月季茎段初代培养的研究

月季茎段初代培养的研究 植 物 生 物 技 术 论 文 姓名:孟慧慧 班级:10园艺教育 学号:1335100013 月季茎段初代培养的研究 园艺教育100 孟慧慧 指导教师:邓盾、周玉丽 摘要:为了研究不同激素组合，即细胞分裂素(6-B A) 和生长素(NAA)对月季茎段初代培养的影响，本实验以 MS 为基本培养基,附加不同浓度的6-B A和NAA对月季茎段进行了初代培养研究。结果表明:初代培养阶段,以较高浓度的细胞分裂素和较低浓度的生长素配比对侧芽萌发具有较好地促进作用,适宜的培养基为 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂5.5g/L+蔗糖30g/L。 关键词:月季;茎段;诱导;初代培养; 月季，别名长春花、 月月红、 斗雪红、瘦客等， 蔷薇科蔷薇属植物，其花色艳丽、香味浓郁,是美化庭院和环境 的主要花卉之一, 被誉为“花 中皇后”，是世界上著名的四大切花之一。当前，月季育种是花卉育种中最活跃的领域之一。月季通常采用扦插、 嫁接和压条繁殖， 但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。应用组织培养技术可以大大缩短其增殖周期,达到快速繁殖 试图找出适优良品种的目的。试验以月季为进行了初代组织培养特性研究,合该月季组培快繁的最佳激素配比的培养基。 1材料与 方 法 1.1供试材料 外植体一般选取生长健壮的当年生月季枝条饱满而未萌发的侧芽。取材时间为11月中旬。 1.2培养基的配制 MS培养基+6-BA0.5~2.0mg/L+NAA0.01~1.00mg/L+琼脂5.5 g/L,蔗糖30 g/L，配制后进行分装，而后加入不同浓度的激素组合，分别调整培养基的pH值至6.0。其中，6-BA选取1.0、2.0mg/L，NAA选取0.05、0、25、0.5、0.75mg/L，共八个组合，配制培养基2L，每组7瓶，共56瓶，标上1~8以示区分。 1.3灭菌 将配制好的培养基、滤纸、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内,关闭排气阀，打开电源，使压力1.1 kg/cm2,温度121?,灭菌30 min。(正确使用灭菌锅) 1.4外植体处理 剪取月季枝条中部茎段约0.5cm小段，在流水下冲洗10-15分钟，再用洗洁精水浸泡0.5h，流水冲洗干净。茎段剪成单芽茎段，均置于无菌超净工作台备用。无菌条件下先用 75 % 酒精浸泡 30-40s，无菌水冲洗3次，弃掉。再用 0.1 % 升汞+两滴吐温80表面灭菌 5 ,10 min ，无菌水冲洗3 ,4 次。 1.5接种 将灭菌后的培养基摆在超净工作台上, 剪刀、解剖刀、镊子放入灭菌器中，打开开关，将超净工作台打扫干净,打开风扇、紫外灯照射灭菌30 min。之后进入接种室，接种时每瓶接1段，使侧芽与 固体培养基表面齐平。 1.6培养条件 将接种后的容器置于光照培养架上进行培养,保持室内温度25.5?,12 h光暗交替培养。 2.结果 培养一个月后，统计诱导率，并对所得数据进行统计处理。 表-培养基中不同激素浓度对初代诱导的影响 本次试验共8个处理，每组7瓶，共56瓶。接种外植体总数为56，污染总数为30，诱导出芽的总数为22，由此，污染率为53.57%，总诱导率为 39.29。试验研究表明:第六组即 NAA0.25mg/L+6-BA2.0mg/L组合激素诱导率最高，对月季茎段的发芽率最高，即MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.25mg/L+琼脂5.5g/L+蔗糖30g/L为月季茎段初代培养最佳诱导培养基。 3.实验中存在的问题及可能的原因分析 (1)众所周知,植物生长调节剂是植物新陈代谢中产生的天然化合物,它能以极微小的量影响到植物的多种生理生化活动。生长素的作用主要是促进细胞伸长和细胞分裂,诱导受伤的组织表面一至数层细胞恢复分裂能力,形成愈伤组织,促进生根等。细胞分裂素有诱导芽的分化、促进侧芽萌发生长 的作用,当组织内细胞分裂素/生长素的比值高时诱导芽的分化,而本实验中，从理论上说，第五组的诱导率应该最高，但实际上第六组的诱导率却最高。 (2)激素浓度的选择范围太小，浓度跳跃过大，不能很好说明问题 (3)污染数较多，可能与外植体的取材，消毒不彻底有关 (4)试验中出现外植体在培 养过程中未成活和培养基褐化的情况 (5)处理数较少，不能全面解释不同浓度组合对外植体初代培养的影响 4.实验中污染来源分析及防止 污染来源: (1)外界环境采取的外植体本身携带的污染较多 (2)对外植体消毒灭菌不彻底 (3)植物内生菌污染 (4)接种器具及培养基消毒不彻底 防止措施: (1) 对外植体进行彻底消除 (2) 加入抗氧化剂防止褐化 (3) 接种器具及培养基要进行高温消毒 (4) 接种时尽量不要讲话 (5) 可加入抗生素防止内生菌污染 因此，在实验中要注意各个环节的配合，实验者对待实验要认真细心，更要加强小组成员之间的团结协作能力，加强理论与实践的相结合，认真体会“纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行”的实践精神和“路漫漫其修远兮，吾将上下而求索”的求知精神。