贤教授提供。 兔，皮下注射宫康素 3．0 mL／只，观察精神、食欲、体温等变化， 1．2 培养基 15 d扑杀，观察接种部位的变化；另取 3只家兔，皮下注射肝肉 1 葡萄糖肝 肉汤培养基、麦康凯琼脂平板、却浦漫琼脂平 汤 3 mL／只，对照观察 。试验二，取 1O只 1．O～1．5 kg健康青 板 、普通营养琼脂平板、鲜血琼脂平板。 年雌性家兔，阴道子宫内灌注宫康素 2．0 mL／只，观察精神、食 1．3 试验用茸液 欲及阴道子宫情况，15 d后扑杀，观察生殖道的变化；另取 3只 试验用致病菌为溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、白色葡 雌性家兔，阴道子宫内灌注肝肉汤 2．0 mL／只，对照观察。 萄球菌、埃希氏大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌、变形杆菌和 2 试验结果 绿脓杆菌等 8种，均从母猪产道炎症分泌物中分离所得，由佛 2．1 宫康素体外抑茵试验结果 山科学技术学院动物医学系提供。 2．1．1 等接种量同步培养抑菌效果 宫康素与 8种致病菌等 将 各菌种分别接种 到1 葡 萄糖肝 肉汤中 ，37℃培养 量同时接种，培养 36 h后，再转接到相应培养基上培养．不见 1 6～2 4h，作 为试 验 用菌 液 ，各 种菌 液 含活 菌数 不 低 于 有致病菌生长，而接种到血平板培养，见有大量宫康素细菌生 1．5×1O 个／mL。 长；同时单纯接种致病菌的对照组各管，转接相应培养基上培 1．4 试验动物 养，可见大量致病菌生长，见表 1。 18~22 g昆明系小白鼠，由广东省实验动物研究所提供； i．5～2．0 kg青年兔 ，由佛山科学技术学院农牧分院提供。 i．5 试验方 法 i．5．i 抑 菌试验 i．5．i．i 等接种量同步生长抑菌试验 试验组：取 i 葡萄糖 肝肉汤管 8支，先接种宫康素菌液每管 i滴(约 0．05 mL)，然后 分别接种 8种致病菌菌液 i滴(约0．05 mL)。37℃培养，分别于 24，36，48 h取每支试管中菌液接种 2个平板，0．i mL／个。其中 链球菌接种鲜血琼脂平板，葡萄球菌接种却浦漫琼脂平板，大肠 杆菌、沙门氏菌接种麦康凯琼脂平板，克雷伯氏菌、变形杆菌和 绿脓杆菌接种普通营养琼脂平板，置平板于 37℃培养 24 h，观 察致病菌生长情况。同时各试管取菌液接种 i个鲜血琼脂平 板，37℃培养 24 h，观察宫康素细菌生长情况 对照组 ：取 8支 i 葡萄糖肝肉汤管，分别接种 8种致病 菌菌液 i滴 ，37℃培养 24，36，48 h后，分别转接种 i个相应的 琼脂平板 ，观察致病菌的生长情况。 i．5．i．2 不等接种量同步生长抑菌试验 在每管 i 葡萄糖 肝肉汤中接种宫康素菌液 0．05 mL，然后分别接种各种致病菌 菌液，接种量加大为 0．2，0．4，0．8 mL，37℃培养 24，36，48 h， 然后转接相应的琼脂平板，培养观察致病菌的生长情况。 i．5．i．3 不同步生长抑菌试验 取 i 葡萄糖肝肉汤，每管 接种宫康素菌液 0．05 mL，于 37℃培养 24 h后，分别接种各种 致病菌菌液 0．i mL，再培养 12，24，48 h，然后转接相应的琼脂 平板 ，培养观察致病菌的生长情况。 收稿 日期 ：2002--05—23 作者简介：叶润全(1960一)，男，广东东莞人 ，副教授，硕士 表 1 等接种量同步培养宫康素茵对各种致病茸的抑制生长结果 组别 致病菌 培养基 注 ：。+”表示生长 ，“一”表示 抑制 。 2．1．2 不等接种量同步培养抑菌效果 固定宫康素菌液接种 量 0．05 mL，加大各致病菌接种量为 0．2，0．4，0．8 mL，培养不 同时间后，宫康素对各种致病菌有不 同程度的抑制生长作用， 见 表 2。 