【doc】人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的
达
人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的表达
中国限耳鼻喉科杂志2O02年第2卷第3期l47
人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的表达
赵燕玲’柳端夸张勇…芦志达…
【摘要】目的探讨不同型人类乳头瘤病毒
(humanpapilfomavirus.}I}v)DNA在喉乳击瘤中的作用.方法用多聚
酶链反应(ynmtus~chait~,鼎0n,PCR)厦原位杂交(insituhyhfidimn,ISH)
方法对喉乳头瘤病(1aryngealpapillomatosis.
LP)不同标本拴疆6.10倒鳞癌标本对照.结果PcR
结果显示35/36瘤体标本HPV6b/l1阳?陆.l0,36例瘤体标
本6h/1l和16/18同显阳性.3/7例瘤旁正常组织标本,5/5例碳化标本以厦1/4烟雾标本HPV6h/l1阳性.ISH检测
鲒果显示瘤体27,36例HPV6b/l1阳性,2例l6型f13性,l例18型f13性.鳞癌对照组中HPV16,18f13性各1例;无6b/
1l阳性者.结论我们研究认为LP中}I}v感染以6b/I1为主.步部分伴16118型.而后二者更倾向于与恶性肿瘤
厦LP恶变有关LP瘤旁组织厦c02激光碳化气雾存在HPV
【关键词】喉乳岳瘤病;人类乳岳瘤稿毒:多聚酶链反应;原住杂交;c激光
TileexpressionofI一DNAinlaryagealpal0l?咄
ZIIAOYarding.L1UI枷.ZHANGYang,(Depa,~nent.自z咄,EEArY且l
础f.
FadanUnizer~y.Sha,rghai200031.Odna)
【Ab~a-aet】Pllrp惦
eTodetemtinethepossibleassociationbetweenthevarioustypesofHPVwithLP.Methodsu她
PCRandISHtOdetect刖DNAinvarietyoflaryng~papill~tissues,and10hIy铲~!tmmouscarcm,maa1as
cora~llinggroupResultsThemsdbofPERshowed35136cas档?
positiveforHPVt:q~e6b/lland10/36cases,~vcuep0si—
bvehHPV6b/11and16/183/7adjacent/IO137/1~specimen,5/5lasers吡
rymnir.gtissuessatd1/4collaserpe.p一
l12~nwep~sidveforHPVtype6b~11.nresults0fISHshowed27,36waspositivefor6b/11.2ofwhichwereD0veforHPV16
and1forHPV18,respectively.OfterLlar~gealsql?uscarcinomaspeeimem.18type.NoHPV6b/11?foundinanyll1alj.
gantspecimen,C.~dusionOurfindingsuggestflaatthe}DNA6b/11isthedominatetypeintheLPtissuse.and16/18
typeisseldomfoundinLPbuthasacloserassociationwithmalignantlesions.}口VDNAexistsinLPadjacentnormaltissueand
claser蛔.
【Keywords】】目ealpapil~atosis;HPV;PCR;1SH;mlaser
喉乳头瘤病是一种鳞状上皮非浸润性生长的良
性肿瘤.由于其临床行为的不确定性给治疗带来较
大困难,目前尚无特效方法.本研究目的:(1)利用
多聚酶链反应(polymeraseo,h~nreaction,PCR)及原位
杂交(inshuhybridism,ISH)方法对青少年型及成人
型的LP组织的不同标本进行检测,寻找不同型人类
乳头瘤病毒(humanpapilloma.virus,HPV)DNA对【|P
临床发生,发展的影响及相关联系;(2)探讨【|P患者
瘤旁组织及c激光术后HPV潜在感染可能.
材料与方法
1.标本来源
LP所有实验标本选自1995年1月,1996年1
月北京同仁医院耳鼻咽喉科收治的I患者36人
次,其中青少年(JOP)组(<20岁)2l例,成人(AOP)
组(>20岁)15例.另采取瘤旁约1?以外肉眼正
常组织标本7例,二氧化碳激光手术烟雾标本4例.
碳化组织标本5例.喉鳞癌对照标本10例.全部
*复f]大学附属跟耳鼻喉科医院上海2/X]031
北京同仁医院’.耳鼻喉科…病理科北京1Glib05
LP喉鳞癌病例均经同仁医院病理科证实.
