二乙酰一肟法测定血清尿素

二乙酰一肟法测定血清尿素 【目的】 掌握血清尿素氮的测定原理和方法;了解尿素氮测定的临床意义及正常值。 【原理】 二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。 【器材】 可见分光光度计、微量移液器、刻度吸管、试管 【试剂】 1(酸性试剂 在三角烧瓶中加去离子水约100ml，然后加入浓硫酸44ml、85%磷酸66ml。冷至室温，加入氨基硫脲50mg及硫酸镉(CdSO?8HO)2g，溶解后用去离子42 水稀释至1L。置棕色瓶中，4?可保存半年。 2(179.9mmol/L二乙酰一肟溶液 称二乙酰一肟20g溶于去离子水中并定容至1L。置棕色瓶中，4?可保存半年。 3(尿素标准贮存液(100mmol/L) 精确称取于60,65?干燥恒重的尿素(Mw为60.06)0.6g，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，4?可保存6个月。 4(尿素标准应用液(5mmol/L) 取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。 【操作步骤】 按下操作。 二乙酰一肟法操作步骤 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 血清 , , 0.02 尿素标准应用液 , 0.02 , 去离子水 0.02 , , 二乙酰一肟溶液 0.5 0.5 0.5 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。 A测定【计算】 尿素(mmol/L),，5A标准 【参考范围】 血清尿素1.78,7.14mmol/L。 【临床意义】 1(血液尿素浓度增高 分生理性和病理性因素两方面。 (1) 生理因素:高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3,0.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。 (2) 病理因素 1) 肾前性:最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。 2) 肾性:肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。 3) 肾后性疾病:所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。 2(血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外，常见于肝功能衰竭患者。 【注意事项】 1(试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色经冷却后，应及时比色。 2(尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。 3(尿素浓度以前习惯用尿素氮mg/dl表示，因为一个尿素分子中有2个氮原子，所以1mmol尿素相当于28mg尿素氮(1mmol/L尿素相当于2.8mg/dL尿素氮);另外还有以尿素氮mmol/L表示，则1mmol/L尿素,2mmol/L尿素氮。世界卫生组织推荐尿素用mmol/L表示，我国卫生部临检中心也已规定一律使用此表示方法，不再用尿素氮一词。 【评价】 1(本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。在标本数量多时加热开始难以达到100?，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。若改善加热条件，如采用在水浴锅底部加置高约5mm的网垫，在网垫上加热显色，可使CV由不加网垫时的6.46%降至2.99%。 2(线性上限仅达7.14mmol/L;回收率为96%,102.1%。 3(二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171μmol/L、血红蛋白达10g/L均无影响。 血尿素氮增高和降低的临床意义: 血尿素氮增高: (1)肾性增高见于急性肾炎、慢性肾炎、中毒性肾炎、严重肾盂肾炎、肾结核、肾血管硬化症、先天性多囊肾和肾肿瘤等引起的肾功能障碍。 血尿素氮高，尤其对尿毒症的诊断有特殊价值，其增高程度与病情严重性成正比，如氮质血症期BUN超过9mmol/L，至尿毒症期BUN可超过20mmol/L，有助于病情的估计。 (2)肾前性增高见于充血性心力衰竭、重度烧伤、休克、消化道大出血、脱水、严重感染、糖尿病酸中毒、肾上腺皮质功能减退、肝肾综合征等。 (3)肾后性增高见于因尿路梗阻增加肾组织压力，使肾小球滤过压降低时，如前列腺肥大、肿瘤压迫所致的尿道梗阻或两侧输尿管结石等。 血尿素氮降低: 血尿素氮低对于临床诊断意义较小，偶见于急性肝萎缩、中毒性肝炎、类脂质肾病等。 在机体物质分解代谢过程中，氨基酸脱氨基作用产生氨，氨在肝脏经鸟氨酸循环合成尿素，尿素通过血液运输至肾脏，由尿液排出体外。尿素是体内氨基酸分解代谢的终产物之一，因此测定血液尿素氮(BUN)的含量可以了解机体肾功能状况。尿素氮的测定方法很多，归纳起来有以下两大类:一类是直接法，即用某种特殊试剂与尿素直接作用，产生显色反应再进行测定，如二乙酰一肟法;另一类是间接法，先用脲酶将尿素分解产生氨，然后用不同方法测定氨的量再换算成尿素，如脲酶比色法、酶偶联法、电导法、离子选择电极法和指示染料法(一种干试剂方法)等。二乙酰一肟法灵敏度高，精密度较好，操作简便，也可用于自动化分析，目前该法仍为大多数基层医院所采用，其主要问题是显色后有褪色现象。酶偶联法具有特异性高、灵敏度高、精度好、不受其他含氮化合物干扰等特点，且既可手工操作也可用于自动化分析，是当今实验室广泛应用的方法。