次氯酸钠消毒液对病毒杀灭效果的实验研究

次氯酸钠消毒液对病毒杀灭效果的实验研究 次氯酸钠消毒液对病毒杀灭效果的实验研 究 ? l22?现代预防医学2007年第34卷第1期ModemPrevetiveMedicine.2007.Vo1.34.NO.1 文章编号:l0o3—8507(2o07)0l一0122—02中图分类号:R1872文献标识码:B【实验技术及其应用】 次氯酸钠消毒液对病毒杀灭效果的实验研究 陈越英,徐燕,周品众,冷红英,张伟 ?摘要【日的]观察:氨酸钠消毒l液对病毒杀灭效果.[方法].选择纯化.HBsAg~脊髓灰质炎病毒和太肠杆菌{2_.一 噬菌体用.次氯酸钠消毒液进行杀灭试验.[结果]含有效氯300mg/L的次氯酸钠消毒.液对脊灰病毒作用l5min杀灭. 对数值j41oo,同.样浓度对f2噬茸体作用6orain.彖灭对数值5.00.含有效氨130mg/L的消毒液.作用45min可有效. - 破坏不锈钢载体上HBsAg抗原性[gr-~]一脊髓灰质炎病毒和大肠杆菌t2噬菌体对次氨酸钠的抗力.没.有明显差异'且-... 专镬|-|?0曩0.- :- 长拳,文畿,.A醢莰鼠凝精每太强瞧崽镩,R敬氇??.|曩'||-|_t 次氯酸钠是一种无机含氯消毒剂,在消毒方面的应用已有 100多年历史.目前次氯酸钠对细菌杀灭效果研究较多.且在 医疗,卫生防疫,工农业等各行业得到广泛应用,为了解次氯 酸钠对不同种类病毒的杀灭效果,在对HBsAg,脊髓灰 质炎(以下简称脊灰)病毒和大肠杆菌f2噬菌体(以下简称 噬菌体)进行试验.结果报道如下. 1方法 1.1t2噬茵体扩增 f2噬菌体来源于军事医学科学院消毒检测中心,扩增时取 100ml无菌肉汤,加入f2噬菌体储备液5rn1,加寄主菌E.coli 28510ml摇匀,移至37?培养24h,然后将此液在无菌条件 下,按1:10的量加入氯仿静置30min后.3000r/min离心 30min,除去被f2噬菌体裂解的寄生菌残余碎片.取离心后上 清液分装于小试管内,经无菌检测后,测定其效价,于4?冰 箱中保存备用 1.2脊灰病毒悬液的制备 从液氮中取出Veto细胞,37%温水融化,.I=}j细胞维持液 轻洗,离心,转种于含10rnl完全培养液的培养瓶中.待细胞 长成单层时,即可用于接种病毒.取出低温冻存的脊髓灰质炎 病毒I型疫前株(中国疾病预防控制中心提供),用细胞维持 液10倍稀释后,接种至单层Veto细胞中.待3/4的细胞卅现 病变,收获病毒,一70~C冻融2次,离心盘除沉淀,上清液即 为病毒悬液,用终点稀释法测定病毒滴度后备用 1.3中和荆鉴定试验 试验6组(1),按悬液定量试验程序进行.试验 结果,当第1组无试验病毒或有少量病毒生长,第2组有较第 1组多但比3,4,5组少的病毒生长.第3,4,5组病毒生长 与原接种量相近(噬菌体回收噬斑数在1~107~5xlOpfu/m[). 且组差不超过15%,第6组为阴性对照.应无病毒生长.试 验重复3次取得一致结果表明中和剂及其浓度适宜.HBsAg中 和剂鉴定试验时,以染有HBsAg的不锈钢片代替,按载体微 作者简介:陈越荚(i965一),女,大专,主管技师.研究方向:消毒 检验和研究 作者单位:1.江苏省疾病预防控制I心,南京,210009;2.江阴市疾 病预防控制中心 量定性试验程序进行试验.试验结果.