[doc格式] 检测百菌清的两种方法的比较

[doc格式] 检测百菌清的两种的比较 检测百菌清的两种方法的比较 1528中国卫生检验杂志2008年8月第18卷第8期ChineseJournal.fHea1山Lab.rat.ryTechn.1.gY,Aug2008;V.118N.8 【化学测定方法】 检测百菌清的两种方法的比较 万积成,张培正,陈永智,许泓,都明霞,唐晓宾 (1.北京万华生物工程有限公司,北京100018;2.山东农业大学,山东泰安271018; 3.山东省寿光市农产品质量检测中心,山东寿光262700;4.天津出入境检验检疫局,天津300457) [摘要]目的:本试验比较胶体金法与气相色谱法两种方法在百菌清检测中的应用,并以此为基础建立一个不同于以前 的监管模式.方法:采用胶体金法和气相色谱法检测百菌清.结果:胶体金试纸检测为阴性的样品,经气相色谱检测结 果为未检出,添加的阳性和Cutoff值样品经气相色谱检测结果与胶体金试纸相一致.结论:与气相色谱相比较,胶体金法 检测百菌清具有操作简便,观察直观,快速,省时的特点,其特异性,敏感性较高,可作为蔬菜采摘前百菌清农药残留自我 检测的手段应用. [关键词]百菌清;胶体金试纸;气相色谱;比较 [中图分类号]0657.71[文献标识码]A[文章编 号]1004—8685(2008)08—1528—03 Comparisionof2methodsfordetectionchlorothalonil Wan一cheng,ZhangPei-zheng,ChenYong—zhi,XuHortg4, bin DuMing—xia,TangXiao— (1.BeringWanhuaBioresearchTechnologyCorporation,Being100018,China;2.ShandongAgricultureUniversity,Taian 271018.China;3.ShouguangCenterofQualityofAgriculturalProducts,Shouguang262700,China;4.TianjinEnter—exitInspec— tionandQuarantineBureau,Tianjin300457,China) [Abstract]Objective:Todetectchlorothalonilbycolloidalgoldstripandgaschromatography,comparingtwomethodsusedin thechlorothalonildetection,andestablishanewsupervisionpatten.Methods:Comparisonofdetectingchlorothalonilsampleswith colloidalgoldstripandgaschromatographywasperformed.Results:Negativesampledetectedbycollidalgoldpaperwasnotdetec— tedbygaschromatography.Theresultofcolloidalgoldandgaschromatographydetectionofadditionsampleofpositiveandcutoff samplewasconsistent.Conclusion:Comparedwithgaschromatography,thecolloidalgoldmethodissimpler,moredirect,more time—savingandfaster.Therefore,itCanbeusedon—the—spottodetectinc hlorothalonil. [Keywords]Chlorothalonil;Colloidalgoldstrip;Gaschromatography;Com parison 百菌清(chlorothalonil)是一种广谱性杀菌剂,在植物面 有良好的黏着性,不易受雨水冲刷,药效稳定.