【doc】 铁筷子多糖对S180细胞周期及增殖能力的影响
铁筷子多糖对S180细胞周期及增殖能力的
影响
中药药理与l床2005;21(4)29
能量的产生和利用具有重要生理意义.Na,K.ATP酶活性
下降,细胞内的Na浓度升高,后者又激活细胞膜上Na一Cd
交换蛋白,使细胞内Ca2内流增加;Cd一ATP酶活性下降,胞
内Cd泵出减少.胞内Cd超载.Ca2是心肌细胞中许多重
要的信号传导通路的调节因子,胞内Cd超载则可激活心肌细
胞的信号传导通路,导致心肌肥厚的发生【9.】0J.用ISO连续皮
下注射,可引起大鼠左心室心肌组织NO水平下降,Na,K一
ATP酶和Cd一ATP酶活性降低,心肌肥厚增大.应用PNS治
疗后,可显着提高N0水平,提高Na,K一ATP酶和Ca2一ATP
酶活性.抑制心肌肥厚.
本实验提示,PNS可能通过抑制心肌局部AnglI的产生,改
善ATP酶的活力,抑制细胞内(二a2超载,提高心肌组织中NO
水平,抑制心肌胶原增生,心肌肥厚和心脏重构.从而对ISO所
致的心肌肥厚具有保护作用.
参考文献
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ProtectiveeffectsofTotalSaponinsofPanaxnotoginsengon
myocardialhypertrophyinducedbyisoproterenolinrats
ZhouQing.,HeWei,ZhouLi.,anQisheng2
(.I)epartmentofOrganicExperiment,21-)epartmentofPharmacology,GannanMedicalCollege.Garmhou341000)
Objective:Toinvestigatetheprotectiveeffectsoftotalsaponinsofpanaxnotoginseng(PNS)onmyocardialhypertrophvinducedby
isoproterenol(ISO)inrats.Methods:MyocardialhypertrophymodelofratswezeinducedbyinjectionofISO5mg/kg?dscfor7d.From
day2,theratwereadministeredwithPNS25and50mg/kg?dipfor14d,thecontrolandISOmodelgroupwerereceivedsalineinjection.
Then,theheart—weight(HW),leftventricularweight(LVw),theratioofHW/BWandLVw/BW(LVI)weremeasured:thecontent
ofhydroxyprolineandangiotensin(Angl1),thelevelofnitricoxide(NO)andtheactivityofNa,K一An)aSeandCd一ATPaseinleft
ventricleweredeterminedbyspectrophotometryandradioimmunoassayrespectively.Results:InISOmodelgroup,HW/BW,LVIandthe
contentofhydroxyprolineandAnglIinleftventriclemarkedlyincreased;thel
evelofNOandtheactivityofNa,K一ATPase,
Ca2一AT—
Paseintheleftventricleweredecreased.TreatmentwithPNSsignificantlyred
ucedtheHW/BW,L,vI,decreasedtheI1gIIandthehy—
droxyprolinecontent.increasedthelevelofNOandtheactivityofNa,K一ATPaseand一ATPase.Conclusion:PNSw勰sh0帅to
preventremodelingofmyocardialhypertrophyinducedbyISOinrats.
KeywordsTotalSaponinsofPanaxnotoginseng;isoproterenol;myocardialh
ypertrophy
铁筷子多糖对S180细胞周期及增殖能力的影响
刘维英,潘兴斌.刘昕
(兰州大学第一医院;M-州大学基础医学院病理生理研究室.兰州730000)
摘要目的:观察铁筷子多糖(?,Ps)对体外培养的Sls0细胞增殖能力及对细胞周期的影响.方法:建立SI舯体外细胞培养
体系,用MTT比色法在12h,24h,36h,48h时间点观察从t--8g/L4个倍数浓度的I-IFPS对SI鲫细胞体外增殖的影响;用流式细胞
计量术
lg/L浓度的HFPS在不同作用时间点对80细胞周期的影响.结果:HFPS对体外培养SI80肉瘤细胞的抑制率在1,
中药药理与临床2005;21(4)
8g/I内呈剂量依赖性,其抑制作用在24h最为明显,24h点
lg/L,2g/L,4g/L,8g/L的HFPS体外抑瘤率(%)分别为8.5?1.55,10.
2?1.78,58.6?3.25,75.5?3.54.HFPS作用后Sl80细胞周期GO—G1百分比增高,S期百分比下降,细胞多被阻断在GO.G1期,尤
以24h点最为明显.
关键词铁筷子多糖;SI80;细胞增殖;细胞周期
实验
明铁筷子多糖(哪PS)能抑制小鼠体内移植瘤生
长【1--4】,激发细胞免疫功能,刺激淋巴细胞增殖,增加IL一2,
TNF-a,IFN一等细胞因子的含量.增加淋巴组织中的巨噬细胞
数量,并提高其吞噬功能等【5?1;还能增加循环中的超氧化物岐
化酶(S0D),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性,降低脂质过
氧化产物丙二醛()含量.
1
与方法
1.1试验药物HFPS同前报【】-6].
1.2抑瘤实验体外细胞增殖能力测定:用MTT法.每孑L
103,10个细胞接种于96孔培养板中,每孔体积200ul,分别加
入不同浓度(1g/L,2g/L,4g/L,8g/L)的实验药物(对照组用同
体积的生理盐水).将培养板移入CCh孵箱中,在5%C37?