当3,4,5组S/N值 相近,第1组S/N值<2-1或远少于第2组时,为所选中和剂 及其浓度适宜. 1.4f2噬茵体杀灭试验 用无菌硬水将次氯酸钠消毒液配制成试验浓度的1.25倍. 放置20?士1?水浴恒温.取0.5nllf2噬菌体悬液加入等量 3%牛血清白蛋白混合后加入4.0ml消毒液中,立即混匀并计 时;作用至预定时间,取出消毒剂噬菌体混合液0.5ml,加入 4.5ml中和剂,中和作用10min后,取0.5Tnl加入5rn1半固 体中同时加入0.3寄主菌幼龄菌,充分混匀后倒人制备好的 下层平板上,37?培养24h后进行噬斑计数.试验重复3次, 计算杀灭对数值.杀灭对数值?5.O0判为消毒合格. 1.5脊友病毒灭活试验 取保存的脊灰病毒悬液103l与3%牛血清白蛋白103l 混合,置于20?士l?水浴恒温.加入0.8ml试验浓度的消毒 液立即混匀,作用至规定时间,立即取0.1ml加入含0.9ml 中和刘溶液的小试管中,中和作用10rain,用细胞培养液作适 宜稀释,吸取样液,接种于单层细胞培养板上.每个滴度接种 4子L.m性对照组:用无菌去离子水代替消毒剂:阴性对照 组:将试验用细胞加细胞培养液.然后将细胞培养板置360C二 氧化碳培养箱中吸附2h换细胞培养液后,继续培养3d,观 察结粜.根据各组的平均病毒感染滴度(TCID),计算其对 病毒的火活对数.再复3次试验.灭活对数值?4.00判为合 格 1.6ttBsAg抗原性破坏试验 按检测系统灵敏度(1ng/m~)用禽50L小牛血清的磷 酸盐缓冲液将纯化HBsAg稀释至含量为50m1的恳液,取 0.02m1HBsAg恳液,滴于不锈钢圆片(直径1.5elI1)中央, 馀匀,烘干后备用(样片).将盛有样片的平皿,置20?? 10C水浴10min,吸取50l试验浓度消毒液滴于样片中央并 涂开均匀受药,作用至规定时问后移人盛有1.0nIl中和剂的试 管中浸泡10nfin并振荡洗脱.以ELISA法检测HBsAg抗原 性.以试验组OD值(S)与阴性(中和产物)对照OD值 (N)的比值(S/N)<2.1,判为HBsAg抗原性破坏lA格. 2结果 2.1中和剂鉴定试验结果 现代预防医学2007年第34卷第1期ModernPrevetiveMedicine.2007.Vo1.34.NO.1l23 试验结果表明,含2.5g/L硫代硫酸钠,5g/L吐温一80的 陶汤培养液;禽Ig/L硫代硫酸钠的Ene生K液(MM);6 L硫代硫酸钠,5g/L吐温一80,100g/L小牛血清的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液町分别有效中和含有效氯500mg/L的次 氯酸钠消毒液对f2噬曲体和脊灰病毒以及含有效氯1500mg/ L次氯酸钠淌毒液对I]BsAg的残留作用中和剂及中和产物对 检测系统均无影响.见表1. 表1中和剂鉴定试验结果 【注]f2噬菌体和脊灰病毒试验作用时间均为5min,有效氯浓度均为500nng/-L;HBsAg试验作用时间为15rain,有效氯浓度为1500mg/L.试验掘度 为20~C?l.结果为3次试验平均值 土2次氯酸钠对眩噬茵体和脊灰病毒杀灭效果 结果表明.含有效氯300,ng/L的次氯酸钠消毒液对脊灰 病毒作用15min消毒合格,杀灭对数值为4.17:同样浓度对f2 噬菌体作用60min消毒合格,杀灭对数值为5.36.