2.标本采集方法:
瘤体标本:所有瘤体标本均采自全麻支撑喉
镜下,肉眼所见喉部乳头状瘤瘤体部分.将瘤体组
织一式2份,1份行PCR检测,另1份ISH检测.瘤
旁正常组织:为肉眼所见喉部瘤旁约1cm非瘤体处
正常黏膜行PCR.二氧化碳烟雾标本:无菌海绵经
二氧化碳烟雾吸引器吸附烟雾行PCR,注意勿吸引
分泌物.碳化组织为术野中碳化组织,注意避免与
瘤体接触.鳞癌标本:取自经同仁医院病理证实的
组织切片.
3.实验方法:
PCR检测法:引物
合成由中山大学卫生部
医药中心PCR技术推广应用中心设计台成:HPV6t
l1引物:5’一GTGGGCGAACG’IETCCCTGA3’.5’.TGD.
AGCATIqEGGGCCAGC,CG-3’,目的扩增片断438bp.
HPV6/18弓I物:5’.”W,GTGCCATGcACATcAGGAcA.
3’,5’-T?ACAG(兀’交,洗涤染色,最后结果判定;HPV
感染阳性细胞表现为核内显示紫蓝色颗粒.
结果
1临床资料分析:本课
共采集36份新鲜LP
肿瘤组织标本,其中男性22人,女性l4人.男女比
为1.6:1;年龄l0个月,72岁,按目前临床普遍应
用的Lmdeberg分类法0分为JOP(<20岁,共21人
次)与AOP(>20岁,共15人次).本课题中有2例
既往有明确lJIJ病史并经同仁医院病理科多次证实.
此次以lJIJ复发人院治疗,术后病理诊断为喉鳞状上
皮细胞癌,故仍计人AOP组.
2.PCIt检测结果:瘤体:6b/11阳性率97%(35/
36),1例单纯16/18阳性(3%);此外,IO例为6b/ll
及16]18双重阳性;HP~阳性表达JOP组与AOP组
经卡方检验p>0.05,差异无显着性;性别在HPv阳
性表达上差异无显着性.7例瘤旁正常组织,3例
HPV6b/11阳性,其中1例合并16/18型阳性.5例
碳化标本HPV6b/11均阳性.4例烟雾标本中,1例
H~W6B/1I阳性;其余为阴性.
表1PCR检测HPVDNA分布
*其中1倒台并16118型阳性
3.IsH结果:
lJIJ:HPV—DNA阳性表达共3O例(83%),其中
6b/11阳性75%(27/36),包括6b/11+16阳性1例;
6h/11+18阳性2例.另HPV16阳性2例;18型阳
性J例.鳞癌:lO例喉鳞状上皮癌中,HPV16,18阳
性各有J例;无6b/11阳性者(详见表2).
表2ISH检测HPVDNA分布
*包括6b/11+16阳性1例,6b/l1+18阳性2例
讨论
喉乳头瘤病(IJlJ)以其I临床行为的不确定性以
及在不同年龄组中病情转归的差异,一一直为I临床难治
的疾病之.人们曾试图从不同角度研究相关因
素,以期能找出可以预知其临床行为的方法.到目
前为止已知HPV感染为重要的发病原因.既往许
多报道中,lJIJ中I-1PV主要以6,11型感染多见】.
Dickeaa等于1991年首次报道lJIJ组织中检出HPV16
型,而另方面大量研究证实在喉及呼吸道其他
部位的鳞癌,疣状癌,生殖系统肿瘤中发现HPV感
染以16,18型常见;因此一般认为HPV6,11型为”低
危型”而HPV16,18属”高危型”.本研究显示在lJIJ
中HPV有很高的阳性表达,证实HPV与lJIJ的密切
相关性;而这其中又以6b/11型为主,极少部分为,伴
I6或l8型.本课题中有3例经ISH检测伴l6或l8
型阳性,其中1例18型阳性者为术后证实恶变的
LP;在对随机选出的lO例喉鳞癌检测发现各有1例
HPV16或I8阳性;相对于喉癌中6b/1I型全部阴性
表明I6和/或18型HPv感染与恶性肿瘤的关系更
密切.本研究认为对这二型阳性患者临床更应密切
随诊.