充分湿化条件下培养.分别在培养8小时,20小时,32小时,44
小时后每孔加入MTT溶液(5mg/ml,10%)20”1.37?继续孵育
4小时,1000rpm离心5分钟然后弃去孔内培养液.每孔加入
150~1DMSO,振荡10min使结晶充分溶解,在多功能酶联免疫
检测仪上测定光吸收值,测定波长为490nm,参考波长630,
690nm,测定各孔光吸收值,
结果.共重复三批.
细胞存活率=试验组光吸收值/对照组光吸收值Xl00%
抑瘤率=1一细胞存活率
1.3细胞周期检测根据上述抑瘤实验结果,实验组HFPS采
用lg/L及对照组(用同等剂量的生理盐水)细胞在培养12h,
24h,36h及48h后分别离心收获.用70%冷乙醇固定24小时,
后用PBS清洗除去乙醇,加50ug/mlPI染液lml染色30min,
400目网过滤后上流式细胞仪检测(美国CoNter公司EPICS
XL型流式细胞仪)激发光488nm,发射光585nm测定DNA含
量,计算细胞周期各时相的百分比,按下列公式计算增殖指数,
以此衡量细胞的分裂活动:
PI+(S+C)/(Gll/GI+S+(/M)
2结果
2.1I-tFPS对Sl舯细胞体外增殖能力的影响HFPS对体外培
养的Sl舯细胞增殖具有一定的抑制作用,在1,8g/L范围内呈
剂量依赖性;作用时间在12,24小时抑制率上升,但此后并未
延续这种趋势,36小时百分抑制率反而较24小时下降,48小时
则更低;尤以小剂量的I-tFPS(tg/【,2L)抑瘤率在36小时后
下降明显,lg/L剂量组在48小时细胞存活率接近对照组(未用
药组),抑瘤率近零,可能与药物半衰期有关,见表1,图1.镜下
观察显示,对照组细胞的生长速度极快.在培养24小时集落形
成达高峰,镜下见细胞颗粒饱满,折光性强,表现了极大的生命
力无特定规律性,但在24小时下降明显;增殖
指数(PI)在24h及36h明显下降.I-tFPS在不同的时间点对细
胞周期构成影响也有不同,以24h改变最为明显,与组内其他时
『白J点相比,24hGO—G1期比例上升,G2+M期36h百分比例下降,
但S期比例无明显差别.还可见在24h后,发生改变的各期比
例虽然渐有恢复,但36hGO—G1期,S期及PI与对照组相比有
显着差别;48h时S期比例变化尚有统计学意义,GO—G1,G2+M
比例及PI与对照组已无明显差别.综上NA合成期
(S期),DNA合成后期(G2期)和有丝分裂期(M期),休眠期的
细胞(GO期).在真核细胞的一系列细胞周期检测点中.G1/S
期检测点至关重要,细胞在该检测点对各类生长因子,分裂原
以及DNA损伤等复杂的细胞内外信号进行整合和传递,决定
细胞是否进行分裂,发生凋亡或是进入G0期,许多抗癌药物都
是通过抑制此关键点而起作用的【7J.我们用流式细胞仪检测
HFPS作用后的sI80细胞周期发现,GO—G1百分比增高,细胞多
盘…DNACont?t
流式细胞仪下S细胞培养24h的I)NA含量(PI染色)
图3对照组(未用药组)
被阻断在GO.G1期,S期百分比下降,可见卜?,PS可引起细胞周
期在特定点发生阻滞,但其分子机制并不明确.在本实验中,
药物作用24h后,细胞周期的上述变化则不明显,甚至有恢复趋
势,其可能机理为24h后不再追加药物时,药物作用逐渐削弱,
处于GO—G1期的细胞,有机会进行损伤的DNA的修复,细胞的
分裂增殖能力再次增强;另外,损伤的细胞膜逐渐修复,暴露抗
原逐渐减少.细胞膜生化特性随之恢复,表现为24h后各周期百
分率渐接近于同期对照组;不能修复者则退出增殖周期,进入
凋亡阶段.此结果与M1vr抑瘤实验结果相符.
本研究表明,HFPS对sI80细胞多被阻断在GO.G1期,导致
细胞G1--~S期转换受阻,S期百分比下降,使得细胞DNA合成,
复制受到抑制,更多细胞的分裂循环过程被阻断,肿瘤细胞增
殖能力降低.此结果在体外MTT抑瘤实验中得到了证实.可
见,HFPS能通过影响细胞周期构成而改变肿瘤细胞特性.
图4HFPS作用组
参考文献
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三七总皂苷对肝纤维化小鼠TNFa及IL一6活性的影响
余万桂,张恒文
(长江大学医学院,荆州434000)
摘要目的:观察三七总皂苷对肝纤维化小鼠血清中TNFd及IL-6活性的影响.方法:用C(复制小鼠中毒性肝纤维化
模型,ELISA法测定血清TNFa和IL-6,并行肝脏病理检测.结果:三七总皂苷能减轻肝纤维化程度,降低肝纤维化小鼠血清中
TNFa和IL-6的水平.结论:三七总皂苷具有抗肝纤维化作用,其机理可能与降低血清中TNFa和II,6的水平有关.
关键词三七总皂苷;肝纤维化;TNFa,IL-6
近年研究表明,活血化瘀中药可以逆转肝纤维化过程[.已有研究表明,三七总皂苷对四氯化碳(0)诱发小鼠血清谷
鲫?如们如mO