随浓度递 增时问延长杀灭败果逐渐递增,见表2,表3. 表2次氯酸钠对f2噬菌体杀灭效果 有效氯浓度不同作用时问(rain)平均杀灭对数值 (mg/L)15304560 [注]f2嘴菌体阳性对照组对数值为7.147,45,试验温度为20%?1 试验重复3次 表3次氯酸钠对脊灰病毒灭活效果 有效氯浓度 (mg/L) 500 3o0 100 不同作用时间(min)平均杀灭对数值 l530,1560 533 4A7 2.50 5.33 4.33 2.66 5.33 5.33 3.41 5_33 5_33 3.75 [注]脊灰病毒阳性对照组对数值为5.006.00.试验温度为20%?loC, 试验重复3次 2.3次氯酸钠对HBsAg灭活效果 结果表明,含有效氯1000mg/L的消毒液作用45min可 有效破坏不锈钢载体~HBsAg抗原性,见表4 表4次氯酸钠对HBsAg破坏效果 有效氯浓度 (mg/L) 作用不同时『H】(mln)平均S/N值 l5o0 10()0 500 22.39 46.60 118_25 1.86 18:29 82.15 l32 1.78 6O.16 [l:]试验温度为20??l?,试验均重复3次.阴性对照甲均OD值为 0.019,阳性对照平均S/N值为131.42 3讨论 2002年版《消毒技术规范》中对消毒剂灭活病毒效果的 评价由乙型肝炎病毒表面抗原试验改为脊灰病毒灭活试验,脊 灰病毒在肠道病毒中具有一定代表性.脊灰病毒属于小核糖核 酸病毒,无包膜.为亲水性病毒,对消毒剂的抗力高于亲脂性 病毒和大肠杆菌等细菌繁殖体.作为大肠杆菌病毒的大肠杆菌 噬菌体生物学特性与脊灰病毒相似,对环境和消毒网子的抗力 多强于或相当于人类肠道病毒.并易培养和计数.在饮水病毒 灭活研究中多以其作指示病毒.研究结果显示,含有效氯300 mg/L的次氯酸钠消毒液对脊灰病毒作用15min消毒合格,杀 灭对数值为4.17:同样浓度对f2噬菌体作用60min消毒合格. 杀灭对数值为5l36.对脊灰病毒灭活效果与文献撤道基本一致 ] .对噬菌体灭活有效浓度与脊灰相同.但作用时间须延长, 这除了抗力有差异,还由于评判不同所致.噬菌体的评判 标准参照2002年版《消毒技术规范》中细菌的评判标准,高 于脊灰的评判标准,在判定有效剂量时+会加大脊灰与噬菌体 二者的差异. 乙肝病毒是有包膜病毒,其抗力应低于亲水性病毒.文献 报道次氯酸钠水溶液中含有效氧500mg/L作用5min可灭活 纯化HBsAg【3_,本研究按照《消毒技术规范》第3版载体微量 定性法试验.结果显示含有效氯1ooo,ng/L的消毒液作用45 min才能有效破坏不锈钢载体上HBsAg.效果比脊灰病毒和l2 噬菌体差.这是由于HBsAg是一种蛋白质.不是病毒颗粒, 试验的原理是采用免疫学方法,进行抗原性破坏试验.凼此其 抗力与灭活效果均不能完全代表乙肝病毒. 参考文献: 【1]晁福寰.消毒后水中病毒浓集检验方法的研究近况[J].消毒与灭 菌,1986,3(3):l52. 【2J佟颖,肖潇,王劲,等.消毒剂灭活脊髓灰质炎病毒试验方法的 研究[J].中国卫生检验杂志,2005,15(4):486. [3]杨华明,易滨.现代医院消毒学[M].北京:人民军医m版社, 2002,100. (收稿日期:2OO6一O3—07) 一;.挖加,mL