其纯品为白色 结晶,无臭味,不溶于水,微溶于丙酮等有机溶剂,对高等动物 低毒,但对鱼类及甲壳类动物毒性较大,主要用于防治蔬菜的 霜霉病,炭疽病,疫病等….我国国家GB2763—2005食 品中农药最大残留限量中规定百菌清在蔬菜上的残留量为 5.0mg/kg,农产品安全质量无公害蔬菜安全要求中规定百 菌清残留量为0.5me,/kg,几年来对蔬菜上农药残留进行监 测,结果显示百菌清是检出率较高的农药之一.虽然它的超 标率并不很高,但是随着设施栽培面积的进一步扩大,百菌清 就有可能成为蔬菜和环境中新的农药残留污染源J.因此, 对百菌清残留快速检测技术的研究迫在眉睫.对百菌清残留 的快速检测不仅能适时的保障农产品质量,将农药残留超标 【基金项目] [作者简介] “十五”食品安全关键技术(2001BASO4A17—07); “十一五”食品安全综合示范蔬菜安全生产质量控 制(2006AA10Z449) 万积成(193l一),男,本科,主任医师,主要从事农 药残留研究. 的蔬菜控制在市场之外,减少对人们的危害,同时及时检测出 农药污染地域从而采取相应的有效措施,可以尽量减少对环 境的危害.因此,快速检测对于掌握蔬菜中百菌清的残留情 况,有效控制其残留量,具有非常现实的意义. 本文介绍了百菌清胶体金竞争法检测试纸在实地的应用 与比对试验,这一试验充分验证了百菌清胶体金免疫试纸实 地应用效果显着,由于方法简单,检测结果准确,从而为菜农 提供了自我检测手段.实现了百茵清农药残留的源头检测, 可作为蔬菜采摘前百菌清残留的自我检测手段应用. 1材料与方法 1.1仪器与试剂 GC一14B气相色谱仪,SHIMADZU.FJ一200高速分散均 质机,生产厂家:上海标本模型厂.XMTD数显调节仪,生产厂 家:余姚工菱温度仪器厂.1X一300静音无油空压机,生产厂 家:清川科技.DP一500A氢气发生器,生产厂家:清川科技. 万华牌百菌清胶体金免疫竞争法快速检测试纸,批号为 20070451,试纸检测Cutoff界限值为0.5mg/kg.达科宁(75% 百菌清可湿性粉剂),生产厂家:先正达(苏州)作物保护有限 中国卫生检验杂志20o8年8月第18卷第8期ChineseJounlal0fHealthLaboraIoryTechno10gy,Aug2008;Vd18No81529 公司,生产日期:2~70619.百菌清标准品,1o0ml,农业部 环境保护监测总站.气相色谱前处理所用药品均为国产分析 纯. 1.2试验方法 1.2.1取样及样品处理施药当天在西红柿地和黄瓜地各取 10个样本,经百菌清胶体金试纸检测为阳性,同样本送山东寿 光质检中心做GC对照检测;取未施药的西红柿样本1o00g 共10个样和未施药的黄瓜1o00g共10个样,每1o0g黄瓜和 西红柿样品中分别添加百菌清0.5nlg,经百菌清胶体金试纸 检测出现阳性表现,同样本送lLl东寿光质检中心做比对试验; 10天后在施药西红柿地和黄瓜地五点取样法取样,每点取2 个样,西红柿地共计取100个样,黄瓜地共计取1o0个样,每个 样品经百菌清胶体金检测试纸检测均为阴性,同样本送山东 寿光质检中心做GC检测. 取未施药的黄瓜与西红柿样本进行cut0ff值添加试验, 分别取黄瓜和西红柿10o0g共10个样,每1o0g黄瓜和西红 柿样品中分别添加百菌清0.05mg,经百菌清胶体金试纸检测 出现cut0ff值表现,同样本送天津出入境检验检疫局做GC检 测. 1.2.2百菌清残留胶体金免疫快速检测试纸选取有代表性 的蔬菜样品,擦去表面泥土,进行榨汁处理(果菜直接榨汁,叶 菜类加入等量水),榨汁后加入15%氯化钠,混匀后静置6min 以上. 撕开铝箔袋,取出检测试纸条.将试纸条MAX端浸入样 品液中(液面不得超过MAX线),此时样本液在毛细管作用下 向试纸条的另一端缓缓移行,将固相的金标抗体溶解并带动 它向前移行.1—5min从视窗中观察结果,最长不超过 5min.