关于呼吸道正常组织中HP~的潜在感染已陆
续有报道.我们注意到本研究中:(1)瘤旁组织中4
例梭出HPv感染,且与瘤体HPV同型,继而推测
HPv潜在感染在lJIJ复发中起某些作用;(2)有研究
认为,在激光作用的周边组织出现细胞的溶解,故而
激光作用的组织及其周边接壤的细胞出现不可逆损
害.而远离激光作用区域的细胞损害则为可逆
的.本组采集的5例术后碳化标本全部显示HP~
与瘤体的感染同型.在除外标本被污染的基础上,
强烈提示二氧化碳激光手术后虽然已除肿瘤,但
局部仍然有HPV病毒存在.高温并不能完全破坏
病毒DNA,为|?病毒潜伏提供了证据.从另一角
度解释了为什么二氧化碳激光手术并不比常规手术
切除更有效的减少LP肿瘤的复发.本课题所收集
的4例烟雾标本中1例为HPV6b/11阳性,虽然收集
(下转第150页)
曩J_1
中国跟耳鼻喉科杂志2002年第2卷第3期
矫正,影响鼻窦的引流而易发生鼻窦炎”.时于前
次手术失败病例作鼻窦cT扫描和鼻内窥镜检查,
未能矫正的偏曲部位并发鼻腔或鼻窦病变;?
手术时将鼻中隔软骨脱位,或仅切除部分偏曲软骨
而将中隔推直,有时固偏曲的软骨切除不足,两侧鼻
腔填塞力量不对称,鼻外伤等而弹原位致矫正失
败;@对于鼻中隔偏曲或矫正术后伴随的鼻甲代偿
性肥大,术后鼻腔粘连等处理不全面,都会影响通气
或鼻塞加重,使手术达不到原有效果.
由于前次手术而使鼻中隔黏软骨膜或黏骨膜粘
连紧密,如再由鼻腔径路势必存在着术野小,出血
多,分离暴露困难等缺点.再次手术不仅要解决偏
曲问题同时应该避免造成鼻中隔穿孔等损伤.因
此我们大多选择在鼻内窥镜下或鼻小柱翻揭径路完
成手术.鼻内窥镜下鼻中隔手术由于视野清楚,创
伤小等优点,国内外皆有成功经验.切口可选择
在鼻中隔骨与软骨交界处或接近偏曲处使损伤范围
小.我们通过临床实际操作体会到鼻内窥镜同样适
用于鼻中隔偏曲的再次手术,但由于前次手术后粘
连的限制,切口通常选择在偏曲未矫正处的后方约
2n’tm处,切开黏膜后可以向前,向后分离暴露偏曲
的骨或软骨边缘,因为有鼻中隔软骨或骨的支撑作
用使分离易于进行.本组病例中有7例在鼻内窥镜
下手术,并同期处理窦口鼻道复合体,鼻窦病变,均
取得满意效果.
经鼻小柱翻揭径路可以扩大手术视野使操作在
直视下进行,便于准确地在黏软骨膜和黏骨膜下分
(上接第148页)
的样本量尚不能对气雾中HPv含量及危害做出准
确的判断,有待今后加大样率量,但认为在进行与
HPV感染有关疾病的二氧化碳手术时采取保护措
施,对减少患者,术者及手术中其他工作人员的潜在
感染无疑是有益的.
根据以上研究结果认为:(1)LP与HPV感染有
极为密切的关系,且以留手术糖痕的影响,
因此我们不主张适用于女性或具有瘢痕体质的患
者.鼻腔径路适用于鼻中隔单纯棘状突起且对侧无
凹陷者,可以直接在棘突处分离暴露,将其凿除即
可.
固鼻中隔偏曲而造成的鼻腔解剖结构异常或鼻
甲的代偿性肥大,以及手术操作不当或鼻腔填塞易
造成局部粘连,本组病例中就有类似情况发生所
以我们在再次手术后采用指套填塞,保证新鲜创面
的隔离和避免粗糙填塞物对鼻腔黏膜的损伤,以免
发生再粘连而影响手术效果.
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(收稿日期20011l一13)
(本文编辑:蓝士熊)
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(本文编辑:蓝士熊)