维普资讯 http://www.cqvip.com “天王饮”对公 兔生殖和免 疫机能 的影响一许 生成 Heilong~iang Journal of Animal Science and Veterinary Medicine 4 1 表2 不等接种量同步培养宫康素茵对各种致病茵抑制生长结果 致病菌 培养基 注：“+”表示生长，“一”表示抑制。 2．1．3 不同步培养抑菌试验效果 宫康素细菌培养 24 h后 再接种各种致病菌，混合培养 24 h能抑制所有致病菌的生长， 详见表 3。 2．2 宫康素动物安全试验结果 2．2．1 小白鼠安全试验结果 腹腔注射和皮下注射宫康素的小 白鼠试验组。在 15 d观察期内未见精神差、死亡等不良反应，剖检 注射部未见肉眼可见的病变。 “天 王 2．2．2 家兔安全试验结果 皮下注射和阴道子宫内灌注宫康 素的试验家兔，在 15 d观察期内，除了皮下注射组 3只家兔在 注射后 2 d内出现一过性体温轻度升高外 ，未见精神、食欲、体 温等不良反应，剖检注射部位和生殖道，未见肉眼可见的病变。 表3 宫康素细菌培养24 h后对各种致病茵的抑制生长结果 致病菌 培养基 注①“+”表示生长，“一”表示抑制；②宫康素细菌培养 24 h后再 接种各种致病菌，故认为试验中宫康素细菌接种量为 5 mL。 3 讨论与小结 3．1 宫康素细菌对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄 球菌、埃希氏大肠杆菌、沙门氏菌 、克雷伯氏菌、变形杆菌和绿 脓杆菌等 8种猪产道炎症致病菌，在体外有显著的抑生长作 用。宫康素与各种致病菌等量接种同步培养，36 h即能全部 抑制生长；而加大致病菌的接种量，培养 48～72 h，宫康素也能 不同程度地抑制致病菌的生长。 3．2 宫康素对小白鼠皮下、腹腔注射和对家兔皮下注射 、阴道 子宫灌注，观察 15 d，未见有不 良反应，表明宫康素对动物有较 高的安全性。 3．3 本试验为微生态制剂宫康素应用于母猪产道炎症的预防 控制提供了实验依据，而宫康素的确切抑菌原理尚有待进一步 探讨 。 致谢：本试验得到华南农业大学黄引贤教授悉心指导，特 此表示衷心的感谢 (011) 饮"对公兔生殖和免疫机能的影响 许生成 (青海大学农牧学院，青海 西宁 810003) 中图分 类号 ：$858．291 文献标识码 ：B 文章编号 ：1OO4—7034(2003)O7—0041—02 “天王饮’’是藏传著名养生方，由冬虫夏草、龙眼肉、淫羊藿、枸 喂 20 d。 杞子、韭籽、熟地、白术、木香、甘草等 l2味中草药组成。它以养生 为目的，阴阳同调，气血双补，长期以来被广大藏族人民视为强身 健体的珍品。虽然“天王饮”效果确实，但还缺乏证明其效果的现 代科学依据。本试验通过研究该方剂对公兔生殖和免疫机能的影 响，为进一步开发、利用该方剂积累必要的实验数据，并为利用中 草药提高动物生殖及免疫机能的研究提供经验和参考。 1 材料与方法 1．1 试验动 物 选择年龄相近，体重相当 3O只健康公兔。试验前适应性饲 收稿 日期 ：2003一O4—1O 作者简介：许生成(1961一)，男，青海互助人，副教授 ，大学． 1．2 主 要 仪 器 酶联免疫检测仪 DG5030型，分析天平 Sartorius1702型， 组织培养倒置显微镜，FJ一2100液体闪烁计数器，96孔细胞培 养板(美国 Linbro及 Glbco产品)。 1．3 主要 试剂 RPM1164O(日本株式会社)，PHA—P(华美公司)，MTT (美国 SERVA)，淋巴细胞分离液 (上海试剂三厂)，睾酮放射 免疫分析药盒(上海内分泌研究所)。 1．4 方 法 1．4．1 方剂有效成分提取及试验分组 分别用无水乙醇和水 提取各中药的有效成分，用水溶解制成方剂。每天以高(每只兔 服用 1／10成人剂量)、中(每只兔服用 1／20成人剂量)、低(每只 { j1| ，j 二¨ 维普资讯 http://www.cqvip.com