阴性:在检测区(T)及控制区(C)各出现一条红线,说 明样本中百菌清残留量小于0.5mg/kg,百菌清残留不超标; 阳性:仅在控制区(C)出现一条红线,说明样本中百菌清残留 量大于0.5mg/kg,百菌清残留超标;Cutoff值:在控制区(C) 出现一条红线,在检测区(T)出现模糊阴影,说明百菌清残留 量在0.5”?g/kg左右. 1.2.3气相色谱法(GC)依据农业部检测标准NY/~61— 2004,采用前处理方法对留取的样品进行前处理,GC检测百 菌清农药残留量J. 2结果 2.1西红柿样本检测比对结果 西红柿样本中百菌清残留的胶体金检测试纸检测结果与 GC检测结果比对见表1,由表中可以看出,胶体金试纸检测的 西红柿阳性结果和GC进行比对,GC检测阳性样本中百菌清 残留量均在0.5mg/kg以上,在试纸条没置的cutoff值之上, 结果与胶体金试纸检测结果相符,经数理统计分析P<0.01, 差异显着. 西红柿添加阳性回收率试验,GC检测样品平均残留量为 7.1mg/kg,回收率为142%. 胶体金试纸检测西红柿阴性结果与GC比对,GC检测阴 性样本中百菌清残留量为未检出,结果与胶体金试纸检测结 果相符,经数理统计分析P<0.01,差异显着. 表1百菌清胶体金检测试纸与GC检测西红柿比对结果 2.2黄瓜样本检测比对结果 黄瓜样本中百菌清残留的胶体金检测试纸检测结果与 GC检测结果比对见表2,由表中可以看出,胶体金试纸检测黄 瓜阳性结果和GC进行比对,GC检测阳性样本中百菌清残留 量均在0.5kg以上,结果与胶体金试纸检测结果相符,经 数理统计分析P<0.01,差异显着. 黄瓜添加阳性回收率试验,GC检测样品平均残留量为 6.47mg/kg,回收率为129%. 胶体金试纸检测黄瓜阴性结果与GC比对,GC检测阴性 样本中百菌清残留量为未检出,结果与胶体金试纸检测结果 相符,经数理统计分析P<0.01,差异显着. 表2百菌清胶体金检测试纸与GC检测黄瓜比对结果 2.3黄瓜与西红柿添加cutoff值样品检测比对结果 黄瓜与西红柿样本中百菌清cutoff值添加样品与GC检 测结果比对见表3,由表中可以看出,黄瓜cut0仃值添加试验 中,GC检测回收率为79.2%,西红柿cutoff值添加试验中,GC 检测回收率为67%.检测结果与试纸条设置cutoff值接近. (下转第1635页) 中国卫生检验杂志2008年8月第l8卷第8期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Aug2008;Vol18No81635 别对处于临界值的检测结果或超标样品均应进行校核复测, 定期或不定期采取标准物质或参考物质开展内部质量控制 等;室间质控主要是组织检测科室积极参加能力验证活动及 高层次的实验室间比对,有条件时也可自行与高水平实验室 开展比对活动.对技术校核中发现的问题及时与检测科室沟 通解决,同时采取纠正和预防措施. (3)在质检报告书形成后质管科应负责对其进行全面的 最终审核,包括质检报告书的格式是否,适用,包含的信 息是否全面,必需,检测数据的表达方式是否标准,易懂,引用 的标准是否现行有效,是否使用法定计量单位,校核签字是否 齐全,解释说明是否适用等,同时应采取质量控制校核方法对 检测数据的准确性和检测结果的关联性进行技术分析,对审 核中发现的问题及对检测结果的有效性发生疑问时应责成相 关人员尽快整改或进行结果溯源,必要时可采取复测验证,通 过对每一份质检报告书的全面审核把关,可以在日常工作中 及时发现和解决质量体系存在的问题和缺陷,最大限度地保 障检测结果的准确可靠和质检报告书的内外在质量,是技术 运作中非常重要的环节. 3与支持服务的协调 支持服务包括仪器设备和供应品的采购,维护,仪器设备 的检定和校准,环境条件的提供等,主要责任科室是办公室或 后勤服务部门,质量管理科与之协调主要体现在仪器设备和 供应品的采购应根据检测科室需求,选择有质量保证的合格 供方,检测科室对所购物品还需技术验收,必要时抽样做验证 试验,仪器设备检定和校准也需查验检定机构资质,对检定或 校准结果进行必要的技术分析并提供给检测人员,在设施和 环境的提供与维护过程中应提出有关安全,健康和环保的要 求.以上过程都需要协调检测部门与后勤部门进行技术上的 衔接,确保支持服务有质量保证. 4与办公室工作的协调 质量管理科与办公室在质量检测组织机构中的地位相 似,均起着承上启下的作用,同时在组织管理,人员,文件 控制,支持服务和处理申(投)诉等方面与办公室工作又关系 密切,相辅相成,因此加强双方协调有利于职责互补,资源共 享.利用质量管理科的职责权限,可有效地提高办公室的工 作效率,如目前大多数疾控中心的科研和继续教育管理均由 质量管理科负责,与质量管理工作融为一体,可有效地提高科 研管理水平,促进新技术,新方法的研究和应用;质量体系的 良好运转,有利于卫技人员业绩档案的规范化管理,有利于文 件资料和仪器设备的规范化管理,有利于及时规范地处理包 括质量方面的申(投)诉,从而很大程度地减轻办公室的工作 压力.而利用办公室的职责权限,又可进一步加强质量管理 的工作力度,如依托办公室的行政管理职能可为质量管理工 作获取领导层的支持,在人,财,物方面提供有力保障,将质量 管理工作纳入中心综合目标管理体系进行考核与奖惩,又能 有力地促进质量管理工作力度,同时可以将质量体系的先进 管理理念推广到疾控中心其他业务工作中去,以实现全面质 量管理,使疾控中心工作更加科学,规范,高效. 综上所述,疾控中心质量管理科如能充分发挥其在质量 管理,技术运作和支持服务中的综合协调作用,同时与办公 室工作相辅相成,互利互补,必将有力地促进实验室质量管 理乃至中心其他业务工作的全面提高,起到事半功倍的良好 效果. (收稿日期:2008—04—07) (上接第1529页). 表3添加黄瓜与西红柿cutoff值样品与GC检测比对结果 样品12345678910 黄瓜Gc~z(mg/kg)0.470.38n470.400.390.400.370.350.380.35 西红柿f,C检测结果(nk};)0.410.360.400.320.280.300.340.280.290.37 3讨论 农药为小分子物质,自身不具备免疫原性,通过连接载体 蛋白获得免疫原性,进行免疫获得针对特定抗原决定簇的抗 体.这使得小分子物质可以使用免疫分析法来实现检测.本 文以百菌清合成抗原未获得高效的针对百菌清小分子的单克 隆抗体,但是以毒死蜱合成免疫原进行免疫,获得针对百菌清 小分子的高效单抗,由胶体金竞争法展示出:用百菌清合成免 疫原包被在硝酸纤维素膜上,与毒死蜱免疫株N5BC23F8C10 抗体标记胶体金;或毒死蜱合成免疫原包被在硝酸纤维素膜 上,与毒死蜱免疫株N5BC31F1C1抗体标记胶体金,两个配对 均有较好的亲和力,并且与百菌清半抗原都具有良好的竞争 作用,从而实现了百菌清胶体金免疫竞争法试纸产品.这是 免疫学中一个特殊现象,外来免疫原进入体内后,经过抗原提 呈细胞(APC)捕获,在巨大溶酶体中,分解小片段小肽,经过T 细胞抗原表位识别,筛选.造成这种错位的原因,是由于机体 内T细胞抗原表位的错综复杂的识别认定造成的,这是机体 免疫应答的奥秒,对其规律性进行人为的操纵还有一定难度. 不过可以肯定的说,百菌清和毒死蜱半抗原具有一定的相似 性与这种错误认定有密切的关系. 百菌清胶体金竞争法检测试纸条作为蔬菜中百菌清农药 残留检测的手段,检测结果与GC进行比对,结果一致,这充分 说明了百菌清胶体金竞争法检测试纸的准确性.用这种快 速,简便,特异性强,灵敏度高的检测试纸,能满足国家允许使 用农药所设立的最高残留限量标准的要求,该方法操作简便, 无需专业人员检测,符合政府管理部门及各专家们所呼吁的 绿色无公害从源头治理理念.胶体金免疫快速检测试纸又能 为从源头治理提供手段.因此是当前形式下重视食品安全工 作,解决农药不超标的最佳选择. [参考文献] [1]程伯英.菜园农药手册[M].北京:中国农业出版社,2002:233— 237. [2]GB2763—2005.食品中农药最大残留限量[s]. [3]GB18406.1-2001.农产品安全质量无公害蔬菜安全要求[s]. [4]欧阳立群,吴富忠,等.蔬菜中百菌清残留量的高效液相色谱测定 方法[J].中国卫生检验杂志,2007,17(4):641—642. [5]NY/T761.3—2004.蔬菜和水果中有机磷,有机氯,拟除虫菊酯和 氨基甲酸酯类农药多残留检测方法[s]. (收稿日期:2008—03—27)